TM-040201纯化水检验方法

1、written/revised by 起草/修订人：approved by qcqc经理审核：approved by qaqa经理批准：date日期：date日期：date瞧test检验test method 检验方法1.性状取样品30ml置于50ml比色管中，鬥视观察，应为无色的澄清液体；无臭，无味。2.酸碱度2.1仪器及试剂试管甲基红桁示液浪麝香草酚蓝桁示液2.2检验操作取样品10ml置于试管中，加甲基红指示液2滴，0视观察，应不得显红色；另 取样品10ml,加溴麝乔草酚蓝指示液5滴，0视观察，应不得显蓝色。3.硝酸盐3.1仪器及试剂试管10%鉍化钾溶液0.1 %二苯胺硫酸溶液硫酸标准硝酸

2、盐溶液3.2测定步骤取样品5ml置于试管中，于冰浴中冷却，加10%氯化钾溶液0.4ml与0.1%二苯 胺硫酸溶液0.1ml,摇匀，缓缓滴加硫酸5ml，摇匀，将试管置于50°c水浴中15 分钟，溶液产斗:的蓝色与标准硝酸盐溶液【称取硝酸钾0.163g，加水溶解并稀 释牛:100ml,摇匀，精密虽取1ml，加水稀释成100ml，冉精密fi取10ml，加水 稀释成100ml，摇匀，即得（每1ml相当于1mgno3）】0.3ml，加无硝酸盐的 水4.7ml,用同一方法处理后的颜色比较，不得更深（0.000006%）。4.亚硝酸盐4.1仪器及试剂纳氏比色管对氨基苯磺酰胺盐酸萘乙二胺标准亚硝酸盐

3、溶液4.2测定步骤取样品10ml，置于50ml纳氏比色管中，加入对鉍菽苯磺酰胺的稀盐酸溶液（1 ->100） 1ml,及盐酸萘乙二胺溶液（0.1 100） 1ml,摇匀，产生的粉红色，与 标准亚硝酸盐溶液【取亚硝酸钠0.750g （按干燥品计算），加水溶解，稀释至 100ml，摇匀，精密虽取1门1，加水稀释成100ml,摇匀，再精密fi取1ml，加水 稀释成50ml，摇匀，即得（每1ml相当于1|jgno2）】0.2ml，加无亚硝酸盐的 水9.8ml，用同一方法处理p的颜色比较，不得更深（0.000002%）。5.氨5.1仪器及试剂50ml比色管碱性腆化汞钾试液鉍化铵溶液碱性碘化汞钾5.

4、2测定步骤取样品50ml,置于50ml比色管中，加碱性碘化汞钾试液2ml，放置15分钟;如显色,与氯化铵溶液（取氯化铵31.5mg,加无氨水适量使溶解并稀释成1000ml） 1.5ml,加无鉍水48ml与碱性碘化汞钾试液2ml制成的对照液比较，不得更深 （0.00003%） o6.易氧化物testtest method检验检验方法6.1仪器及试剂烧杯稀硫酸高锰酸钾滴定液(0.02mol/l)6.2测定步骤取样品100ml,置于烧杯中，加稀硫酸10ml,煮沸活，加高锰酸钾滴定液 (0.02mol/l) 0.10ml,再煮沸10分钟，粉红色不得完全消失。7.不挥发物7.1仪器及试剂分析天平(精度0

5、.0001g) 蒸发iiil 鼓风干燥箱量筒7.2测定步骤取样品100ml，置于105°c択重的蒸发皿屮，在水浴上蒸干，并在105°c干燥至 恒遗留残渣不得超过1mg。8.重金属8.1仪器及试剂量筒醋酸盐缓冲液硫代乙酰胺试液标准铅溶液8.2检验操作取样品100ml，加水19ml，蒸发至20ml，放冷，加醋酸盐缓冲液(ph3.5) 2ml 与水适m使成25ml,加硫代乙酰胺试液2ml,摇匀，放置2分钟后，与标准铅 溶液1.0ml加水19ml用同一方法处理后，同置白色或镜面背景上，自上向不透 视，样沾管中显现的颜色与对照w管比较，不得更深(0.00001%)。9.电导率検测依照

6、巾岡药典2015版四部通则0681操作。10.微生物限度10.1仪器及试剂生化培养箱洁净工作台医川冷藏箱电动吸引器无菌三角瓶无蘭滤膜 无菌滤杯无菌微生物限度过滤支架无菌刻度吸管无菌0.9%氯化钠溶液 r2a琼脂培养基培t板10.2检验操作10.2.1 沾净工作台的使用参照sop#:qc-2009.00,微生物限度过滤支架的 使用参照sop#:qc-2205.00,电动吸引器的使用参照 sop#:qc-2215.00。10.2.2 若不能立即检测样品，可将样品放置于医用冷藏筘屮，保存时m不超 过4h。10.2.3 进入洁净的微生物限度室，在洁净工作台上取纯化水10ml于90ml 无菌的0.9%氯

7、化钠水溶液(ph7.0)中混匀，作为供试液。将无菌滤杯、完整滤膜安装于无菌的微生物限度支架上，用ph7.0无 菌0.9%鉍化钠溶液润湿滤膜，取不少于10ml供试液于滤杯屮过滤， 冲洗ph7.0无菌0.9%氯化钠溶液30ml，冲洗后取出完整滤膜，菌面 朝上贴于r2a琼脂培养基上培养，每个样至少制备一张滤胶，滤胶 贴于培养肌上时不得有空隙或气泡。用ph7.0无菌0.9%氯化钠溶液 代替供试液照上述操作，作为阴性对照。test检验test method 检验方法10.3培养和计数10.3.1培养皿倒置于3035°c生化培养箱中培养不少于5天，在培养3天点计培养皿生长的所奋苘落数，如菌落极小

8、，不易辨认，菌落计数4 以延氏至.7天，再点计齒落数，必要时用放人镜或低倍显微镜直接观 察，或挑取可疑物涂片镜检。10.3.2 菌落蔓延生长成片的培养皿不立计数，若培养皿上有2个或2个以上 菌落重叠，肉眼可辨别吋仍以2个或2个以上菌落计数；若培养皿中 长有链状或片状、云雾状菌落，菌落间无明显界限吋，一条链、片作 为一个菌落计，似若链、片上出现性状与链（片）状尚落不同的可辨 菌落时，仍应分别计数，若生长蔓延的较大的片状菌落或花斑样菌落, 其外緣奋若干性状相似的单个菌落，一般不宜作为计数川。10.3.3 荫落生长呈蔓延趋势者，需在24h或48h做初步点计（点计霉菌荫落 时轻轻翻转培养皿，勿反复翻转

9、）。10.3.4 每张滤膜上的菌落数不应超过100cfu,若行的两个培养皿菌落数 均值不小于15,则两个培养皿的菌落数不能相差1倍或以上。10.4菌数报告11.控制菌 11.1仪器及试剂计算1ml纯化水所含的需氣菌总数，需氧菌总数不得过100cfu，阴性对照应无 菌生长；若滤膜上无苘落生长，以1 cfu/ml报告菌落数。生化培养箱洁净丁.作台医用冷藏箱电动吸引器紫外灯无菌微生物限 度支架无菌滤膜无菌滤杯无菌刻度吸管无菌培养皿无菌三角瓶无 菌胰酪人豆胨液体培养基无菌0.9%鉍化钠溶液无菌麦康凯液体培养基无 荫麦康凯琼脂培养基无谢mug培养基无尚蛋0胨水培养基无谢磷酸盐葡 萄糖胨水培养基无菌枸橼酸

10、盐培养基綻基质试液甲基红试液。-萘酚试液 40%氢氧化钾试液11.2增菌培养取纯化水10ml于90ml无菌的0.9%氯化钠水溶液（ph7.0）中混匀，作为供试 液。取胰酪人豆胨液体培养基3份，每份各100ml。第一份加入10ml供试液（相 当于样晶1ml）混匀，笫二份加入与供试液等跫的无菌的0.9%氯化钠溶液作为 阴性对照，笫三份用10ml菌虽为10100cfu大肠埃细菌干100ml胰酪大豆胨 液体培养基中作为阳性对照。3035°c培养1824小时。阴性对照应无菌生长, m性对照应有菌生长，培养基混浊，有沉淀。11.3分离培养取上述培养物1 ml接种至100ml麦康凯液体培养基屮，4

11、244°c培养2448 小吋。同法阴性对照、阳性对照，阴性对照应无菌生长，培养澄清，呈紫色； 阳性对照极存菌生长，培养基混浊，呈黄色，杏沉淀。収麦廉凯液体培养物划线 接种于麦康凯琼脂培养基t板上，3035'c培养1872小吋。同法阴性对照， 阳性对照；阴性对照极无菌生长，阳性对照麦康凯琼脂培养基平板上的人肠埃希 荫谢落应呈鲜桃红色或微红色，蘭落屮心呈深桃红色，圆形、扁t，边缘整齐， 表光滑，湿润。test检验test method 检验方法11.4革兰氏染色以接种环蘸取无菌的0.9%鉍化钠溶液丁洁净无划痕的载坡片上，取上述疑似茼 落的麦康凯琼脂培养难平板新鲜培养物少许，制成均

12、匀涂片，自然或微温干燥， 再通过火焰23次固定。在载玻片的谢斑上滴加结晶紫染液，染色1min,水洗。 滴加碘液，媒染1min,水洗，以滤纸吸t余水。滴加95%乙醇，严格控制吋间 脱色2030s,水洗。滴加沙黄染液（复红染液），复染1min,待干后，镜检。 镜检结果：革兰氏阳性苘呈蓝紫色，革兰氏叨性荫钻红色：大肠埃希荫形态：大 肠坆希菌为革兰氏阴性短杆蘭或球杆蘭，亦有杆尚状；1.11.5x2.06.0pm, 单独或成对，有鞭毛，能移动。11.5分离纯化若麦康凯琼脂培养基板上有菌落斗:长，分别挑取可疑菌落（革兰氏明性杆菌）3 个以上菌落于100ml麦康凯液体培养基中，4244ac培养2448小时；

13、如果麦 康凯琼脂培养基平板上无单个可疑茼落，似有可疑荫团（革兰氏阴性杆荫），则 应蘸取可疑齒团培养物少许，同上述操作。用无歯的0.9%氯化钠溶液作为阴性对 照，同法操作，阴性对照应无菌牛.长；挑取上述阳性菌落于100ml麦康凯液体培 养基中作为阳性对照，同法操作，阳性对照应正常生长（同“11.3分离培养”）。 取麦康凯液体培养物分别划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，3035"c培养 1872小时；阴性对照、阳性对照同法操作，阴性对照应无齒生长，阳性对照麦 康凯琼脂培养基t板上的大肠埃希菌菌落呈鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃 红色，阏形、扁平，边缘整齐，表側光滑，湿润。11.6 mu

14、g与靛基质11.7 imvic 试验取上述麦谈凯液体培养物0.2ml，接种至一支含5mlmug培养基的试管内，温度 3035°c培养，于5hr和24hr吋在30356nm紫外灯光k观察，同吋用未接种 的mug培养基作为木底对照。在紫外光下若管内培养物呈蓝白色災光，则为mug 阳性；不呈现荧光，则为mug阴性。观察f，沿着培养管的管壁加入数滴錠基 质试液，若液血呈攻瑰红色，则为靛基质阳性；若呈试剂木色，则为錠基质阴性。 木底对照的mug和靛基质试验hv:为阴性。样品培养物屮，任何一支mug培养 雉和錠®质呈阳性，则此样品mug和錠®质试验为阳性。苦mug阴性靛雄质

15、阳性或mug阳性靛基质阴性、麦康凯琼脂培养基平板上科可疑菌落（茁兰氏阴 性杆菌）吋，进行imvic试验。11.7.1 靛基质试验（i）収上述麦谈凯琼脂培养基平板上培养物，接种于蛋白胨水培养基屮， 温度3035'c培养2448hr，沿管壁加入靛基质试液数滴，轻轻摇动 试管，液而呈玫瑰红色为叫性，呈试剂本色为明性。98%的大肠埃希 菌靛基质试验为阳性，一般24hr即可出现阳性结果，以无菌操作先 从管屮収出1ml或2ml培养液进行检査，如靛基质阴性，余下的蛋白 胨水培养物再培养24hr,做錠基质试验。芄屮一份样品检杏呈阳性， 即样品錠基质试验呈阳性。m2 甲基红试验（m）収上述麦庞凯琼脂培养

16、基y板培养物，接种于磷酸故葡萄糖胨水培养 基屮，温度3035°c培养48±2hr,于培养液屮加入甲基红指示液23 滴（约每1ml培养液加指示液1滴），轻微摇动，立即观察，呈鲜红 色或橘红色为阳性，呈黄色为阴性。m:屮一份样品检杏呈阳性，即样 品甲基红试验呈阳性。test检验test method检验方法11.7.3乙酰甲基甲醇生产试验（v-p）取上述麦康凯琼脂培养基t板培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养 菽中，温度3035°c培养48±2hr,于2ml培养液中加入a-萘酚乙醇 试液1ml,混匀，再加40%氢氧化钾试液0.4ml，充分振摇，在4hr （通常

17、在30min吋）内出现红色判为阳性，无红色判为阴性。其中一 份样品检查呈阳性，即样品乙酰甲基甲醇中产试验呈阳性。11.7.4 枸橼酸盐利用试验（c）取上述麦康凯琼脂培养基平板培养物，接种于枸橼酸盐培养基斜面 上，温度3035'c培养24天，培养基斜面有菌苔生长，培养基山 绿色变为蓝色吋，判为阳性，培养基颜色无变化、无菌苔生长，判为 阴性。其巾一份样品检查足阳性，即样品枸橼酸盐利用试验呈阳性。11.8结果判定11.8.1 麦康凯琼脂埼养菽平板.h冇菌落生长当阴性对照试验足阴性，阳性对照试验mug呈阳性、靛基质w性， 样品mug阳性、錠菽质阳性，报告1ml纯化水检出大肠埃希菌；样 品mug

18、阴性、錠基质阴性，报告1ml纯化水未检出人肠埃希菌。当 阴性对照试验呈阴性，阳性对照试验mug呈阳性、錠葙质阳性，样 品mug阳性、錠基质阴性、imvic试验为革兰氏阴性杆 菌，报告1ml纯化水检出大肠埃希菌；样品mug阴性、錠葙质阳性、 imvic试验为革兰氏阴性杆菌，报告1ml纯化水检出大 肠埃希歯。11.8.2 麦康凯琼脂培养基平板.卜.无菌落生长当阴性对照试验呈阴性，阳性对照试验mug呈阳性、靛基质阳性， 报告1ml纯化水未检出大肠埃希菌。11.8.3 样品培养物检杏不符合上述屮的任一项，报告1ml纯化水未检出人肠 埃希菌。11.8.4 当阴性对照存菌生长或阳性对照未有菌生长或存菌生长但非人肠坎drs索引希菌，不能做出检验报告。drs#题0drs-0402-1