肝炎项目检测

1、 肝炎病毒检测肝炎病毒检测 童效云童效云 2011.1.13肝炎病毒及分子生物学简介v肝炎病毒家族是一大类引起病毒性肝炎的病原体，根据其病毒特征并结合流行病学资料与临床表现，可将肝炎病毒分为甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒、戊肝病毒及庚肝病毒。v病毒性肝炎的感染率和发病率都非常高，已称为全球严重的公共卫生问题，在我国归为法定的乙类传染病。v随着医学和分子生物学的发展，肝炎病毒的分子生物学诊断也飞速发展，新的肝炎分子生物学诊断可以根据患者自身感染病毒的不同，历史用药情况的不同，因人而异的开展肝炎病毒的诊断和治疗方案的制定。v目前肝炎病毒的的分子生物学检测对于肝炎的早期诊断，病毒的分型，治疗

2、方案的制定，药物疗效的监控，以及抗病毒药物的敏感性判断，临床用药指导方面都有着无可比拟的优势。乙肝点击v 我国乙肝病毒携带者约1.2亿人，大约10个人中就有1人携带乙肝病毒，其中慢性乙肝患者约有3000万例，每年有35万人死于慢性乙肝的相关疾病；v hbv dna持续阳性超过6个月的会转为慢性肝炎。50以上抗hbe阳性慢性肝病病人，经平均4.5年发展为肝硬化，常与hbv dna持续阳性有关；v 拉米夫定等核苷类抗病毒药，虽具有强烈的抑制hbv dna复制的作用，但长期服用可出现耐药现象，经过研究证实其与乙肝病毒p区基因突变有关。公司情况v 艾迪康公司特检中心利用自身的技术优势，开展了全面完整的

3、肝炎诊断项目，为临床诊断和治疗提供可靠、具体、客观的全方位服务。v 环境pcr实验室经国家卫生部临检中心验收并获验收合格证书；v 仪器美国abi公式生产的abi 7300荧光定量基因扩增仪及abi 3100全自动dna测序仪；v 质控参加卫生部和当地省市临检中心组织的室间质评，并取得优异的成绩；v 人员由经过卫生部临检中心培训并获pcr上岗证的专业人员进行操作。艾迪康开展的项目v乙型肝炎 乙型肝炎病毒核酸检测 乙型肝炎病毒基因分型检测 乙型肝炎病毒钱c区/c区变异测序 乙型肝炎病毒p区耐药基因测序 乙型肝炎病毒前s区/s区耐药基因测序 乙型肝炎病毒细胞内cccdna检测 乙型肝炎病毒ymdd突

4、变检测 乙型肝炎病毒基因分型检测 乙型肝炎病毒c区/c区1896、1762、1764位点变异v丙型肝炎 丙型肝炎病毒核酸检测 丙型肝炎病毒基因分型检测v其他型肝炎 甲型肝炎病毒核酸检测 丁型肝炎病毒核酸检测 戊型肝炎病毒核酸检测标本类型及送检要求检测项目hbv-dna基因分型hbv p耐药基因测序（包括ymdd突变位点检测）hbv c区变异包括1896、1762、1764位点变异检测）hbv s区变异高灵敏度乙肝病毒核酸检测丙型肝炎病毒核酸检测丙型肝炎病毒基因分型甲型肝炎病毒核酸检测丁/庚型肝炎病毒核酸检测标本要求血清1ml血清1ml血清1ml血清1ml血清1mledta抗凝全血edta抗凝血

5、浆1mledta抗凝血浆1ml血清1mlv血清、血浆可0-20保存，全血要4 保存，不可冷冻，；组织保存要求请联系本公司。v0冰上运输血液标本，2-4 保存不超过24小时，-20 保存不超过一周；v24小时内到达公司最好，最迟不能超过72小时；v标本禁忌反复冻融。采集及送检和单据填写注意事项v 用于采集标本的试管或容器需无菌，严禁使用肝素抗凝管；v 送检标本含量应1000iu/ml;v 血清样本：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分），收集上清，如有沉沉行成，应再次离心；v 血浆样本：edta抗凝，无菌采集，混合均匀后离心1020分钟后收集上清，如有沉淀

6、，应再次离心；v 如果是组织或是其他特殊样本，请提前与中心联系，以便确认正确的保存以及运送条件；v 血液标本采集是注意无菌操作，避免污染；v 溶血中、脂血标本影响定量、突变类检测成功率，但是不影响检出率，病毒含量越高，影响越小。v 单据使用专用申请单（正在印刷中，乙肝/丙肝分子诊断学综合检查申请单）单据上注明临床用药情况，服用时间，病程、病史、病毒含量。v 任何标本和原始申请单必须同时到达杭州特检部。v 首次送检的标本打印报告单时一定要将格式、内容跟杭州出具的报告单核对，备注内容是否齐全，（参考范围、项目顺序、箭头指示等).报告时间计算v 起止时间自标本到达杭州特检实验室起算； 非浙江区域要加

7、上物流的路途时间 例如： 某项目报告时间是三个工作日 杭州1月3日接收标本 ，三个工作日 ，1月6日出报告； 安庆1月3日接收标本，3日晚到达合肥，4日托运至杭州，5日早上到达杭州特检实验室，三个工作日，8号出报告；v 工作日： 每周一到周六上班，周日和固定假日为非工作日；v 标本延迟原因 标本扩增失败，复查； 交接延迟，项目不清； 病毒含量低； 交接临床情况询问：病程病史，用药换药情况；v 报告单打印格式v 有a4和a5两种版式，医院首次送检的标本须保证查询单据正确。 hbsag、hbeag全定量检测v 意义 ：研究发现联合定量检测血清hbsag、hbeag的水平可识别活动性hbv携带者；v

8、 hbsag与hbeag的变化是乙肝治疗的重要指标与停药节点；v hbsag与hbeag的全定量指标的动态变化与变化趋势是乙肝个性化治疗的重要依据，可确定疗程及治疗终点；v 适用人群v 初诊病人预后判断及病情确定v 干扰素以及其他药物疗效预测v e s抗原全定量检测需要进行动态分析，方能获得最大意义。乙肝病毒p区耐药检测v 临床意义： 耐药变异株不仅抗药性增加，而且可能加重肝损害，引起病情反复，甚至加重；v 耐药病毒的出现使后续治疗的药物疗效降低v 耐药病毒的出现抵消了之前获得的临床益处v 使用核苷类似物治疗的慢性乙肝患者，必须定期检测耐压情况；v 根据耐药情况及时换药加药或更改治疗方案，使病

9、人获得更好的治疗效果；v 适用人群v 治疗发生原发性不应答的患者建议进行p区耐药检测v 治疗过程中发生部分病毒学应答的患者建议进行p区耐药检测v 建议使用核苷类似物治疗的患者均应每三个月检测一次p区耐药，从而及时调整对病人的用药方案v 对于更改治疗方案的病人（如加药、换药等），均应每三个月检测p区耐药情况，确认病毒是否发生新的变异。高灵敏度乙肝病毒核酸检测v 临床意义v 普通的hbv dna 灵敏度较低，无法监控低载量病毒复制情况，高灵敏度hbv dna检测灵敏度很高，检测下限可以达到50-70copy/ml，对于乙肝治疗终点以及停药时间的确定有着非常重要的意义，并且可很好的对低载量病毒患者进

10、行病毒监控。v 使用人群v 对慢性乙肝患者体内的病毒数量进行检测；v 服用抗病毒药物的慢性乙肝患者检测药物疗效情况；v 长期服用抗病毒药物疗效较好的患者进行停药时机的判断；v 对已经停药的患者进行体内病毒含量的检测，确认再次开始治疗的时机。乙肝病毒基因分型检测v 临床意义v 根据hbv全基因核苷酸序列异源性85或s基因区核苷酸序列异源性4 ，将不同的病毒株分为不同的基因型，迄今为止，hbv可以分为8个基因型，即a 、b 、c、 d 、e 、f、 g 、h 型，hbv基因型的分布有一定的地域性，我国是以b、 c 型为主。不同的基因型的病毒可能具有不同的毒力，hbv基因分型对乙肝临床和分子流行病学

11、至关重要，不同的基因分型，临床症状，病情转归，药物治疗效果等均不相同。v 适用人群v 判断患者病情进展情况，建议检测基因分型；v 对于治疗方案适应干扰素的患者，必须检测基因分型；v 预测病情，判断病毒致病性，判断病程及转归，建议检测基因分型。乙肝病毒前c区/c区变异及1762、1764、1896位点变异检测v 并非所有的hbeag阳转阴的感染者病情都趋于好转，相当部分的慢性肝炎患者都检测到hbeag阴性，但是感染者的 hbv dna却呈现高载量，这是由于这部分患者前c区或者c区发生变异，使得hbeag分泌减少或停止分泌。c区变异的病人使得病毒更容易逃逸机体的细胞免疫、体液免疫作用，造成肝细胞持

12、续损伤，炎症反应加重。v 适用人群v hbeag含量降低但hbv dna高载量的病人，建议检测c区变异，判明病因；v 临床观察发生血清学转换的病人，检验检测c区变异，避免误诊、漏诊；v 长期使用核苷类药物，但是病毒载量始终维持在103-106之间不能继续下降的病人，建议检测c区变异；v 重症肝炎，炎症反应剧烈，肝脏病情进展迅速的病人，检验检测c区变异。乙肝病毒前s区和s区变异检测v 临床意义v 前s1基因突变可导致前s2蛋白缺失，前s区/s区变异可使疫苗或免疫球蛋白保护无效，使hbv逃避干扰素治疗和宿主免疫清除，s区变异会导致hbsag表达受到影响，临床表现为hbsag阴性而hbsab阳性、h

13、bv dna阳性的隐匿性肝炎，前s区/s区变异可使肝炎的症状进展更加迅速，与肝硬化、肝癌的发生有一定关系。v 适用人群v 乙肝两对半定性结果全阴hbv dna 的患者v hbsag阴性而hbsab阳性、 hbv dna阳性确定是否隐匿性肝炎，防止误诊漏诊；v 经免疫球蛋白治疗后的孕妇，建议检测s区变异观察免疫球电白对病毒的阻断作用。白介素28b基因多态性检测v 临床意义v 染色体19上的白介素28b（il-28b）基因多态性与患者对聚乙二醇化干扰素a（长效干扰素）与利巴韦林治疗具有持续病毒学反应有关。v 适用人群v 适用于所有治疗方案为干扰素+利巴韦林的病人判断药物应答和预后情况，以便在效果不佳时更改治疗方案。丙型肝炎病毒基因分型检测v 临床意义v 不同基因型感染者的临床表现有差异，血清抗体反应有差异，肝脏受损程度有差异；v 不同基因型感染者对干扰素的诊疗效果有差异；v 不同的基因型和基因亚型的hcv对肝脏的损害程度不同；v hcv基因型