正交试验法优选红药片提取工艺探究

1、正交试验法优选红药片提取工艺探究【摘要】目的优选红药片的最佳提取工艺。方法以提取液中人参皂昔rgk人参皂昔rb1.三七皂昔r1的含量之和 以及总固体得率为指标，采用正交试验法，优选提取工艺。结果处方药材的最佳提取工艺为70%乙6倍量，提取3次，1 h/次。结论优选的提取工艺各活性部位提取率高。【关键词】正交试验法；红药片；提取工艺study on the extraction process of hongyao tablet by orthogonal designwu xing-mei (first hospital of foshan, foshan, guangdong, 528000

2、,china )abstract objectiveto optimize the extraction process of hongyao tablet. methodsorthogonal test was employed for selecting the optimum of extraction process by the indexes of the contents of ginsenoside rg1, ginsenoside rb1, notoginsenoside r1 and total solid matters. resultssix volumn of 70%

3、 alcohol, extracting 3 times with an hour for each time was considered the optimum extraction process of hongyao tablet. conclusionthe considerable extraction rate active components in the drugs are achieved by applying the selected technics.key words orthogonal test; hongyao tablet;extraction proce

4、ss红药片处方收载于中药成方制剂二十册中，由三七、川 莒、白芷、当归、红花等组成，具有活血止痛、去淤生新的 功效，临床上用于跌打损伤、淤血肿痛、风湿麻木的治疗， 取得满意效果。本处方药味多，成份复杂，原制剂工艺简单, 因此本实验以最大限度地提取药材中的有效成份，避免有效成份的分解流失和无效成份的溶出为原则，进行红药片提取 文献报道口:红药片具有显著的抗炎阵痛作用，三七是处方 君药，有效成份是三七总皂昔。本实验根据方中药物的性质 和现代药理学研究结果，以三七的有效成份人参皂昔rg1. 人参皂昔rbk三七皂昔r1的含量之和（以下简称i ）及总 固体得率为指标，采用正交试验法优选提取工艺。工艺的研究

5、，以减小剂量、创新剂型,提咼临床疗效。1材料和仪器waters2695/2996型高效液相色谱仪（美国）； 所有药材均购自广州致信中药饮片有限公司。人参皂昔rb1 （批号:110704-200420）.人参皂昔 rg1 （批 号:"0703-200420）、三七皂昔 r1（批号:110745 - 200415） （中国药品生物制品检定所b乙月青、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1含量测定方法的建立2.1.1 色谱条件色谱柱 kromasil c18(250 mm x4.6 mm , 5 pm);以乙睛为流动相a ,以水为流动相b ,按表1中的 规定进行梯度洗脱；检测

6、波长为203 nmo理论板数按三七 皂昔r1峰计算是4 600。2.1.2标准曲线的绘制精密称取人参皂昔rg仁人参皂昔 rb1,三七皂昔r1对照品适量，加甲醇制成每1 ml含人参 皂昔rg11.011 mg、人参皂昔rb11.004 mg.三七皂昔 r10.501 mg的混合溶液，即得对照品溶液。精密吸取上述 对照品溶液 3jji、5 pl、10 pl 20 pk 25 pl 30 pl，注入液 相色谱仪。按上述色谱条件测定峰面积，以人参皂昔rg1. 人参皂昔rb1.三七皂昔r1微克数为横坐标，峰面积积分 值为纵坐标，计算回归方程，人参皂昔rg1 : y=274 270.16x-81 834.

7、17(r=0.999 9),线性范围:3.033 30.33 pg ;人参皂昔 rb1 : y=216 159.23x-125 326.50(r=0.999 7), 线性范围：3.012 - 30.12 pg ;三七皂昔r1 : y=239 788.93x-38 809.08(二0.999 9),线性范围:1.503-15.03 pg。2.1.3供试品溶液的制备2按处方量称取药材提取，精 密移取提取液5 ml ,(乙醇提取液则挥干乙醇后加水5 ml使 溶解),以水饱和的正下醇10 ml ,密塞，振摇10 min ,取上 清液，加3倍量以正丁醇饱和的水，摇匀，放置使分层，取正丁醇层，置蒸发皿中蒸

8、干，残渣加甲醇溶解，定容至5 ml , 作为供试品溶液。2.1.4空白溶液的制备按处方量称取除三七外的其余药 材进行提取，按“2.1.3”项下制备空白供试品溶液。2.1.5含量测定照中国药典2005年版一部附录vi 项高效液相色谱法测定。分别精密吸取对照品溶液与供试品 溶液各10 pl ,注入液相色谱仪，测定，即得。见图102.2醇提和水提工艺的比较2.2.1按处方量称取各药材，加10倍70%的乙醇，提取 两次，每次1.5 h ,过滤，合并滤液，并定容至1 000 ml量 瓶中，按七.1.3”项下制备供试品溶液。2.2.2按处方量称取各药材，加10倍水，提取2次，1.5h/次，过滤，合并滤液，

9、并定容至1 000 ml量瓶中，按u2.1.3j, 项下制备供试品溶液。测定上述两种药液中i的含量。结果见 表2,可见处方采用乙醇提取三七有效成份含量比水提取高30% ,所以确定以乙醇提取药材。2.3醇提工艺研究!1!2.3.1正交试验设计根据方中药物的性质和现代药理学研究结果，以测定人参皂昔rg、人参皂昔rbk三七皂昔r1 的含量和总固体得率为指标，用正交试验优选三七提取工艺 条件。根据预试验结果，选取影响提取效果的因素和水平，试验方案见表3。2.3.2样品溶液的制备：按处方量称取三七和其他药材,按l9 ( 34 )试验列号各条件分别回流提取、滤过，定容到1 000ml ,放置备用。2.3.

10、3总固体得率的测定：精密量取样品液100ml ,100 1059干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，至干燥箱内干 燥5 h,于干燥器内冷却至室温，待恒重时，精密称重，计 算总固体得率。结果见表4。2.3.4供试品溶液的制备:按“243”项下制备供试品溶液。2.3.5含量测定：按“2广项测定供试品溶液中i的含量。2.3.6试验数据与方差分析，见表5。2.3.7结果分析：比较各因素的极差值可以看岀，影响提取效果的因素顺序为c>d>a>b ,提取时间、提取次数对 提取效果影响显著，确定三七等药材较优的提取工艺条件为a2b1c2d3. a2b1c3d3o2.3.8比较验证实验：分别称取

11、药材以较优的工艺 a2b1c2d3. a2b1c3d3提取，按2广项下测定供试品溶液 中i的含量，测定总固体得率。经验证两工艺提取处方中i的 含量、总固体得率无统计学意义差异。确定处方的最优提取工艺为a2b1c2d3，即加6倍70%的乙 次。2.4三七提取率的研究2.4.1三七药材供试液的制备精密称定三七粉末(过四号 筛)0.6 g ,精密加入甲醇50 ml ,称定重量,放置过夜，置 809水浴上保持微沸2 h ,放冷，再称定重量，用甲醇补足 减失的重量，摇匀、滤过、取续滤液，即得。按“2广项下测 定供试品溶液中i的含量，并将此含量作为三七药材有效成份 含量与供试品进行对照。结果三七中i的含量

12、为0.095( g/g ), 符合中华人民共和国药典的要求。2.4.2提取率的计算采用优选的提取工艺，测定提取液中 i的含量，结果i的含量为0.092 ( g/g ),提取率为 0.092/0.095x100% =96.84% ,说明采用的工艺是完全可行 的。3讨论3.1通过考察处方的水提、醇提的必要性，发现：三七中 三七皂昔为三话类化合物，可溶于乙醇、乙醞、丙酮和氯仿, 由于多糖的引入可溶于水。处方中以70%乙醇提取比水为溶 剂的提取效果约高30% ,所以考虑以乙醇提取处方药材。3.2提取工艺过程中，单因素考察了三七最粗粉、粗粉、 中粉、细粉对提取效率的影响，最后预试得到，粗粉的提取 效率最高，中粉、细粉可能是粒径比粗粉小