KAI1基因在人肺癌细胞表达水平及调控机制的研究

1、kai1kai1基因在人肺癌细胞株中表达水平基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究及调控机制的研究本研究受到国家自然科学基金重点项目（本研究受到国家自然科学基金重点项目（n0.30430300）和天津市科技）和天津市科技支撑计划重点项目（支撑计划重点项目（no. 06yfszsf05300）资助资助尤嘉琮1 赵颖2 陈 军1 马 力1 朱大兴1 周清华 1 1、天津医科大学总医院天津市肺癌研究所 2、四川大学华西医院肿瘤中心 一、研究不同组织学类型的人肺癌细胞株和正常一、研究不同组织学类型的人肺癌细胞株和正常人肺成纤维细胞株人肺成纤维细胞株mrc-5中中kai1的的mrna表达表达水平及

2、其差异水平及其差异二、研究不同转移潜能的人大细胞肺癌细胞株中二、研究不同转移潜能的人大细胞肺癌细胞株中kai1的的mrna表达水平，探讨表达水平，探讨kai1与与nm23-h1在在调控肺癌转移中的相互关系调控肺癌转移中的相互关系三、研究甲基化抑制剂三、研究甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞苷杂氮脱氧胞苷(5-aza-cdr)对肺癌细胞株对肺癌细胞株l9981、glc-82和和nci-h460中中kai1的的mrna表达水平和体外增殖能力的影响表达水平和体外增殖能力的影响 主要材料与方法主要材料与方法主要实验方法：主要实验方法： 实时荧光定量实时荧光定量pcr mtt法绘制细胞生长曲线法绘制细胞生长曲线

3、甲基化抑制剂：甲基化抑制剂： 实 验 结 果比较比较mrc-5与不同组织类型肺癌细胞株间与不同组织类型肺癌细胞株间kai1基因基因mrna表达水平表达水平1. mrc-5 , 正常人肺成纤维细胞株；2. l9981, 人高转移大细胞肺癌细胞株；3. nl9980,人低转移大细胞肺癌细胞株；4. l9981-nm23-h1-pegfp，稳定转染nm23-h1的l9981细胞株；5. a549，6. glc-82，7. a2，8. spca-1，肺腺癌细胞株；9. nci-h460，人大细胞肺癌细胞株；10. sh-77，11. nci-h446，人小细胞肺癌细胞株；12. ltep-2，肺腺癌细

4、胞株;13. ytmlc-90，肺鳞癌细胞株； p=0.0000.002不同细胞株间不同细胞株间kai1基因表达水平比较的基因表达水平比较的p值表值表celllinescell lines l9981nl9980l9981-nm23-h1a549glc-82a2spca-1nci-h460sh-77nci-h446ltep- -2ytmlc-90mrc-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000l99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000n

5、l99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000l9981-nm23-h10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000a5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392glc-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227a20.0070.0010.0000.0000.5880.040spca-10.0000.0000.1670.0020.443nci-h4600.0000.0000.0020.000sh-770.0000

6、.0000.000nci-h4460.0000.037ltep- -20.0121. mrc-5 , 正常人肺成纤维细胞株；2. l9981, 人高转移大细胞肺癌细胞株；3. nl9980,人低转移大细胞肺癌细胞株；4. l9981-nm23-h1-pegfp，稳定转染nm23-h1的l9981细胞株；5. a549，6. glc-82，7. a2，8. spca-1，肺腺癌细胞株；9. nci-h460，人大细胞肺癌细胞株；10. sh-77，11. nci-h446，人小细胞肺癌细胞株；12. ltep-2，肺腺癌细胞株; 13. ytmlc-90，肺鳞癌细胞株； 在在l9981细胞中转染

7、细胞中转染nm23-h1可显著上调可显著上调kai1的的mrna表达水平表达水平celllinescell lines l9981nl9980l9981-nm23-h1a549glc-82a2spca-1nci-h460sh-77nci-h446ltep- -2ytmlc-90mrc-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000l99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000nl99800.8920.0000.0000.0000.0000.000

8、0.0000.0080.0000.000l9981-nm23-h10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000a5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392glc-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227a20.0070.0010.0000.0000.5880.040spca-10.0000.0000.1670.0020.443nci-h4600.0000.0000.0020.000sh-770.0000.0000.000nci-h4460.0000.037ltep- -2

9、0.0121. l9981；2. nl9980；3. l9981-nm23-h1-pegfp比较比较l9981细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间kai1的的mrna表达水平表达水平celllinescell lines l9981nl9980l9981-nm23-h1a549glc-82a2spca-1nci-h460sh-77nci-h446ltep- -2ytmlc-90mrc-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000l99810.0000.0000.0000.0000.

10、0020.0000.6510.0000.0000.0070.000nl99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000l9981-nm23-h10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000a5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392glc-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227a20.0070.0010.0000.0000.5880.040spca-10.0000.0000.1670.0020.443nci-h

11、4600.0000.0000.0020.000sh-770.0000.0000.000nci-h4460.0000.037ltep- -20.0121.l9981；2. a549；3. glc-82；4. a2；5. spca-1；6. nci-h460；7. sh-77；8. nci-h446；9. ltep-2；10. ytmlc-90 比较比较nl9980与不同组织学类型的人肺癌细胞株间与不同组织学类型的人肺癌细胞株间kai1的的mrna表达水平表达水平celllinescell lines l9981nl9980l9981-nm23-h1a549glc-82a2spca-1nci-h4

12、60sh-77nci-h446ltep- -2ytmlc-90mrc-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000l99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000nl99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000l9981-nm23-h10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000a5490.7170.2110.1110.0000.0000

13、.0050.0780.392glc-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227a20.0070.0010.0000.0000.5880.040spca-10.0000.0000.1670.0020.443nci-h4600.0000.0000.0020.000sh-770.0000.0000.000nci-h4460.0000.037ltep- -20.0121. nl9980；2. l9981-nm23-h1-pegfp；3. a549；4. glc-82；5. a2；6. spca-1；7. nci-h460；8. sh-77；9. nci-h446；10.

14、 ltep-2；11. ytmlc-90 比较比较a549a549细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间kai1kai1的的mrnamrna表达水平表达水平celllinescell lines l9981nl9980l9981-nm23-h1a549glc-82a2spca-1nci-h460sh-77nci-h446ltep- -2ytmlc-90mrc-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000l99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510

15、.0000.0000.0070.000nl99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000l9981-nm23-h10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000a5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392glc-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227a20.0070.0010.0000.0000.5880.040spca-10.0000.0000.1670.0020.443nci-h4600.0000.0000

16、.0020.000sh-770.0000.0000.000nci-h4460.0000.037ltep- -20.0121.a549；2. glc-82；3. a2；4. spca-1；5. nci-h460；6. sh-77；7. nci-h446；8. ltep-2；9. ytmlc-90 比较比较glc-82glc-82细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间kai1kai1的的mrnamrna表达水平表达水平celllinescell lines l9981nl9980l9981-nm23-h1a549glc-82a2spca-1nci-h460sh-7

17、7nci-h446ltep- -2ytmlc-90mrc-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000l99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000nl99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000l9981-nm23-h10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000a5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.

18、0780.392glc-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227a20.0070.0010.0000.0000.5880.040spca-10.0000.0000.1670.0020.443nci-h4600.0000.0000.0020.000sh-770.0000.0000.000nci-h4460.0000.037ltep- -20.0121.glc-82；2. a2；3. spca-1；4. nci-h460；5. sh-77；6. nci-h446；7. ltep-2；8. ytmlc-90 比较比较a2a2细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与

19、不同组织学类型的人肺癌细胞株间kai1kai1的的mrnamrna表达水平表达水平celllinescell lines l9981nl9980l9981-nm23-h1a549glc-82a2spca-1nci-h460sh-77nci-h446ltep- -2ytmlc-90mrc-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000l99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000nl99800.8920.0000.0000.0000.0000.00

20、00.0000.0080.0000.000l9981-nm23-h10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000a5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392glc-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227a20.0070.0010.0000.0000.5880.040spca-10.0000.0000.1670.0020.443nci-h4600.0000.0000.0020.000sh-770.0000.0000.000nci-h4460.0000.037ltep- -

21、20.0121. a2；2. spca-1；3. nci-h460；4. sh-77；5. nci-h446；6. ltep-2；7.ytmlc-90比较比较spca-1spca-1细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间kai1kai1的的mrnamrna表达水平表达水平celllinescell lines l9981nl9980l9981-nm23-h1a549glc-82a2spca-1nci-h460sh-77nci-h446ltep- -2ytmlc-90mrc-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0

22、000.0000.0000.000l99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000nl99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000l9981-nm23-h10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000a5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392glc-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227a20.0070.0010.0000.0000.

23、5880.040spca-10.0000.0000.1670.0020.443nci-h4600.0000.0000.0020.000sh-770.0000.0000.000nci-h4460.0000.037ltep- -20.0121. spca-1；2. nci-h460；3. sh-77；4. nci-h446；5. ltep-2；6.ytmlc-90比较比较nci-h460nci-h460细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间kai1kai1的表达水平的表达水平celllinescell lines l9981nl9980l9981-nm23-h1a

24、549glc-82a2spca-1nci-h460sh-77nci-h446ltep- -2ytmlc-90mrc-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000l99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000nl99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000l9981-nm23-h10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000a5490.7

25、170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392glc-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227a20.0070.0010.0000.0000.5880.040spca-10.0000.0000.1670.0020.443nci-h4600.0000.0000.0020.000sh-770.0000.0000.000nci-h4460.0000.037ltep- -20.0121. nci-h460；2. sh-77；3. nci-h446；4. ltep-2；5.ytmlc-90比较比较sh-77sh-77细胞与不同组织学类型的人肺

26、癌细胞株间细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间kai1kai1的的mrnamrna表达水平表达水平celllinescell lines l9981nl9980l9981-nm23-h1a549glc-82a2spca-1nci-h460sh-77nci-h446ltep- -2ytmlc-90mrc-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000l99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000nl99800.8920.0000.0000.0000

27、.0000.0000.0000.0080.0000.000l9981-nm23-h10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000a5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392glc-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227a20.0070.0010.0000.0000.5880.040spca-10.0000.0000.1670.0020.443nci-h4600.0000.0000.0020.000sh-770.0000.0000.000nci-h4460.0000.03

28、7ltep- -20.0121. sh-77；2. nci-h446；3. ltep-2；4.ytmlc-90比较比较nci-h446、 ltep- -2和和ytmlc-90细胞株间细胞株间kai1的的mrna表达水平表达水平celllinescell lines l9981nl9980l9981-nm23-h1a549glc-82a2spca-1nci-h460sh-77nci-h446ltep- -2ytmlc-90mrc-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000l99810.0000.0000.0000.0

29、000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000nl99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000l9981-nm23-h10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000a5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392glc-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227a20.0070.0010.0000.0000.5880.040spca-10.0000.0000.1670.0020.443n

30、ci-h4600.0000.0000.0020.000sh-770.0000.0000.000nci-h4460.0000.037ltep- -20.0121. nci-h446；2. ltep-2；3.ytmlc-905-aza-cdr上调了上调了nci-h460 和和l9981细胞中细胞中kai1的的mrna表达水平表达水平1. control ；2. 2mol/l 5-aza-cdr ；3. 10mol/l 5-aza-cdrgroupsnci-h4605-aza-cdr(2mol/l)5-aza-cdr(10mol/l)nci-h4600.0010.0005-aza-cdr(2mol/l)0.005nci-h460nci-h460和和l9981l9981细胞株对照组与实验组间细胞株对照组与实验组间kai1kai1基因表达水平比较的基因表达水平比较的p p值表值表1. control ；2. 2mol/l 5-aza-cdr ；3. 10mol/l 5-aza-cdrgroupsl99815-aza-cdr(2mol/l)5-aza-cdr(10mol/l)l99810.0000.0005-aza-cdr(2mol/l)0.016nci-h460 ce