祖师麻凝胶膏剂提取工艺研究

1、祖师麻凝胶膏剂提取工艺研究摘要：目的 优选祖师麻凝胶膏剂的提取工艺。方法 以祖师麻甲素 含量为考察指标，以溶剂用量、浸泡时间、提取时间为考察因素，采用正 交试验进行工艺优选。结果祖师麻药材的最佳提収工艺为：脱脂祖师麻 药材加水30 ml,浸泡1.5 h,回流提取2.0 h,提取1次。祖师麻甲索的 平均含量为9. 83 mg/go结论 该提取工艺稳定可行，节约能源，为祖师麻 凝胶膏剂的牛产工艺提供了依据。关键词：祖师麻凝胶膏剂；提取工艺；正交试验；祖师麻甲素；高效 液相色谱法d0i： 10. 3969/j. issn. 1005-5304. 2014. 08. 021屮图分类号：r283. 5文

2、献标识码：a文章编号：1005-5304 （2014） 08-0073-03祖师麻凝胶膏剂为本院自主研发的中药制剂，山祖师麻提取精制的浸 膏粉和基质组成，具有祛风除湿、活血止痛功效。其主药祖师麻笏材主要 来源于瑞香科thymelaeaceae瑞香属黄瑞香daphne giraldii nitsche、 唐古特瑞香d. tangutica maxiam或凹叶瑞香d. retusa hemsl的根皮和茎 皮，主要有效成分为瑞香素（7, 8-二轻基香豆素，乂称祖师麻甲素， daphnetin）瑞香昔（祖师麻乙素，daphnin） 7-疑基香豆素（伞形酮， 又称伞形花内酯,7-hydroxycouma

3、rin）、紫丁香昔（syringin）等1-4 o本研究采用正交试验设计，以祖师麻甲素的含量为指标，优选祖师麻凝胶膏剂的最佳提取工艺。1仪器与试药agilentll20型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），ae260型万分之 一电子天平（瑞士 mettle toledo基金项目：甘肃省普通中医药科研课题（gzk-2011-81）；兰州市第三 批科技计划项目（2013-3-39）通讯作者：石晓峰，tel: e-mail: shixiaofeng 2005sina com公司），cp225d型十万分之一电子分析天平（徳国sartorius公司）， shz-d型循环水式真空

4、泵（河南巩义市予华仪器有限责任公司），sk3310hlc 型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司），800型离心沉淀器（上海 手术器械厂）。祖师麻药材由甘肃泰康制药冇限责任公司提供，原植物经甘肃省医学 科学研究院何福江研究员鉴定为瑞香科植物唐古特瑞香d. tangutica maxi am；祖师麻甲素对照品（批号110900-201006,供含量测定用）山中 国食品药品检定研究院提供；甲醇、乙睛均为色谱纯，水为超纯水，其他 试剂均为分析纯。2方法与结果2.1祖师麻药材的脱脂处理称取粉碎过筛（2040目）后祖师麻药材500 g,置于圆底烧瓶中， 加入石油瞇（6090 °c） 500

5、ml,浸泡24 h,过滤，药渣晾干，即得祖师麻脱脂药材。2.2对照品溶液的制备精密称取祖师麻甲素对照品适量，加超纯水加热溶解，定容，制成每 1 ml含祖师麻甲素0. 189 mg的对照甜溶液。2. 3供试品溶液的制备精密称取祖师麻脱脂药材0.5g,加水30 ml,称定质量，浸泡1.5h, 【口i流提取2h,于室温放至恒重，过滤，滤液用超纯水定容至100 ml容量 瓶。取10 ml上述溶液，3000 r/min离心30 min,上清液过0. 45 u m微 孔滤膜，作为供试品溶液。2.4色谱条件与系统适用性试验色谱柱:agilent eclipse plus c18 (4. 6 mmx250 m

6、m, 5 u m)； 流动相：乙猜-0.1%磷酸水溶液(15 : 85)；流速:1.0ml/min；检测波长: 327 nm5；柱温：30 °c；进样量：20 u lo精密吸取上述对照品溶液、供试詁溶液各20 pl,注入液相色谱仪， 在此色谱条件下，样品中祖师麻甲素得到较好分离，与其相邻色谱峰分离 度15,理论塔板数以祖师麻甲素峰面积计算不低于3000o色谱图见图loab注：a.对照詁；b.供试品；1祖师麻甲素图1祖师麻药材中祖师麻甲素高效液相色谱图2. 5线性关系考察分别精密吸取祖师麻甲素对照品溶液100、150、200、250、300、350 l至lnil容量瓶中，用超纯水稀释至

7、刻度。精密吸取上述対照品溶液各 20 ul,依次进样，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品质量（ug） 为横坐标，进行线性回归，得祖师麻甲素回归方程y=4. 090 28 x 107x+1 520 230 （尸0999 2）,表明祖师麻甲素在0. 378-1.323 pg范围内与峰面积 积分值呈良好线性关系。2. 6精密度试验精密吸取对照品溶液20 ul,连续进样6次，测定峰面积，以峰面积计算得 rsd二0. 67%o2. 7稳定性试验取同一份供试品溶液，在上述色谱条件下分别于0、2、4、6、8、10、24 h进样20 pl,记录峰面积，结果祖师麻甲素峰面积的rsd=2.41%（n=6）, 表

8、明供试品溶液在24 h内基本稳定。2.8重复性试验精密称取祖师麻脱脂药材0. 5 g,共6份，按供试甜溶液的制备方法 制备，按上述色谱条件进样20 ul,测得祖师麻甲素平均含量为9. 83 mg/g, rsd=2. 07%,表明该方法重复性较好。2.9加样冋收率试验取祖师麻脱脂药材（含祖师麻甲素9. 85 mg/g）约0. 1 g,共9份，精密称定，按样品含量的80%、100%、120%分别加入祖师麻甲素对照品溶 液（1.03 mg/g）,按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.4”项下色 谱条件进样20 ul,测定峰面积，计算回收率，结果祖师麻甲素平均回收 率为99. 35%, rsd二

9、1.46%,见表1。表1祖师麻甲索加样冋收率试验取样量(g)样品中含量(mg)加入量(mg)测得量(mg)回收率(%)平均冋收率(%) rsd(%)0. 1000 0. 985 0. 824 1.800 0 98. 850. 1003 0. 988 0.824 1.819 0 99.310. 1001 0. 986 0. 824 1. 572 8 98. 500. 1003 0. 988 1.030 1. 778 8 101.230. 1002 0. 987 1.030 1. 766 2 99. 80 99. 35 1.460. 1003 0. 988 1.030 1. 763 7 99. 5

10、10. 0998 0. 983 1.236 1.949 6 99. 960. 1002 0. 986 1.236 1. 961 9 101. 350. 1002 0. 986 1.236 1.931 4 97.893提取工艺预试验3. 1提取次数的选择精密称取祖师麻脱脂药材0.5 g,加40%乙醇20 ml,称定质量，浸泡1 h,水浴回流3次，每次2 h,于室温放至恒重，分别定容于100、50、 25 ml容量瓶，按“2.3”项下方法制备，按“2. 4”项下色谱条件进样20 口l测定。结果表明，提取1次时祖师麻甲索的含量大于3次提取总量的 90%,最终确定提取次数为1次。3.2提取溶剂的选择精

11、密称取祖师麻脱脂药材0. 5 g,共4份，依次加入水及20%、40%、 60%乙醇20 ml,按“2.3”项下方法制备，按“2.4”项下色谱条件进样 20 测定。结果表明，当水作为提取溶剂时，祖师麻甲索的含量最高， 故最终确定以水为提取溶剂。4提取工艺正交试验4. 1试验设计选择溶剂用量（a）、浸泡时间（b）、提取时间（c） 3个影响因素考 察祖师麻脱脂药材中祖师麻甲素的最佳提取工艺，每个因素各取3个水平, 采用l9 （34）正交表进行试验，因素水平见表2。表2正交试验因素水平表水平溶剂用量（ml）浸泡时间（min）提取时间（min）abc1 20 30 602 25 60 903 30 90

12、 1204. 2正交试验结果与分析按“23”项下方法制备供试品溶液,按“2. 4”项下色谱条件进样， 以祖师麻甲素的含量为评价指标，进行直观分析和方差分析。止交试验结 果见表3,方差分析见表4。表3正交试验结果试验号a b c d祖师麻甲素含量(mg/g)6. 8377. 068 7.4658. 393 8.96710. 125 19. 825 310. 003 8均值 1 8.452 7. 124 8.440 8.603均值 2 8.621 & 673 8. 489 8.617均值 3 8. 709 9. 985 8.853 8.561r 值 0. 257 2.861 0.413 0

13、. 056表4方差分析结果方差来源偏差平方和自由度f值p值a 0. 102 2 20. 40 <0. 01b 12.304 2 2460. 80 <0. 01c 0. 305 2 61.00 <0.01d 0. 010 2注:f0. 05 (2，2) =19. 00, f0. 01 (2, 2) =99. 00极差分析结果表明，各因素作用依次为b>oa；方差分析结果表明， 因素a、b、c的影响均有统计学意义(p<0.01)o最佳提取工艺条件为a3b3c3, 即加30 ml水、浸泡90 min.水浴回流提取2. 0 h。4. 3验证试验为进一步考察优选丁艺的可靠性及

14、稳定性，按上述最佳水提丁艺进行 验证试验，测定结果见表5。表5验证试验结果试验号药材质量(g)祖师麻甲素含量(mg/g)1 0. 499 2 9. 8312 0. 499 0 9. 7533 0. 501 3 9. 9795讨论根据祖师麻甲素的物理性质，祖师麻甲素易溶于热水、甲醇、乙醇6, 在配制对照品溶液时，可先加入少量乙醇，或加入超纯水不断加热使之完 全溶解。本试验中选择最住提取溶剂为水，故选用超纯水配制对照品溶液。本研究采用正交试验法对提取条件进行了优化，结果表明浸泡时间对 祖师麻甲素含量影响最大，其次是提取时间、溶剂用量，最终确定提取工 艺为加30 ml水、浸泡90 min,于95 &

15、#176;c水浴锅加热回流提取2. 0 h。文献报道多采用甲醇或乙醇作为提取溶剂7-8,工业生产多选用乙 醇作为提取溶剂。本试验对溶剂进行了筛选，采用80%、60%、40%乙醇及 水作为提取溶剂。当乙醇浓度达到80%,提取率最低，祖师麻甲索的峰形 不対称，分离度很低；而当提取溶剂为水时，所得祖师麻甲素含量明显高于乙醇作为提取溶剂。因此采用水作为提取溶剂，更有利于工业大生产。 参考文献：1李书慧，吴立军，殷红英祖师麻化学和药理活性研究进展 中国中药杂志，2002, 27 (6)： 401-4032静芸芸，吴皓，狄留庆，等瑞香属植物化学成分和/|物活性研 究进展j中华中医药学刊,2008, 26 (12)： 2579-2581.3刘妍，游富英，毕慧敏.hplc测定祖师麻注射液中祖师麻甲素的 含量j光谱实验室,2010, 27 (3)： 1218-1219.4李爽，石晓峰，范彬，等贴敷后祖师麻膏药中祖师麻甲素和7-径基香豆素的残留量测定j中成药，2013, 35 (6)： 1209-12