[精品]植物组织培养母液的配制与保存

1、植物组织培养母液的配制打保存植物组织培养母液的配制与保存一、实验目的使学生熟练寧握植物组织培养中各种成分或成分组的母液（比需要最大若干倍）的配制方法。二、实验仪器电子天平（感量为o.oochg）、一般天平（感量为0.1g）、烧杯100ml50 ml25ml）.量筒（1000 ml 100 ml50ml） 容量瓶 200 ml 100 ml50 ml25 ml）、细口瓶（500 ml200 ml 100 ml50 ml）、药勺、玻 棒、电炉等。三、实验试剂按培养基配方准备四、实验原理一）培养基的组成培养基是植物组织培养中的“血液”，血液的成分及其供应状况直接关系到培养物的生长与分化，因此了解 培

2、养基的成分、特点及其配制至关重要。自然状态下生长的绿色植物山于自身能进行光合作用，并h能合 成植物生长发育所需的几乎所冇冇机成分，加上土壤中含冇较全面的无机和有机营养成分，所以只需在适 当的时候施加少量的无机和冇机肥（复合成分），植物就可良好的生长。目前所使用的培养基冇10余种z 多，人部分都是在前人研究的基础上经过分析综合和改进而成的。例如，white培养基是uspenski和 uspenskaia （1925）的藻类培养基演化的结果，被广泛川于根的培养；cautheret培养基是建立在knop 营养液（1865）基础上的。以后的培养基大部分是在white和cautheret培养基的基础上改

3、进而成。就口前所使用的各种培养基而言，可将它们的成分划分为几人类，常用的冇ms、b5、和white培养基 等。1. 水水是梢物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。配制培养基母液时要用蒸佛水， 以保持母液及培养基成分的粘确性，防止储藏过程发得变质。大规模生产时可用口来水。但在少量研究上 尽量用蒸憎水，以防成分的变化引起不良效果。2. 无机营养成分：人量元素，主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种微量元素：培养基的微量元素主要包括铁（fe）、钮（mn）、铜（cu）、锌（zn）、氯（ci）、硼（b）和钳 （mo）等。这些元索有的对生命活动的某个过程十分有丿u，有的对蛋口质或酶的生物活性十分

4、重要，有的 是参与某些生物过程的调节。3. 冇机营养成分（包括维生素，氨基酸及其它冇机物质等）维生素：硫氨素（维生素b1）盐酸i此哆醉（维工素b6）和烟酸在部分培养基中还添加维生素bx （氨酰 苯屮酸）、维生素c （抗坏血酸）、维牛素e （生育酚）、维生素h （生物素）、维生素b12 （氛钻胺酸）、维 生素bc （叶酸）、维生素b2 （核黃素）、泛酸钙和氯化胆碱等维生素。氨基酸：甘氨酸（氨基乙酸）和肌醇（环己六醇）也是一些培养基的添加成分。其他：在某些植物或某些组织的培养中还加冇水解乳蛋白、水解酪蛋白、椰子汁、玉米胚乳、麦芽浸出物、 西红柿汁和酵母浸出物等。这些可能对某些植物或植物的某些代谢过

5、程冇重耍作用，如肌醉主要以磷酸肌 醇和磷脂酰肌醇的形式参与由ca介导的信号转导。4. 碳水化合物所有的植物组织培养基都需耍有碳水化合物作为能源，用作碳源的碳水化合物通帘为蔗糖 或d-葡萄糖，用量通常为2%-4%,高者可达5%,亦可用市售的口糖所代替，但一般应增加用量，而且最 好用比较固定的厂家生产的产品，以保证实验的稳定性。5. 植物生长调节物质（常称为激素）：生长索类有：naa （蔡乙酸）、iaa（财味乙酸）、iba|味丁酸）、noa （荼氧乙酸），p-cpa （对氯苯氧 乙酸）、2, 4-d （2, 4二氯苯氧乙酸），2, 4, 5-t （2, 4, 5-三氯苯氧乙酸）等；细胞分裂素类主要

6、冇：从甜玉米未成熟种子或其他植物中分离到的玉米素6（4瓮基3卬基反式2丁烯 氨基）噪吟。人工合成的细胞分裂素主要冇激动素（kt, 6-味喃氨棊ii票吟）、6-茉基腺瞟吟（6-ba）、2ip （界戊烯氨基|票吟）和tdz （thidiazuron,噪二畔苯基眼）等。细胞分裂素常常与牛长素相互配合，用以调 节细胞分裂，细胞伸长，细胞分化和器官形成；赤霉素：主要是ga3,虽然己经用于顶端分生组织的培养和维管分化的研究，但在培养基中很少添加，因 为它的作用往往是负面的；乙烯等。6. 琼脂或其他支持物除液体悬浮培养外，就目前情况而言，琼脂是一种极为理想的支持物。-般浓度0.4%-1%,质量越差的琼 脂用

7、量越大。7. 其他添加剂（含天然提取物、抗生素等）活性炭渗透调节剂 抗生素抗氧化剂等二）培养基的选择选择合适的培养基定植物组织培养成功的基础。选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑：一是基本培 养基；二是各种激素的浓度及相对比例。ms培养基适合于大多数双孑叶植物，b5和n6培养基适合与许 多单子叶植物，特别是n6培养基对禾木科植物小麦、水稻等很冇效，white培养基适合于根的培养。五、实验内容与步骤一）ms大量元素母液的配制一般将大量元素分别配制成10倍的母液，使川时再分别稀释10倍。依次分别称取：nh4no316.5gkno319.0gkh2po41.70gmgso4-7h2o 3.7gca

8、ci2-2h2o 4.4g共配成1l的母液。倒入1l试剂瓶中，存放于冰箱中。二）ms微量元素母液的配制一般将微量元素配制成100倍母液。依次称取：ki0.083gna2moo4-2h2oh3bo30.025g0.62gcuso4-5h2o0.0025gmnso4-h2ococi2-6h2o1.69g0.0025gznso4-7h2o配成1l母液,0.86g倒入1l试剂瓶中,存放于冰箱中。cuso4-5h2o和coci2-6h2o由于称取量很小，如果天平精确度没冇达到万分z，可先配成调整液。分别称取cuso4-5h2o0.05gcoci2-6h2o 0.05g各自配成100ml的调整液，然后取5

9、ml就还有0.0025g的量。三）ms有机质母液的配制般配制成100倍ms冇机母液。依次称取肌酹 10g盐酸硫胺素（vb1） 0.01g烟酸 0.05g 甘氨酸 0.2g盐酸毗哆醇（vb6）0.05g配成1l母液，倒入1l试剂瓶中，存放于冰箱中。四）ms铁盐母液的配制一般配制成100倍ms铁盐母液。依次称取：edta二钠3.73g fil feso4-7h2o 2.78g,配成1l母液， 倒入1l试剂瓶中，存放于冰箱中。所以ms母液有5种大量元素母液，加上ms微量元素母液、ms有机母液和ms铁盐母液,共8种母液。五）儿种生长调节物质的配制各种生长索和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用少量95%的洒精或1当量 的