25辣椒品种抗疫病鉴定技术规程

1、ics备案号:贵 州 省 地方 标 准db52/t xxx x2014db52辣椒品种抗疫病鉴定技术规程rule for identification of pepper for resistance to pepper phytophthora blight（征求意见稿）在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。xxx xx xx x发布xxx xx x-x x实施贵州省质量技术监督局发布本标准按照gb/t 1. 1-2009标准化工作导则笫1部分：标准的结构和编写给出的规则起草。 本标准由贵州省农业委员会捉出并归口。木标准由贵州省质罐技术监督局批准。本标准起草单位：贵州

2、省植物保护研究所。本标准主耍起草人：杨学辉、袁洁、陈小均、吴石平、何海永、王莉爽、谭清群。辣椒抗疫病温室接种鉴定技术规程1范围木标准规定了辣椒抗疫病温室人工接种鉴定过程中辣椒苗的培育、接种体准备、接种技术、病情调 查以及抗病性评价方法。本标准适用于贵州省辣椒品种及资源材料对辣椒疫病的温室人工接种抗性鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注口期的引用文件，仅所注li期的版本适用于木文 件。凡是不注h期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。gb 4285农药安全使用标准gb 5084农业灌溉水质标准gb/t 8321 (所有部分) 农药合理使用准则3术语

3、和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1辣椒疫病 pepper phytophthora b i i ght辣椒疫霉为鞭毛菌亚门(mastigomycotina)卵菌纲(oomycetes)腐霉科(pythiaceae)疫霉属 (phytophthora)真菌。该菌侵染辣椒导致植株根系、茎基部、茎枝分叉处变黑腐烂、枯死，果实变褐 软腐、表面常有白色霉层等症状出现，称为辣椒疫病。3. 2抗病性鉴定screening for d i sease res i stance通过适宜技术方法鉴定植物对特定病害的抵抗水平。3.3分离物i sol ate采用人工方法从植物发病部位分离获得，并经过回接确认的

4、在特定环境条件下培养的病原物。3.4人工接种 artificial i nocu i at i on在适宜条件f,通过人工操作将接种体置于植物适当部位并使z发病的过程。3. 5接种体i nocu i urn用于人工接种鉴定的病原物或病原物的一部分，本规程特指辣椒疫霉砲了囊悬浮液，其浓度为 1. 2x10"个/ml。3.6灌根接种 i r r i gat i on root i nocu i at i on用氏径5mm的玻璃棒在距植株2 cm处戳一小孔，将接种体注如孔内，每株灌入量3ml。3. 7对照品种 contro i var i ety为检验试验的nj靠性,在品种鉴定时附加的抗病

5、品种和感病品种。4用具和试剂4. 1用具冰箱、消毒锅、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、载玻片、试管、酒精灯、接种铲、光学显微镜、超 净工作台、恒温生物培养箱、孔径规格为25 mmx25 mmx50 mm的塑料泡沫漂浮育苗盘、直径7 cm营养 钵。4.2试剂10% n&poq、naclo、(nh.,)2s04> k2so4、普通过磷酸钙、青霉素、利福平、尿素、50%多菌灵可湿性 粉剂。5育苗及接种5. 1育苗方法参鉴品种(材料)冇苗采用鴉料泡沫漂浮冇苗盘冇苗。辣椒种子用10%磷酸三钠溶液浸种20min,用 清水洗净，置于28°c恒温培养箱中催芽。选収发芽良好的种子单粒播于装有

6、育苗基质的塑料泡沫漂浮育 苗盘内。育苗盘用5%次氯酸钠溶液消毒，其规格为76 cmx35 cmx5.5cm. 160孔/盘，育苗基质为泥炭、 蛭石和膨化珍珠岩混合，各成分所占比例分别为60%70%、15%20%和15%20% (v/v/v),基 质经高温蒸汽灭菌(121°c, 30 min),播种后在辣椒种子上盖3 mm左右的育苗基质，压实，然后将播 种的漂浮盘放入营养液中。营养液配方为：每100kg清水加入50 g硫酸飯15 g尿素、100 g普通过磷酸 钙、50百硫酸钾；配制营养液使用的清水应符合gb 5084-92的蔬菜类灌溉水质要求。在18°c25°c的自

7、 然条件下育苗。冇苗期间不进行病害防治，虫害防治屮农药的使用应符合gb 4285和gb/t 8321的规定。5.2移栽及处理辣椒苗4叶展平时单苗移栽到营养钵屮,移栽后7天施一次1%尿素水溶液以保持辣椒苗长势旺盛。试 验设3次重复，各材料顺序排列，毎个重复每份材料10株苗，设感病和抗病品种对照。5.3接种体准备选取已分离鉴定属于不同生理小种的菌株回接到甜椒上重新复壮，待发病后从病果上胃接挑取菌丝 或切取一小块病组织置于选择性胡萝卜培养基(胡萝卜200 汁，琼脂18g,青霉素50 mg/l,利福平 100 mg/l, 50%多菌灵可湿性粉剂50 mg/l,蒸馆水1 l)上,25°c恒温培

8、养3d5d,转接到胡萝卜培养基 上扩繁，待10d15d产生抱了囊后，用消毒的毛笔和无菌水洗下他了囊，过滤收集，将属于不同生理小 种的菌株的抱子囊悬浮液混合，调整浓度为1.2x10*个/ml。5.4接种5. 4. 1接种期辣椒苗6叶展平。5.4.2接种及管理接种前1 d灌透水，接种时用玻璃棒在距幼苗茎基部约2 cm处扎一深3cm左右的孔，用移液器吸取3 nil 含量为1.2xi0个/皿的砲子囊混合悬浮液注入孔中，置于温室中光暗交替培育。温室内白天为26°c 28°c,夜间为20°c24°c,每犬光照12h14h,强度15000 lux左右，空气相对湿度75

9、%左右。接种及 发病期间保持营养钵基质湿度至饱和。5. 5病情调查5. 5. 1调查时间接种后7d10d调查各级病株数，调查1次。5.5.2调查方法逐一调杳侮份材料的接种株，按照病悄分级的症状描述记载病级，调杏标准为: 0级无病；1级幼苗茎基部轻微变黑，或个别叶片轻微萎蔦；3级幼苗茎基部变黑达1cm2cm,或半数以下叶片萎蔦，下部少数叶片脱落；5级幼苗茎基部变黑超过2cm,或半数以上叶片萎蔦、落叶明显；7级幼苗茎基部变黑缢缩，除生长点外其余叶片全部萎蔦或脱落；9级叶片全部萎蔦或植株枯死。5.5.3病情指数病情指数(di)按以下公式计算:病情指数(di) =z (各级病级代表数值x该病级株数)调查标准的最高病级代表数值x总株数5.6抗性评价5. 6. 1有效鉴定判定同批次鉴泄中，感病对照品种的病情指数>50,抗病对照品种病情指数v10时视为该批次鉴圧有效。5.6.2抗性评价标准根据参鉴材料的病情指数确定其对辣椒疫病的抗性水平并作岀评价: 高抗(i1r) : 0vdiw5；抗病(r) : 5vdiw10；中抗(mr) : 10vdiw20；中感(ms) : 20vdiw30；感病(s) : 30vdiw50；高感(hs) : di>50o 5.7鉴定记载表格辣椒抗疫病鉴泄原始记录及结果记载表格见附录a、b,分析后作出品种抗性评价。附录a（资料性