小混混与诺贝尔奖

1、 PCR PCR技术技术：能将微量的能将微量的DNADNA大幅增加。因此，无论是化大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的只要能分离出一丁点的DNADNA，就能用，就能用PCRPCR加加以放大，进行比对。这也是以放大，进行比对。这也是“微量证据微量证据”的威的威力之所在。力之所在。 2 PCR 2 PCR技术简史技术简史体内DNA的复制核酸体外扩增的设想聚合酶链反应的发明ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TA

2、GCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35解旋酶解链酶DNA解旋解链合成引物子链延长ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35DNA解旋解链合成引物子链延长GGAUCG5AUCGCG5引物酶引物酶RNA引物RNA引物ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35DNA解旋解链合成引物子链延长GGAUCG5AUCGCG5TAGCGCTATCGCATCGACGCT3ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG3DNA聚合酶DNA聚合酶1983年春

3、天一个周五的晚上，年春天一个周五的晚上，Mullis开车的时候开车的时候, 瞬间感觉两排路灯就是瞬间感觉两排路灯就是DNA的两条链，自己的车和对面开来的车象是的两条链，自己的车和对面开来的车象是DNA聚合酶，面对面地合成着聚合酶，面对面地合成着DNA， 引物引物引物引物XXDNA聚合酶klenow片段1986年，Mullis首次提出耐高温酶的使用。()40 50 60 70 80 90 100100 80 60 40 204种dNTP混合物 各200umol/L引物 各10100pmol模板DNA 0.12ugTaq DNA聚合酶 2.5uMg2+ 1.5mmol/L缓冲液 10uL双蒸水至

4、100uL1234522557294时间（min）适温延伸3高温变性1低温退火2重复1-3步25-30轮循环目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性DNA变性形成2条单链子链延伸DNA加倍 4 PCR 4 PCR的基本原理的基本原理温度（）1234522557294时间（min）温度（）适温延伸3高温变性1低温退火2重复13步2530轮目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性子链延伸DNA加倍DNA变性形成2条单链模板DNA95高温变性50引物1引物2DNA引物低温退火引物1引物2DNA引物72TaqTaq酶酶TaqTaq酶酶适温延伸第1轮结束TaqTaqTaqTaq第2轮第2轮结束模板DNA第1轮扩增第2轮扩增第3轮扩增第4轮扩增 第5轮扩增第6轮扩增 5 PCR的基本过程 第一代第一代 定性的定性的PCR PCR 6 PCR的类型 研究研究 基因克隆，DNA测序，分析突变 诊断诊断 细菌、病毒、寄生虫检测，诊断 人类基因组工程人类基因