血清蛋白质标记物在肾母细胞瘤中的临床应用研究PPT课件

1、血清蛋白质标记物在肾母细胞血清蛋白质标记物在肾母细胞 瘤中的临床应用研究瘤中的临床应用研究郑州市儿童医院普外科郑州市儿童医院普外科 陈新让陈新让无法满足临床无创、无法满足临床无创、简便、高效、快速的简便、高效、快速的早期诊断及指导治疗早期诊断及指导治疗和监测预后的要求和监测预后的要求肾母细胞瘤诊断现状肾母细胞瘤诊断现状 B B超超 彩超彩超 CT 肾动脉造影肾动脉造影 MRIIVP同位素骨扫描同位素骨扫描腹部平片腹部平片 临床要求：准确、无创、简便、早期诊断临床要求：准确、无创、简便、早期诊断制定治疗方案指导临床分期和监测预后制定治疗方案指导临床分期和监测预后l 研究应用新的技术手段与判断方法

2、研究应用新的技术手段与判断方法l 构建肾母细胞瘤早期诊断构建肾母细胞瘤早期诊断 分期模型及预后模型分期模型及预后模型肿瘤细胞的肿瘤细胞的蛋白质表达谱蛋白质表达谱生物信息学生物信息学基因组表达的整套蛋白质进行分析基因组表达的整套蛋白质进行分析正常对照的蛋正常对照的蛋白质表达谱白质表达谱蛋白质组学蛋白质组学多种标志物联合多种标志物联合诊诊 断断模模 型型蛋白组学的发展为肿瘤诊断提供了新的思维和蛋白组学的发展为肿瘤诊断提供了新的思维和技术平台技术平台分分 期期模模 型型预预 后后模模 型型SELDI-TOF-MS特点特点l 高通量（高通量（9696孔）孔）l 可靠的重复性可靠的重复性l 灵敏度高（灵

3、敏度高（1-50fmol1-50fmol）l 简便（无需纯化样品）简便（无需纯化样品）l 检测范围广（检测范围广（500Da-500kD)500Da-500kD)l 所需样本体积小所需样本体积小(0.5-400ul(0.5-400ul） 生物信息学技术生物信息学技术l 树型决定结构树型决定结构l 等级分聚类等级分聚类l 人工神经网络人工神经网络l 支持向量机支持向量机支持向量机主要思想支持向量机主要思想 1. 使用非线性映射算法使用非线性映射算法 将输入向量映射到高维特征空间将输入向量映射到高维特征空间 2. 2. 基于结构风险最小化理论基于结构风险最小化理论 在特征空间中建构最优分割超平面在

4、特征空间中建构最优分割超平面临床资料临床资料血血清清样样本本7575例例正常对照正常对照2020例例其他小儿腹部实体肿瘤其他小儿腹部实体肿瘤2525例例肾母细胞瘤肾母细胞瘤100100例例神经母细胞瘤神经母细胞瘤9 9例例肝母细胞瘤肝母细胞瘤5 5例例胰母细胞瘤胰母细胞瘤2 2例例腹膜后畸胎瘤腹膜后畸胎瘤5 5例例（男（男1111例，女例，女1414例例, ,平平 均年龄均年龄3.53.5岁岁) )（男男6363例，女例，女5757例例, ,平均平均年龄年龄2.82.8岁）岁）横纹肌肉瘤横纹肌肉瘤3 3例例（来自本院小儿外科门诊体检的健康小来自本院小儿外科门诊体检的健康小儿。儿。性别、年龄与肾

5、母细胞瘤配对性别、年龄与肾母细胞瘤配对) )所所有有标标本本均均经经病病理理证证实实肾上腺皮质癌肾上腺皮质癌1 1例例PBS-PBS-型型SELDI-TOF-MSSELDI-TOF-MS系统系统 分析参数：分析参数：l 激光强度为激光强度为170170，l 灵敏度为灵敏度为6 6，l 每个样本收集总点数每个样本收集总点数140140次次; ;l 收集数据范围收集数据范围1000-50000Dal1000-50000Dall 优化范围优化范围20002000到到20000Dal20000Dal。 主要试剂主要试剂 NaNc： 分子量分子量136.0 （上海生工生物工程公司）（上海生工生物工程公司

6、） 脲素：脲素： 分子量分子量60.6 （Promega Inc. 美国）美国） 乙腈：乙腈： 分子量分子量41.05 （Sigma Inc. 美国美国) CHAPS： 分子量分子量604.9 （ Promega Inc. 美国）美国） SPA： 能量吸收基质能量吸收基质 （Ciphergen Inc. 美国美国) U9缓冲液：缓冲液：9M脲素、脲素、 2% CHAPS、1%DTT 50% 饱和饱和SPA，充，充分振荡分振荡5分钟，离心分钟，离心1分钟，再加上等体积的上述混合溶液分钟，再加上等体积的上述混合溶液 清晨、空腹清晨、空腹 抽取抽取5ml5ml全全血血 室温下静置室温下静置1-1-2

7、 2小时使血液小时使血液凝集凝集43000r43000r/min /min 离离心心10min10min置于置于44冰冰浴 上 ， 分浴 上 ， 分装于装于100ul/100ul/管管-80 -80 冰箱冰箱保存保存 血清标本留取与保存血清标本留取与保存结结 果果结结 果果肾母细胞瘤各项肾母细胞瘤各项传统传统检查符合率检查符合率 检查方检查方法法 检查例检查例数数 符合例数符合例数 符合率（符合率（%） 普通普通B超超 42 18 42.9 彩色超彩色超声声 78 53 67.9 CT 30 25 83.3 MRI 9 8 88.9 ECT 8 5 66.7 IVP 54 19 35.1 冰冻

8、切冰冻切片片 98 96 98.0摘自文献摘自文献结结 论论 肾母细胞瘤患儿血清蛋白质标记物肾母细胞瘤患儿血清蛋白质标记物 筛出筛出m/zm/z峰值位于峰值位于6984.06984.0和和6455.06455.0的的 蛋白质标志物蛋白质标志物2 2个个 与正常组比较与正常组比较 患儿组此两峰处的蛋白质低表达患儿组此两峰处的蛋白质低表达 （P P0.050.05） 结结 论论 2424例手术前后血清蛋白质标记物的比较例手术前后血清蛋白质标记物的比较 术前呈低表达或不表达术前呈低表达或不表达 2121例根治术患儿术后例根治术患儿术后2 2周标本周标本 高表达高表达1919例低表达例低表达2 2例例

9、 3 3例姑息性切除患儿手术前后例姑息性切除患儿手术前后 比较差异无统计学意义比较差异无统计学意义 肾母细胞瘤肾母细胞瘤I I、IIII、IIIIII、IVIV期的期的M/ZM/Z的强度的强度 依次降低的依次降低的, ,分期愈高其分期愈高其M/ZM/Z强度愈低强度愈低术中没有彻底切除肿瘤术中没有彻底切除肿瘤 M/ZM/Z强度较低与术前没有明显区别强度较低与术前没有明显区别I I期与正常儿童期与正常儿童M/ZM/Z区别不明显区别不明显(I(I期低于健康儿童期低于健康儿童) ) M/Z M/Z强度愈高，分期愈低，预后愈好强度愈高，分期愈低，预后愈好 结结 论论结结 论论应用应用SELDI-TOF -MSSELDI-TOF -MS技术和技术和SVMSVM方法构建的分期模型方法构建的分期模型 成功区分肾母细胞瘤成功区分肾母细胞瘤+期与期与 肾母细胞瘤肾母细胞瘤期期+期患儿期患儿 指导临床制定合理的治疗方案指导临床制定合理的治疗方案 提高治愈率提高治愈率 改善预后改善预后 l 早期诊断灵敏性高，特异性高早期诊断灵敏性高，特异性高l 无创，简便无创，简便l