主要荧光素一览表

1、六氯荧光素， Hexachloro fluorescein，是荧光素衍生物的一种1)荧光素类Fluorescein标准荧光素( Reference standard )之一 , 在其基础上进行结构改造 , 可产生一系列荧光素衍生物。Fluorescein 适用于 Argon-ion Laser的 488nm 光谱线，有相对高的荧光吸收，较好的荧光产率以及良好的水溶性。标记蛋白时通常不会产生蛋白沉淀。与其他荧光素类衍生物一样，Fluorescein 具有光淬灭率高，pH 敏感性强与发射波谱宽的缺点。 主要应用于聚焦激光扫描微阵列( Confocal laser scanning microsco

2、py )和流式细胞计应用( Flow cytometry )。FITC异硫氰酸荧光素， Fluorescein isothiocyanate ，是荧光素衍生物的一种， 5-FITC 较 6-FITC 更经常 使用。FITC 的异硫氰酸基能与氨基反应，可用于标记氨基修饰DNA 一旦形成，产物极为稳定。适用于Argon-ion Laser 的 488nm 光谱线，Abs/Em=492/519nm ( pH=)。与蛋白的结合力也强。FITC 具有荧光素衍生物的普遍特性。在水中易变坏，不能长久保存。FITC-Oligo 广泛用于杂交探针；FITC-多肽用于 Edman 降解蛋白测序；FITC 也经常被

3、用于蛋白电泳检 测(即使是毛细管电泳)和荧光能量激发转移测试。FAM羧基荧光素，Carboxyfluorescein，是荧光素衍生物的一种，5-FAM 较 6-FAM 更经常使用。Carboxyfluorescein-5-succimidyl ester，即 5-FAM(NHS 广泛存在于荧光标记试剂盒。与 FITC 相比，FAM 与氨基反应更快，产物也更稳定，但FITC 结合蛋白的量更大且进程更易于控制。FAM 也适用于 Argon-ion Laser的 488nm 光谱线，Abs/Em=492/518nm(pH=)，具有荧光素衍生物的普遍特性，在水中稳定。5-FAM 主要应用于 DNA 自

4、动测序中，标记其中的d/ddCTP( PE 公司)，也经常用于 PCF 产物定量，核酸探针等。TET四氯荧光素， Tetrachloro fluorescein ，是荧光素衍生物的一种。TET 以及 HEX 均是在 FAM 基础上加以改进的，氯原子使FAM 勺 Abs 与 Em 值都产生一定的红移，并在一定程度上减弱了 pH 敏感性。TET 也适用于 Argon-ion Laser 激发光源，Abs/Em=521/536nm。TET,HEXFAM 和 TAMRA 可配合用于 DNA 自动测序中，其中 TET 用于标记 d/ddATP,HEX 用于标记 d/ddGTP 或d/ddATP (PE

5、公司)HEX适用于 Argon-ion Laser激发光源，Abs/Em=535/556nm（请参见 TET 介绍）JOE羧基 -4,5- 二氯 -2,7- 二甲氧基荧光素， Carboxy-4,5-dichloro-2 ， 7-dimethoxyfluorescein ， 是荧光素衍生物的一种， 6-JOE 更被广泛使用。JOE 荧光产量高，pH 敏感性弱，适合于标记蛋白。6-JOE 也适合于 Argon-ion Laser 激发光源，Abs/Em=520/548( pH=)常用于 DNA 自动测序，标记 d/ddATP，也经常被用于进行电泳检测与PCF 产物定量。( 2)罗丹明类( Rho

6、damine dye )R 110标准荧光素( Reference standard )之一 , 在其基础上进行结构改造 , 即可产生一系列罗丹明类衍生物。与 Fluorescein 类衍生物相比，罗丹明类荧光素具有更强的光稳定性，更高的荧光产量以及更低的pH敏感性罗丹明类荧光素极为适合于标记寡核甘酸，但蛋白会引起大多数罗丹明类荧光素的荧光淬灭，故大多 数不适宜用于标记蛋白。R110 被用于 DNA 自动测序。TAMRA全称羧基四甲基罗丹明，即 Carboxytetramethylrhodamine ，是罗丹明类荧光素衍生物， 6- TAMRA 被 广泛使用。TAMRA1 少数几个能用于标记蛋

7、白的，6- TAMRA1 用于 Argon-ion Laser 激发光源，Abs/Em=547/573nm(Ph=)，6-TAMRA( NHS 常用于荧光标记试剂盒中。6- TAMRA 主要用于 DNA 自动测序中。Texas RedTexas Red 是一个长波长荧光素 , 与 Fluorescein 几乎没有波谱重叠 , 只适合于 Ar-Kr Laser 的 568nm 光谱线或He-Ne Laser 的 594 光谱线 , 比 Tetramethylrhodamine 和 LissamineTM Rhodamine B 波长更长， 荧光量更高。Texas Red 在荧光微阵列和流式细胞计

8、中更被经常作为第三波长标记 (Third labels) 。(3)BODIPY 类BODIPY 类荧光素是由分子探针公司开发，以用来替代那些有部分缺陷的传统荧光素，普遍具有荧光产量高，pH 敏感性低(无离子变化)，光稳定性强以及发射波谱窄的优点，故BODIPY 类荧光素已被广泛用于核酸，脂肪酸，磷脂以及各种受体。同时，由于在电泳过程中对序列片段影响小，故已被逐渐用于DNA自动测序。但相对而言 , BODIPY 类荧光素并不特别适合标记蛋白 .BODIPY FL 可代替 FluoresceinBODIPY R6G代替 Rhodamine 6GBODIPY TMRT 代替 Tetramethylr

9、hodamineBODIPY TR 可代替 Texas Red这些 BODIPY 类荧光素具有与被替代物几乎类似的光谱特征，能共用同样的光过滤器与激发光源，但更具优点。(4)其他荧光素Cascade blueCascade blue 是在芘(pyrene)结构基础上改造得来的，即 sulfonated pyrene,它是一种短波长紫外激 发荧光素，与另一种常用的紫外荧光素 Aminocoumarin 相比Cascade blue 的 Em 与 Fluorescein 有更小的 光谱重叠，有更高的荧光吸收和更大的荧光产量 .Cascade blue 在 376nm 处存在第二个吸收峰，水中不稳定

10、。Cascade blue 主要用于标记蛋白，作为极性示踪子(polar tracer)可进行膜蛋白定位等.但也能用于标 记核酸和葡聚糖。Aminocoumarin一种短波长紫外激发荧光素，通常使用的是7-amino-4-methylcoumarin,红移现象明显，比 Cascadeblue 有更长的发射波长，肉眼观察明显，更适用于confocal。表 1 主要荧光激发光源Excitation sourcePrincipal spectrum lines(nm)Mercury-arc Lamp366,405,436,546,578Xenon-arc Lamp250-1000(continous

11、)Tungsten-halogen Lamp350-1000(continous)Cr:LiSAF Laser430Helium-cadmium Laser325,442Argon-ion Laser488,514Nd:YAG Laser532Helium-neon Laser543,594,633Krypton-ion Laser568,647表 2:主要荧光素一览表DyeAbs/Em Max(nm)NotesAcridine orange500/526green fluorescence bound to DNA, and red shift to 650 uponassociation

12、with RNA, useful for flow cytometry.FAM492/518Most widely used green fluorescein, absorption overlaps the 488nm spectral line of the argon-ion laser, prone to photobleaching,pH sensitive betweenpH 5-8,is widely used for automated DNA sequencingFITC494/519Subject to argon-ion laser, widespread use fo

13、r hybridization,immunoreagent, protein sequencing andFRETHEX535/556pH insensitive, used for automated DNA sequencingJOE520/548Intermediate-wavelength spectra, important dye for automatedDNA sequencing.Lissamine rhodamineB570/590Optimal for 568 nm excitation photostable,used in confocal laserscanning

14、 to label protein than TMR.Pyrene340/378Excimer:470Long excited-state lifetime, spectral shifts due to excimeremission,used in protein comformation and oxygen sensors.ROX570/590spectra between Lissamine rhodamine B and Texas Red, used inautomated DNA sequencing.TET521/536pH insensitive, used for aut

15、omated DNA sequencingTetramethylrhodamine555/580pH insensitive , photostable,Widely used for automatedDNA sequencingTexas Red595/615Suited for the Ar-Kr 568nm and He-Ne 594nm spectra, brighterand lower background than other red dyes as third label, used inconfocal laser scanning microscopesDansyl Ch

16、loride372/NDEnvironmentally sensitive, large stokes shift forprotei sequencingDabcyl453/noneBroad absorption, no fluorescence, as a quenchinggroup useful for fluorescence resonance energytransfer (FRET)CR-6G525/555Spectral between fluorescein andtetramethylrhodamine, good photostable, preferrednucleotide off proteinCascade Blue400/420Resistant to quenching upon protein conjugation, Water soluble.BODIPY R6G528/547Substitute for rhodamine