优质公开课 动物细胞工程 第一课时

1、 动物细胞工程动物细胞工程(基础基础)动物细胞培养动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞核移植动物细胞融合动物细胞融合生产单克隆抗体生产单克隆抗体动物细胞工程动物细胞工程一、动物细胞培养一、动物细胞培养1、概念：、概念：从动物机体中取出相关的从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。生长和增殖。（三）、过程（三）、过程幼龄动物幼龄动物剪碎组织剪碎组织原代细胞培养原代细胞培养取动物器官取动物器官和组织和组织细胞悬浮液细胞悬浮液传代细胞培养传代细胞培养胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理单个细胞单个

2、细胞胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理单个细胞单个细胞归纳归纳过程过程取取 的组织、器官的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液 酶酶 贴满瓶壁的细胞贴满瓶壁的细胞单个细胞单个细胞加入加入 液液动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物物胰蛋白胰蛋白培养培养接触抑制接触抑制原代原代 培养培养( (分装前分装前) )1-10代细胞代细胞遗传物质遗传物质 改变改变原代细胞原代细胞培养培养加加 液液4050代细胞代细胞)未未遗传物质遗传物质 改变改变无限传代无限传代已已传代传代培养培养胰蛋白胰蛋白 酶酶 1、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？的物质是什么成份？

3、催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质白质( (胶原蛋白等胶原蛋白等) )。2、细胞膜的主要成份是什么？、细胞膜的主要成份是什么？蛋白质和磷脂蛋白质和磷脂3、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？能能4 4、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？5 5、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？注意时间的控制注意时间的控制 不能，因为两者的最适不能，因为两者的最适PHPH不同，而正常组织不同，而正常组

4、织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PHPH较接近较接近1 1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 保证细胞保证细胞顺利的生顺利的生长增殖长增殖 添加一定量的抗生素，定期更换培养液添加一定量的抗生素，定期更换培养液添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清等。机盐、微量元素、动物血清等。（四）、动物细胞培养的条件（四）、动物细胞培养的条件2 2、营养、营养3 3、温度和、温度和PHPH 培养室中控制培养室中控制, ,使之达到使之达到36.5 36.5 0.5, 7.27.4 0.5, 7.27.4培养箱

5、中提供培养箱中提供O O2 2和和COCO2 2（95%95%空气和空气和5% CO5% CO2 2 ）4 4、气体环境、气体环境：二、动物体细胞核移植技术和克隆动物二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1 1、试着列举你所知道的克隆动物。克隆、试着列举你所知道的克隆动物。克隆动物的方法与植物组织培养一样吗？动物的方法与植物组织培养一样吗？ 2 2、请简述多利克隆的过程？、请简述多利克隆的过程？卵母细胞卵母细胞苏格兰黑面母羊苏格兰黑面母羊芬兰白面母羊芬兰白面母羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎另一头母绵羊子宫另一头母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多利羊多利羊多

6、利羊的培育过程多利羊的培育过程重组细胞重组细胞动物体细胞核移植技术和克隆动物动物体细胞核移植技术和克隆动物体细胞体细胞核移植核移植的过程的过程（以克（以克隆高产隆高产奶牛为奶牛为例）例）: : 将动物的一个细胞的将动物的一个细胞的细胞核细胞核，移入一个已经，移入一个已经去掉细胞核的去掉细胞核的卵母细胞卵母细胞中，使其重组并发育中，使其重组并发育成一个成一个新的胚胎新的胚胎，这个新胚胎最终发育成动，这个新胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为物个体。用核移植的方法得到的动物称为克克隆动物隆动物 核移植核移植胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植体细胞核移植（难度高）（难度高）受体

7、细胞：受体细胞：MM期的卵母细胞期的卵母细胞请同学们归纳请同学们归纳动物体细胞核移植概念动物体细胞核移植概念（依核源）（依核源）1.1.用于核移植的供体细胞一般都选用传代用于核移植的供体细胞一般都选用传代1010代以代以内的细胞，为什么？内的细胞，为什么？10代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未突变未突变.2.2.细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了体动物进行了100%100%的复制吗？为什么？的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大部分不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，来自供体细胞核，但核

8、外还有少部分但核外还有少部分DNA（如线粒体（如线粒体DNA）来自受）来自受体卵母细胞体卵母细胞.体细胞核移植技术存在的问题体细胞核移植技术存在的问题 2 2、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是细胞是 （ ） A A获得不死性的细胞获得不死性的细胞 B B1010代以内细胞代以内细胞 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞1 1、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 （ ） A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养A AD D课堂反馈练习课堂

9、反馈练习3 3、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（ ）A A、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞 分泌蛋白分泌蛋白B B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散C C、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡 过程中过程中D D、培养至、培养至5050代后传代细胞遗传物质没有发生改变代后传代细胞遗传物质没有发生改变B B4 4、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（ ）无毒的环

10、境无毒的环境 无菌的环境无菌的环境 培养基需要加入血培养基需要加入血清清 温度与动物体温相似温度与动物体温相似 需要需要O O2 2，不需要，不需要COCO2 2 COCO2 2能调节培养液能调节培养液PHPHA A、 B B、 C C、 D D、 D D5 5、动物细胞培养的特点、动物细胞培养的特点 （ ）细胞贴壁细胞贴壁 有丝分裂有丝分裂 细胞分化细胞分化 接触抑制接触抑制 减数分裂减数分裂 原代培养一般传原代培养一般传1 11010代代A A、 B B、C C、 D D、A A6 6、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：此回答：（1 1）容器）容器A A中放置的是动物器官或组织。它一中放置的是动物器官或组织。它一般取自般取自_。（2 2）容器）容器A A中的动物器官或组织首先要进行的中的动物器官或组织首先要进行的处理是处理是 ，然后用，然后用 酶处理，酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是是 。动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物物剪碎剪碎胰蛋白胰蛋白使细胞与培养液充分接触，便于培养使细胞与培养液充分接触，便于培养（3 3）培养首先在）培养首先在B B瓶中进行，瓶中的培养基成瓶中进行，瓶中的培养基成分有分有 _等。在此瓶中培养等。在此瓶中培养一段时间后