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文档简介

1、优秀精品课件文档资料酶联免疫吸附实验(elisa) 目的和要求目的和要求v掌握elisa的原理、操作过程及注意事项v了解elisa实验结果的读取和分析实验原理实验原理v借助酶标记抗体（或抗原）在体外与抗原（或抗体）结合，通过相应底物被酶解后出现显色反应。反应颜色深浅与抗原（或抗体）量的多少有关。v特点：灵敏、特异v类型： 双抗体夹心法、竞争法、间接法等 双抗夹心法双抗夹心法elisa 竞争法竞争法 elisaelisa实验材料实验材料vbsa包被的测定板v酶标抗鼠igg抗体v待检血清，阳性血清，阴性血清v洗涤液： pbs吐温-20v底物液：邻苯二胺（opd）v终止液：10% h2s04实验步骤

2、实验步骤加入加入稀释稀释好的待测血清每孔好的待测血清每孔100100ul， 3737孵育孵育40min40min加入加入100ul100ul酶标抗体酶标抗体, 37, 37孵育孵育30min30min洗板洗板3 3次次, ,每次每次1min1min洗板洗板3 3次次, ,每次每次1min1min实验步骤实验步骤加入加入100ultmb100ultmb底物液避光室底物液避光室温孵育温孵育15min15min终止反应终止反应: :每孔加每孔加1 1滴滴1010硫酸硫酸结果观察结果观察注意事项注意事项u加样加样：应将所加物加在：应将所加物加在elisaelisa板孔的底部，并板孔的底部，并注意不可溅

3、出，不可产生气泡。注意不可溅出，不可产生气泡。u洗板洗板：每次洗液加入后，应静置：每次洗液加入后，应静置1 1分钟使清洗分钟使清洗更加彻底。末次洗板尽量将水甩干。更加彻底。末次洗板尽量将水甩干。u液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动轻晃动3030秒，秒，混匀混匀液体。液体。u底物有底物有毒性毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，尽量避，终止液对皮肤有腐蚀性，尽量避免接触。免接触。将待测血清将待测血清1:1001:100稀释后，再做倍比稀释到各孔，稀释后，再做倍比稀释到各孔，每孔每孔100l100l，见表。注意，见表。注意混匀混匀。1:1001:2001:4001:8001:16001:32001:64001:12800阴性阴性血清血清阴性阴性血清血清100ul血清稀释及加样血清稀释及加样1:1001:200

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