常用pH缓冲液

1、资料 常用 pH缓冲溶液的配制和pH 值常用 pH 缓冲溶液的配制和 pH值常用 pH缓冲溶液的配制和 pH 值溶序 液pH配制方法号 名值称13.0 ml氯0.2 mol/LHCl 与化25.0 ml钾10.2 mol/L 1.7-KCl 混合盐均匀后，加酸?水稀释至100 ml氨在 500 ml水中溶解基氨基乙酸乙150 g ，加2 酸2.3-480 ml 浓盐酸，再加盐水稀释至酸1L一在 200 ml氯水中溶解乙2 g 一氯酸乙酸后，加32.8-40 g NaOH，氢溶解完全氧后再加水化稀释至 1L钠邻 把 25.0 ml苯 0.2 mol/L二 的邻苯二甲 甲酸氢钾酸溶液与43.6氢

2、6.0 ml 0.1钾 mol/L HCl - 混合均匀，盐 加水稀释酸 至 100 ml邻把 25.0 ml苯0.2 mol/L二的邻苯二甲甲酸氢钾酸溶液与氢517.5 ml4.8钾0.1 mol/L-NaOH混合氢均匀，加水氧稀释至化100 ml钠六在 200 ml亚水中溶解甲六亚甲基基6 四四胺 40 g，5.4胺加浓 HCl10 ml ，再-加水稀释盐至 1 L酸磷 把 25.0 ml酸 0.2 mol/L76.8二 的磷酸二氢氢钾与钾 23.6 ml - 0.1 mol/L氢 NaOH混合氧 均匀，加水化稀释至钠 100 ml硼把 25.0 ml酸0.2 mol/L-的硼酸 -氯氯化

3、钾与化4.0 ml 0.18钾8.0mol/L-NaOH 混合氢均匀，加水氧稀释至化100 ml钠把 0.1氯mol/L氯化化铵与铵90.1 mol/L9.1-氨水以 2：氨1 比例混水合均匀硼把 25.0 ml酸0.2 mol/L-的硼酸 -氯氯化钾与化43.9 ml10 钾10.00.1 mol/L-NaOH混合氢均匀，加水氧稀释至化100 ml钠11 氨把 49.0 11.6基 ml 0.1乙 mol/L 氨酸基乙酸 -氯- 化钠与氯 51.0 ml化 0.1 mol/L钠 NaOH混合- 均匀氢氧化钠磷 把 50.0酸 ml 0.05氢 mol/L二 Na2HPO4与钠 26.9 ml

4、1212.0- 0.1 mol/L氢 NaOH 混合氧 均匀，加水化 稀释至钠 100 ml把 25.0氯ml 0.2化mol/L KCl钾与 66.0 ml-13 0.2 mol/L 13.0氢NaOH混合氧均匀，加水化稀释至钠100 ml一、 常用溶液的配制（一）溶液配制注意事项1药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂， Guaranteedreagent ，GR）、分析试剂（ Antalyticalreagent ，AR）化学纯（ Chemical pure，C P）和实验试剂（ Laboratoryreagent ，LR）等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗

5、液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。2药品称量要精确。3配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50 万欧姆以上， pH 在 5.57.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。（二） 0.067 （ 1/15 ）Mol/L 磷酸缓冲液11/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（ KH2PO4，AR）9.08g ，用蒸馏水溶解后，倾入1 000ml 容量瓶内，再稀释至刻度 （ 1000ml）。21/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无

6、水磷酸氢二钠（ Na2HPO4，A.R. ） 9.47g （或者Na2HPO4·2H2O 11.87g ）用蒸馏水溶解后，放入1 000ml 容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度 （ 1000ml）。3按附表的比例， 配制成不同 pH 值的缓冲溶液。附表 1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升）1/151/15p 1/151/15pMol/Mol/H Mol/Mol/LLLLHNa H KHPNa H KH P2222PO4O4PO4O458.092.07 66.623.4.8159.990.17 72.028.0.926 12.287.87 76.823.2.036 15.384.77 80

7、.819.2.136 18.681.47 84.115.9.256 22.477.67 87.013.0.366 26.773.37 89.410.6.476 31.868.27 91.58.5.586 37.562.57 93.26.8.696 43.556.58 94.75.3.786 49.650.48 95.84.2.816 55.444.68 97.03.0.927 61.138.98 98.02.0.04（三） 0.15Mol/LPB 液附表 2 0.15Mol/LPB液配制法pH 0.15Mol/0.15Mol/L Na 2 HPO4 L NaH2PO4?（ ml）（ ml）6.

8、26.573.546.37.562.566.49.051.087.61.039.007.72.028.027.81.019.047.87.013.06Na2HPO4·2H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含 26.7g/L 。Na2HPO4·12H2O分子量=358.22 0.15Mol/L溶液含 53.7g/L 。NaH2PO4·H2O分子量=138.00 0.15Mol/L溶液含 20.7g/L 。NaH2PO4·2H2O分子量=156.03 0.15Mol/L溶液含 23.4g/L 。（四） 0.2Mol/L PB缓冲液附表 3 0.

9、2mol/L PB缓冲液配制法pH 0.2 Mol/L0.2Mol/LNa2HPO4NaH2PO4（ ml ）（ ml）5.88.092.06.012.387.76.218.581.56.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.07.891.58.58.094.75.30.2Mol/L Na24HPO·2H2O溶液 35.61g/LNa2HPO4·12 H 2O溶液含71.64g/L0.2Mol/LNaH 2PO4·H2O溶液含 27.60g/LNaH2PO

10、4·2 H 2O溶液含31.21g/L欲配 0.1Mol/L PB缓冲液则在 0.2Mol/L PB缓冲液的基础上加H2O稀释 1 倍即可。欲配制 PBS液时，则在溶液中加0.85 的 NaCl 溶液即可。（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（ PBS）（ 0.15Mol/L PH 7.2）NaCl 8.0gKCl 0.2gNa2HPO4 1.15g（如为 Na2HPO4·12H2O，则为 2.89g ）KH2PO4 0.2g将上述试剂依次溶于1000ml 去离子水中，完全溶解后， 115高压灭菌 10min15min ，存在4冰箱中备用。 此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细

11、胞培养物。（六）硼酸盐缓冲液（ Borate saline buffer ）1硼酸（ 3BO3）0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g 加水至 1 000ml 。2硼砂（ Na2B4O7）0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g 加水至 1 000ml 。附表 4 不同 pH 的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法p 0.05M 0.2M p 0.05M 0.2MH ol/Lol/LH ol/Lol/L硼砂硼酸硼砂硼酸（ ml ）（ ml （ ml）（ ml）71.09.083.56.5.4271.58.584.55.5.6472.08.086.04.0.8783.07.098.02.0.00（七

12、）巴比妥缓冲液1pH8.2 离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥钠47.6g蒸馏水 3 000ml1.17N HCl 55.0ml（ 1.17 N HCl=193ml浓HCl 加 1 807ml 蒸馏水） 将 4.76g 巴比妥钠溶于 3 000ml 蒸馏水。 加 1.17 N HCl 55ml。 用 HCl 调节 pH 到 8.2 ，并加蒸馏水至4 265ml 。2 pH8.4 0.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥 1.84g巴比妥钠10.30g加蒸馏水至1 000.00ml3 pH8.6 0.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥 1.66g巴比妥钠12.76g加蒸馏水 1 000.00

13、ml（八） 0.2Mol/L醋酸盐缓冲液见表附表5附表 5 0.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法pH0.20.1pH0.20.123MolMol23Mol Mol37/L/L37/L/L TriHCl TriHCls（ ms（ m（ m l ）（m l ）l ）l ）98255872527. .51909056088257.5772530. .097982662882510.772532. .5 .576875073882512.772535. .5 .064762873882515.772537. .5 .553650762882517.772540. .5 .042540740882520.

14、772542. .0 .531322862（九）三羟甲基甲烷盐酸缓冲液（ Tris HCl 缓冲液）不同 pH， 0.05Mol/L25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加ml0.1NHCl，加水稀释至100ml（见下表）附表6 Tris HCl 缓冲液配制法pH2 33 7 0.2 0.1pHMol NHC 2 3/Ll3 7Tri(ml s(m)l)0.2 0.1Mol NHC/LlTri(mls(m)l)98255872527.51909065088257.5772530.097982862882510.772532.0 .576874073882512.772535.5 .06476

15、2873882515.772537.0 .553650762882517.772540.5 .042540740882520.772542.0 .531322862882522.772545.5 .021203005882525.25.0104 0三羟甲基氨基甲烷 （Tris ）分子量 =121.140.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷： Tris24.23g，加水至1 000ml 。0.1NHCl ：取 HCl8.6ml ，加水至 1 000ml 。（十） 0.5Mol/LpH9.5 碳酸盐缓冲液NaHCO33.70gNa2CO3 0.60g溶于 600.00ml 蒸馏水中即得。不用时塞紧瓶塞，

16、以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。（十一）甘油磷酸缓冲液1配制 pH8.0 磷酸缓冲液?0.1Mol/LNa2HPO4 94.50ml0.1N NaH 2PO4 5.50ml混合即可2 9 份甘油与1 份 pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。用途：用于免疫荧光试验。（十二） Hanks 液1贮存液NaCl 80.00gKCl 4.00gNa2HPO4·12 H 2O 1.52gKH2PO4 0.60g葡萄糖 4.00g0.4 酚红液 50.00ml双馏水加至100.00ml115高压灭菌15min，冰冻保存。2工作液贮存液 1份双馏水 9份115高压灭菌15m

17、in。临用时用灭菌的5.6 NaHCO3液调 pH值至 7.2 左右（溶液呈橙红色）。（十三）萘（钠）氏试剂（ Nessler s reagent ）配方 1：氯化汞 6.0g碘化钾 12.4g20 NaOH 30ml加蒸馏水至100ml配方 2：碘化汞 11.5g碘化钾 8g蒸馏水 50ml（完全溶解后）过滤，加20 NaOH 50ml。用途：检测溶液中氨离子。（十四）阿氏（ Alsever s）液葡萄糖 2.05g柠檬酸钠0.80g氯化钠 0.42g蒸馏水 100ml溶解后，以10%柠檬酸调节 pH 至 6.1 ，过滤，分装，10 磅 10min 灭菌， 4保存。（十五）青、链霉素混合液（简称 SP液或双抗液）青霉素（ 40万 U） 5 支链霉素（ 200 万 g） 1支分别溶于100ml 灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置 - 10- 20冰箱保存备用（1 万单位 g/ml ）。临用时，按 1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素 100U/ml ，链霉素 100ug/ml 。（十六）洗液（清洁液）配方 1：重铬酸钾 150g蒸馏水 300ml浓硫酸 3 000ml将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然