霉菌和酵母菌计数作业指导书

1、食品有限公司作业指导书文件号:KJWI-QA-26版本:A1日期：2012-5-25页数：Page 1 of 9标题:霉菌和酵母菌计数作业指导书文件修改记录版本修订 次数修订日期修订内容002011-02-01A12012-05-25修订分发号：（仅适用于控制文件）（仅盖有红色印章的文件才有效）批准:食品有限公司作业指导书文件号:KJWI-QA-26版本:A1日期：2012-5-25页数：Page 2 of 9标题:霉菌和酵母菌计数作业指导书1.0目的1.1规定食品中霉菌和酵母菌计数的方法。2.0适用范围2.1适用于加多宝凉茶、浓缩汁、原辅材料中的霉菌和酵母菌的计数3.0职责微生物检验员负责按

2、作业指导书进行检验。4.0术语（无）5.0工作流程图见附录A中A.16.0内容及要求6.1设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：6.1.1 冰箱：2 °C5 °C。6.1.2恒温培养箱：28 C± 1 C。6.1.3 显微镜：10X 100X。6.1.4 电子天平：感量0.1 g。6.1.5 无菌锥形瓶：容量500 mL、250 mL。6.1.6 无菌广口瓶：500 mL06.1.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）6.1.8 无菌平皿：直径90 mm6.1.9 无菌试管：10 mm X 75

3、 mm批准:食品有限公司作业指导书文件号:KJWI-QA-26版本:A1日期:2012-5-25页数：Page 3 of 9标题:霉菌和酵母菌计数作业指导书6.1.10无菌灭菌桶。6.2培养基和试剂6.2.1马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基：见附录A中A.2。6.2.2孟加拉红培 ，养基: 见附录A中A.3。6.3操作步骤6.3.1样品的稀释631.1固体和半固体样品：称取25 g样品至盛有225 mL灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振 摇，即为1:10稀释液。或放入盛有225 mL无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打 2min,制成1:10的样品匀液。6.3.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 m

4、L样品至盛有225 mL无菌蒸馏水的锥形瓶（可在 瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10的样品匀液。6.3.1.3 取1 mL 1:10稀释液注入含有9 mL无菌水的试管中，另换一支1 mL无菌吸管反复 吹吸，此液为1:100稀释液。6.3.1.4 按 6.3.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管。6.3.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2个3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可 包括原液），在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取 1 mL样品匀液于2个无菌 平皿内。同时分别取1 mL样品稀释液加入2个无菌平皿作空白

5、对照。6.3.1.6 及时将15mL20 mL冷却至46 C的马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基（可放 置于46C± 1C恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。6.3.2培养批准:食品有限公司作业指导书文件号:KJWI-QA-26版本:A1日期：2012-5-25页数：Page 4 of 9标题:霉菌和酵母菌计数作业指导书待琼脂凝固后，将平板倒置，28C±仁C培养5d,观察并记录。633菌落计数肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形成单位(colonyforming units，CFU表示。选取菌落数在10 CFLH 150

6、 CFU的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用 两个平板的平均数。6.4结果与报告6.4.1计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。641.1 若所有平板上菌落数均大于150 CFU,则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板 可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。6.4.1.2若所有平板上菌落数均小于10 CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.4.1.3若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于 1乘以最低稀释倍数计算；如为原液， 则以小于1计数。6.4.2报告6.4.2.1菌落数在100以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。6.422 菌落数大于或等于100时，前3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前 2位数 字，后面用0代替位数来表示结果；