1蛋白质的沉淀反应

1、动物生物化学实验教学动物生物化学实验教学地点地点：逸夫楼：逸夫楼2003实验基本教育和基本操作训练实验基本教育和基本操作训练 蛋白质的沉淀反应和两性反应蛋白质的沉淀反应和两性反应蛋白质透析脱盐蛋白质透析脱盐 实验一实验一动物医学院动物医学院 动物生物化学教研室动物生物化学教研室o了解了解生化生化实验实验的的基本目的和要求基本目的和要求o熟悉生化实验的常用仪器熟悉生化实验的常用仪器o了解蛋白质的沉淀、了解蛋白质的沉淀、盐析、盐析、两性反应及透两性反应及透 析脱盐的原理析脱盐的原理o掌握蛋白质盐析和透析等操作技术掌握蛋白质盐析和透析等操作技术目的目的实验基本教育和基本操作训练实验基本教育和基本操作

2、训练o动物生化实验的重要性动物生化实验的重要性o生化分析技术与本专业之间的关系生化分析技术与本专业之间的关系o本学期实验安排与要求本学期实验安排与要求o考核考核 总分总分100 ：40%为实验理论（闭卷）为实验理论（闭卷） 30%为实验技能操作为实验技能操作 40%平时（包括实验报告和平时）平时（包括实验报告和平时）实验安排实验安排 共有共有9 9个实验个实验：动医、动药专业动医、动药专业2727学时（包括学时（包括1-81-8个实验）个实验） 动科、水产专业动科、水产专业1818学时（包括学时（包括1-61-6个实验）个实验）o实验一实验一 实验基本教育和基本操作训练实验基本教育和基本操作训

3、练 蛋白质的沉淀反应和两性反应，蛋白质的沉淀反应和两性反应， 蛋白质透析脱盐（蛋白质透析脱盐（3 3学时）学时）o实验二实验二 蛋白质的定量测定蛋白质的定量测定-双缩脲法测定蛋白质浓度（双缩脲法测定蛋白质浓度（3 3学时）学时）* *o实验三实验三 唾液淀粉酶的活性观察（唾液淀粉酶的活性观察（3 3学时）学时）o实验四实验四 电泳技术概论电泳技术概论 o 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳（血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳（3 3学时）学时）o实验五实验五 聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白（聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白（3 3学时）学时）* *o实验六实验六 层析技术概论层析技术概论o 分子筛凝胶过

4、滤分离血红蛋白和核黄素（分子筛凝胶过滤分离血红蛋白和核黄素（3 3学时）学时）# #o实验七实验七 无蛋白血滤液的制备无蛋白血滤液的制备o 血糖的测定（血糖的测定（3 3学时）学时）* *o实验八实验八 动物肝脏中动物肝脏中dnadna的提取和鉴定（的提取和鉴定（3 3学时）学时）* *o实验九实验九 脂质的提取与薄层层析（脂质的提取与薄层层析（3 3学时）学时）# # 注：注：* * 为综合性实验为综合性实验 # # 为设计性实验为设计性实验 实验报告实验报告o实验目的实验目的 o实验原理实验原理（简明，扼要）（简明，扼要）o试剂与器材试剂与器材（简单，主要试剂与器材）（简单，主要试剂与器材

5、）o实验步骤实验步骤（详细）（详细）o结果讨论结果讨论（实事求是，准确）（实事求是，准确）实验实验1 蛋白质的沉淀反应蛋白质的沉淀反应o蛋白质的水溶液是稳定性的胶体溶液蛋白质的水溶液是稳定性的胶体溶液 稳定的原因有两个稳定的原因有两个 1 1 水膜水膜 2 2 电荷电荷o蛋白质沉淀蛋白质沉淀 物理化学因素影响下，蛋白质稳定性遭到破坏，以固体的形物理化学因素影响下，蛋白质稳定性遭到破坏，以固体的形式从溶液中析出的作用。包括式从溶液中析出的作用。包括可逆沉淀可逆沉淀和和不可逆沉淀不可逆沉淀 可逆沉淀（盐析和盐溶）可逆沉淀（盐析和盐溶）o盐溶（盐溶（salting in） 纯水或低盐溶液中溶解度较低

6、的蛋白质，通过增加无机纯水或低盐溶液中溶解度较低的蛋白质，通过增加无机盐使溶解度增加盐使溶解度增加o盐析（盐析（salting out） 高浓度的中性盐类可以脱去蛋白质分子表面的水膜，高浓度的中性盐类可以脱去蛋白质分子表面的水膜，并中和蛋白质分子的电荷，从而使蛋白质从溶液中沉淀并中和蛋白质分子的电荷，从而使蛋白质从溶液中沉淀下来的过程下来的过程 常用的中性盐：常用的中性盐：硫酸铵硫酸铵，氯化钠，硫酸钠等，氯化钠，硫酸钠等 不可逆沉淀不可逆沉淀o有机溶剂沉淀有机溶剂沉淀：如乙醇、丙酮、如乙醇、丙酮、o生物碱试剂沉淀生物碱试剂沉淀 :如苦味酸、三氯醋酸（如苦味酸、三氯醋酸（tca) tca) 、钨

7、、钨酸等酸等. .在在phph值小于蛋白质值小于蛋白质pipi时，其酸根负离子能与蛋白时，其酸根负离子能与蛋白质分子上的正离子相结合质分子上的正离子相结合o重金属盐沉淀重金属盐沉淀：金属正离子与蛋白质分子中负电荷金属正离子与蛋白质分子中负电荷结合结合o加热或改变加热或改变ph等等o本实验选用卵蛋白（结合蛋白）本实验选用卵蛋白（结合蛋白） 卵清蛋白卵清蛋白 球蛋白球蛋白 角蛋白角蛋白 粘蛋白等粘蛋白等o从卵蛋白中分离出清蛋白和球蛋白？从卵蛋白中分离出清蛋白和球蛋白？ 实验实验2 蛋白质的透析脱盐蛋白质的透析脱盐o透析法（透析法（dialysisdialysis） 蛋白质是生物大分子，分子的直径在

8、蛋白质是生物大分子，分子的直径在1-100nm1-100nm之之间，不能通过半透膜间，不能通过半透膜（有微孔的膜）（有微孔的膜）；而无机盐等小分；而无机盐等小分子化合物能自由通过半透膜。利用这一特性，将蛋子化合物能自由通过半透膜。利用这一特性，将蛋白质与小分子化合物分离开来。这就是透析白质与小分子化合物分离开来。这就是透析 本实验利用本实验利用透析透析的方法把实验一盐析中所用硫酸铵的方法把实验一盐析中所用硫酸铵去掉，达到分离纯化的目的去掉，达到分离纯化的目的实验所用半透膜：实验所用半透膜：玻璃纸玻璃纸实验实验3 蛋白质的两性实验蛋白质的两性实验 -酪蛋白酪蛋白pi的测定的测定o蛋白质与氨基酸类似，是两性电解质蛋白质与氨基酸类似，是两性电解质o蛋白质分子在等电点时不带电荷，溶解度最低，容易聚蛋白质分子在等电点时不带电荷，溶解度最低，容易聚集沉淀集沉淀o本实验利用本实验利用溴甲酚绿溴甲酚绿做指示剂，根据颜色的变化和等电做指示剂，根据颜色的变化和等电沉淀的原理，确定待测蛋白沉淀的原理，确定待测蛋白酪蛋白的酪蛋白的pi实验步骤实验步骤o见讲义见讲义实验结果实验结果o从卵蛋白中分离并纯化出从卵蛋白中分离并纯化出清蛋白清蛋白和和球蛋白球蛋白，确定确定可逆可逆和和不可逆沉淀剂不可逆沉淀剂?o