孕期人乳头状瘤病毒亚临床感染与母婴垂直

1、孕期人乳头状瘤病毒亚临床感染与母婴垂直军医进修学院学报2000年第21卷第1期彭萍翁霞云谷志远李琦摘 要：日的：探讨不同孕期人乳头状瘤病毒(hpv)亚临床 感染及母婴垂直传播情况。方法：采用pcr技术检测30例孕早 期、42例孕中期、32例孕晚期妇女的宫颈分泌物、母血、绒毛 或胎盘、羊水、脐血及新生儿咽部抽吸物标本hpv-6、11、16、 18型dnao结果：早孕期：5例宫颈分泌物hpv阳性(5/30), 7 例母血hpv阳性(7/30), 3例绒毛hpv阳性(3/30)；中孕期： 12例宫颈分泌物hpv阳性(12/42) ,11例母血hpv阳性(11/42), 9例胎盘hpv阳性(9/42)

2、；另22例羊水标本中，仅1例hpv阳 性(1/22)；晚孕期:23例宫颈分泌物hpv阳性(23/32)、18例 母血hpv阳性(18/32), 12例胎盘hpv阳性(12/32)；另31例 羊水标本中，4例hpv阳性(4/31), 31例脐血标本中，12例hpv 阳性(12/31) o分析羊水、脐血与母血hpv感染的相对危险度高 于宫颈分泌物，而产时新生儿咽部抽吸物与宫颈分泌物hpv感染 的相对危险度高于母血。结论：在整个孕期中，孕晚期的hpv亚 临床感染明显。孕期hpv亚临床感染的母婴传播不但可经产道直 接接触传播，述可经羊水、胎盘发生宫内传播，其宫内传播率的 高低主要与母血iipv感染相关

3、。新生儿脐血的i1pv感染主要与母 血感染相关，而产时新生儿咽部的hpv感染主要与宫颈分泌物感 染相关。关键词：人乳头状瘤病毒；妊娠；传播；pcr近年来，女性生殖道人乳头状瘤病毒（human papillomavirus, hpv）感染率逐年上升，而其引起的尖锐湿疣已 成为最常见的性传播疾病之一。孕期妇女hpv感染可通过母婴传 播引起婴幼儿肛生殖部位的先天性尖锐湿疣、青少年喉乳头状瘤 等相关性疾病，因而倍受关注，相继有学者对hpv的母婴传播作 了初步探讨；但多限于孕晚期的研究，且取样单一，欠全面。我 们选取平均年龄相近的孕早、中、晚期妇女共104例，采用pcr 技术，对其宫颈分泌物、母血、绒毛

4、或胎盘组织、羊水、脐血、 新生儿咽部抽吸物标本进行hpv-6、11、16、18型dna检测，力 求对hpv的母婴垂直传播进行系统观察，现将结果报告如下。1对象和方法1. 1实验对象1997年5月1997年11月期间，按来院 就诊日期随机选取孕早期30例（611周）、孕中期42例（12 27周）、孕晚期32例（2841周）,排除有内外科疾病、外阴瘙 痒及白带常规检查异常者。1.2临床标本的采集 包括：冲洗宫颈外口(孕晚期者于 破膜前)，留取冲洗液；产时吸取咽部分泌物；取羊水(孕中期志 愿做雷凡诺尔引产者经腹行羊膜腔穿刺，孕晚期经阴道分娩者丁 人工破膜前穿刺前羊水囊、剖宫产者于术中取)，三种标本4

5、°c 下低速离心收取细胞沉淀，混悬于1. omlpbs液中；取孕早期 绒毛，孕中、晚期胎盘，用生理盐水反复漂洗，直至确认无母血 污染；孕晚期娩出儿，确认无母血污染，抽取脐血，肝素抗凝; 抽取孕妇外周血，肝素抗凝。上述标本均置-20°c冰箱保存。1.3 dna提取1.3.1宫颈冲洗液、新生儿咽部抽吸物及羊水标本 用 5010011 1裂解液(蛋白酶k终浓度为100iig/m 1)混悬细胞沉 淀，于 55°c水浴消化 lh； 95°c处理 lomin, 4°c下 11000r/min 离心5min,取上清液做为pcr扩增的模板。1.3.2全血标本

6、先反复用te液除去红细胞成分，余同3. 1步骤。绒毛及胎盘组织组织块经lmldna提取液 (10mmol/ltris-hcl, 0. lmol/ledta, 0. 5%sds, 100 p g/ml 蛋白 酶k)匀浆处理后，55°c水浴4h,苯酚：氯仿：异戊醇(25 : 25 : 1)抽提2次，加入1/10体积3molnaac (ph5. 2)和2倍体积的无 水乙醇沉淀dna。1.4 pcr扩增 引物设计、扩增程序、扩增产物见参考文 献1。每次扩增均同时设阳性和阴性对照，阳性对照为解放军 总医院分子生物实验室提取的iipv-6、hpv-lk hpv-16、hpv-18 型质粒dna,

7、阴性对照为蒸憾水。经2%琼脂糖凝胶电泳判定结果。1.5资料的统计学处理应用sas软件，计数资料比较采 用x 2检验，如频数有特别小值吋，两组采用fisher精确检验, 多组采用似然比x 2检验。单因数的相关分析采用队列研究分析, 多因数的相关分析采用logistic多元回归分析。以p<0. 05为 显著性界值。2结果1孕期妇女hpv亚临床感染 孕早、中、晚期妇女宫颈 分泌物及母血的hpv感染率分别为16. 67%(5/30)、23. 33(7/30)； 28.57%(12/42)、26. 19%(11/42)；71.86%(23/32)、56. 25% (18/32)；经总x 2检验，差

8、异均有极显著意义(x 2宫颈 = 22.844, x2 母血=9. 623, p 均 v0. 01)；以孕晚期组的 hpv 感染率最高，其与孕早期、孕中期分别相比较，差异均有极显著 意义(pv0.01)；而孕早、中期相比较，差异无显著性意义(p> 0. 05) o2.2胎盘的hpv感染率 孕早、中、晩期的感染率分别为 10. 00% (3/30) > 21. 43% (9/42) > 37. 50% (12/32),经总 x 2 检验, 其差异有显著意义(x 2 = 6. 704, pv0.05)；其中孕早、晚期相 比较，差异显著(p<0. 05),而孕早、中期及孕中、

9、晚期分别相 比较，差异不显著(p>0. 05) 0分析胎盘的感染与宫颈分泌物及 母血感染的相关性，见表1。表1不同孕期绒毛/胎盘hpv感染状况与孕母hpv感染状况的 关系绒毛/胎盘hpv-dna相对危险度*(rr) p+-宫颈分泌物 iipv-dna+16241. 82 > 0. 05-856 母 血 hpv-dna+221442. 84(8. 17210. 59) <0. 01-266*括号内为95%的可信区间2. 3羊水的hpv感染率 孕屮、晚期感染 率分别为4.54%(1/22) > 12. 90% (4/31),经检验，差异无显著性 意义(fisher精确检验：

10、p(双侧)=0. 389)；不过，孕屮期羊水 均系经腹行羊膜腔穿刺取得，有1例hpv阳性，而孕晚期羊水的 hpv阳性病例中亦有1例系从未破膜的剖宫产术中取得。羊水hpv 感染与宫颈分泌物及母血hpv感染的相关性统计学分析显示前 者相对危险度低于后者，但两者未见显著性差异。研究观察到， 在孕中晚期各有1例经腹取得的羊水中检出了 hpv-dna。2. 4 脐血的hpv感染率 为3& 71%(12/31)；脐血hpv感 染与孕母宫颈分泌物及母血hpv感染的相关性，见表2。表2孕晚期脐血hpv感染状况与孕母hpv感染状况的关系 脐血hpv-dna相对危险度*(rr) p+-宫颈分泌物 hpv-

11、dna+10121. 85 > 0. 05-27 母 血hpv-dna+10 77. 60(1. 2446. 61) <0. 05-212*括号内为95%的可信区间2.5产时新生儿咽部抽吸物的hpv感染率 为41. 94%(13/31),其hpv感染与孕母宫颈分泌物及母血hpv感 染的相关性,见表3。表3产时新生儿咽部抽吸物hpv感染状况与孕母hpv感染状况 的关系咽部hpv-dna相对危险度*(rr)p+-宫颈分泌物 iipv-dna+12109. 60(1. 0290. 35) < 0. 05-27 母 血hpv-dna+10 74. 12>0, 05-212 *括

12、 号内为95%的可信区间2. 6宫颈分泌物hpv阳性的孕妇经阴道 分娩的传播率为55. 56% (10/18),经剖宫产的传播率为 50. 00%(2/4),经检验其差异无显著性意义(fisher精确检验： p(双侧)= 1. 000)；但其屮1例系未破膜的剖宫产儿，其咽部抽 吸物的hpv-dna阳性，其母血、脐血及胎盘均为hpv-dna阳性， 而孕母宫颈分泌物为hpv-dna阴性。3讨论3. 1孕期hpv亚临床感染 妊娠妇女hpv亚临床感染率多 数研究表明以孕晚期明显23,少数研究提示不同孕期妊娠 妇女并无差别，认为感染率高低与妊娠妇女年龄相关，<30岁 组感染率高于>30岁组4

13、。本文选取年龄(26. 42±5. 38)相近(p>0. 05)的孕早、中、晚 期妇女，研究结果表明：随着孕期的增长，宫颈分泌物和母血的 hpv感染率均呈升高趋势，孕晚期明显高于孕早期、孕中期；而 孕早期、孕中期的hpv感染率相近。其升高机制，认为与孕期细 胞免疫功能受抑制、激素水平升高相关；据sridama等5报 道，孕晚期th/ts之比下降明显；孕晚期激素水平持续升高，而 性激素及糖皮质激素能增强hpv基因非编码区的转录活性6 7。3.2 hpv感染的产道传播本文结果显示产时新生儿咽部 抽吸物中iipv阳性率达41. 94%(13/31),母婴传播率达 59. 09%(13

14、/22),与多数文献报道相一致8。分析新生儿咽部 抽吸物hpv感染主要与宫颈感染相关，其阳性相对危险度是阴性 的9. 6倍，表明新生儿hpv可经感染产道直接接触而传播。不过, 本文资料因剖宫产例数少，分娩方式的影响无显著性差别。但有 1例未破膜的剖宫产儿，咽部抽吸物hpv检出阳性，其孕母宫颈 分泌物hpv阴性，而母血、脐血和胎盘hpv阳性，提示存在宫内 感染。因此，我们认为剖宫产不能完全阻断母婴间的传播9。3.3孕期hpv感染的母婴宫内垂直传播 通过pcr检测 hpv-dna证实，从脐血、胎盘、羊水均可检出hpv感染，且孕晚 期感染率明显增高。其感染与母血及宫颈分泌物感染相关性分析 (表13)

15、表明，母血感染是脐血、胎盘感染的主要來源。本文 还在孕中、晚期各有1例经腹取得羊水中检出hpv-dnao这些结 果揭示孕期hpv亚临床感染可经羊水、胎盘发生宫内垂直传播， 证实新生儿hpv感染途径除经产道传播外，还存在宫内传播，其 传播率主要与母血感染有关。作者简介：彭萍，女，1967-10-17生，湖南省常德市人， 汉族，1998年军医进修学院硕士毕业，广州军区总医院妇产科 主治医师；发表论文3篇。电话：(020)86662205-53785作者单位：彭萍（解放军总医院，北京100853）翁霞云（解放军总医院，北京100853）谷志远（解放军总医院，北京100853）李琦（解放军总医院，北京

16、100853）参考文献：叮郑鹏生，崔满生，李守柔应用多重聚合酶链反应技术检测人类乳头瘤病毒dna j 中华妇产科杂志,1993, 16（5）： 266-268.rando rf, lindhein s, hasty l et al. increasedfrequency of detection of human papillomavirus deoxyribonucleic acid in exfoliated cervical cells during pregnancy j am j obstet gynecol, 1989, 161 (1):5054.czegledy j, gerge

17、ly l, endrodi i. detection of humanpapillomavirus deoxyribonucleic acid by filter in situ hybrdization during pregnancy j j med virol, 1989, 28:250-253kemp ea, hakenwerth am, laurent si et al. human papillomavirus prevalence in pregnancy j obstet gynecol, 1992, 79(5):649-652.sridama v, pacini f, yan

18、g sl et al. decreased levels of helper t cell: a possible cause ofimmunodeficiency in pregnancy j n engl j med, 1982, 307:352-355.6 mittai r, tsutsumi k, pater a et al. human papillomavirus type 16 expression in cervical keratinocytes: role of progesterone and glucocorticoid hormones j . obset gynecol, 1993, 81:5-&michelin d, gissmann l, street d et a 1. regulation of human papillomavirus type 18 in vivo: effects of estrogen and progesterone in transgenic mice j gynecol oncol, 1997, 66(2) : 202-205.tseng cj, liang cc, soong yk et al. perinatal transmission of