病毒的分离与鉴定

1、实 验 九病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离与鉴定（一）1、病毒的培养与鉴定、病毒的培养与鉴定2、病毒的、病毒的CPE过程过程3、病毒的电镜照片观察、病毒的电镜照片观察4、流感病毒的分离鉴定（一）、流感病毒的分离鉴定（一） （1）鸡胚尿囊腔接种法）鸡胚尿囊腔接种法 （2）病毒的动物接种法小白鼠脑内）病毒的动物接种法小白鼠脑内 接种接种流感病毒的分离鉴定（1）鸡胚尿囊腔接种法）鸡胚尿囊腔接种法（2）病毒的动物接种法小白鼠脑内接种）病毒的动物接种法小白鼠脑内接种目的：熟悉人工培养病毒的常用方法及其操目的：熟悉人工培养病毒的常用方法及其操作技术。作技术。实验材料：实验材料：(1)来亨鸡受精卵、卵架、检

2、卵灯。来亨鸡受精卵、卵架、检卵灯。(2)碘酒、酒精消毒棉球。碘酒、酒精消毒棉球。(3)灭菌的手术刀、镊子、剪刀。灭菌的手术刀、镊子、剪刀。(4)1ml注射器及针头。注射器及针头。(5)病毒液病毒液:流感病毒、新城鸡瘟病毒。流感病毒、新城鸡瘟病毒。(6)无菌胶布。无菌胶布。鸡胚尿囊腔接种法 分离鉴定程序分离鉴定程序 病人急性期咽喉含漱液病人急性期咽喉含漱液 (经双抗处理经双抗处理) 鸡胚培养鸡胚培养(羊水囊或尿囊腔羊水囊或尿囊腔) 35 ，72h 收获：取羊水或尿囊液作血凝试验收获：取羊水或尿囊液作血凝试验 (+) () 作血凝抑制试验作血凝抑制试验 盲传鸡胚两代，仍为盲传鸡胚两代，仍为 阴性时

3、报告阴性阴性时报告阴性(1)取孵育取孵育1012d鸡胚鸡胚,在检卵灯下画出气室在检卵灯下画出气室界线界线,于胚胎附近无大于胚胎附近无大血管处画出标记作为血管处画出标记作为注射入口注射入口.(2)将卵置于卵架上将卵置于卵架上,消消毒标记处毒标记处,用无菌剪刀用无菌剪刀尖在标记处打一小孔尖在标记处打一小孔.实验方法：(3)用灭菌注射器吸取流感病毒液用灭菌注射器吸取流感病毒液0.2ml,由小孔刺入由小孔刺入0.5cm后后,进行注射进行注射.(4)注射后注射后,用无菌胶布用无菌胶布封孔封孔,置置35度温箱孵育度温箱孵育.(5)每日在灯下检视鸡每日在灯下检视鸡胚情况胚情况(若鸡胚在接种若鸡胚在接种后后2

4、4h内死亡为非特异内死亡为非特异性死亡性死亡,应弃之应弃之). 实验方法：实验材料实验材料 (1)脑炎病毒悬液脑炎病毒悬液. (2)小白鼠小白鼠(3W龄龄). (3)1ml的注射器、针头的注射器、针头. (4)碘酒、酒精棉球碘酒、酒精棉球.实验方法实验方法: (1)以左手将小白鼠头部和体部固定于台面以左手将小白鼠头部和体部固定于台面. (2)用碘酒、酒精棉球消毒头部右侧眼、耳间部位用碘酒、酒精棉球消毒头部右侧眼、耳间部位 病毒的动物接种法小白鼠脑内接种 (3)以以1ml的注射器抽提病毒悬液的注射器抽提病毒悬液,以右手持注射器以右手持注射器,将针头向眼外与耳根连线中点略偏向耳的方向刺将针头向眼外与耳根连线中点略偏向耳的方向刺入颅腔入颅腔,约进针约进针23mm,注入量注入量0.020.03ml. (4)注射完毕注射完毕,将用过之物煮沸消毒将用过之物煮沸消毒.实验结果实验结果: 接种后每日观察动物接种后每日观察动物2次次.动物一般在接种后动物一般在接种后3-4d后后开始发病开始发病,食欲减退食欲减退,活动迟缓