培养基配制及适用性检查操作规程（可编辑）

1、题目培养基配制及适用性检查操作规程共3页编码:0s-zl037-02制定人审核批准人制定口期审核口期批准口期颁发部门质量部颁发数量2份生效fi期分发单位质量部1目的：建立一个培养基配制操作规程，保证检验结果的准确。2范围：适用于微生物限度检查用培养基。3责任人：质检员、化验主管。4内容：4. 1微生物限度检查用培养基的配制4. 1. 1配制用具：蒸汽灭菌器、电炉、搪瓷缸、玻璃棒、三角瓶、棉塞、细绳、 牛皮纸、天平、量筒。4. 1. 2根据配制量称取干燥培养基质，置撼瓷缸屮，加入规定的纯化水或琼脂 等使其溶解，将搪瓷缸放到电炉上加热煮沸。4. 1. 3根据培养基的配方要求调节ph值，将配好的培养

2、基分装到若干个三角 瓶屮，瓶口塞好棉塞，盖上牛皮纸捆扎好，放入灭菌器屮，灭菌条件为121°c高 压灭菌15分钟。4. 1.4ph7.0氯化钠蛋引东缓冲液成分（g/l）蛋口月东氯化钠磷酸二氢钾磷酸氢二钾重量lg4.3g3.56g723g方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水缓冲液16克，加入1000ml纯化水 屮，微温溶解，分装，115°c高压灭菌30分钟备用。将配好的缓冲液分装到若干 支试管中，直接接种法缓冲液9ml/管，试管i i塞好棉塞；放入灭菌器中进行灭菌。4. 1.5营养琼脂培养基成分（g/l）蛋口月东氯化钠牛肉膏粉琼脂重量10g5g3g15g方法：称取使用该处方

3、生产的符合规定的脱水培养基33克，加入1000ml纯化水 中，加热煮沸溶解，分装，121°c高压灭菌15分钟备用。4. 1.6玫瑰红钠琼脂培养基成分（g/l）重量成分(g/l)重量5g葡萄糖10g硫酸镁0.5g磷酸二氮钾lg琼脂14g玫瑰红钠0.0133g方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水培养基30.5克，加入1000ml纯化 水屮，加热煮沸溶解，分装，121°c高压灭菌15分钟备用。4. 1.7胆盐乳糖培养基成分(g/l)重量成分(g/l)重量腺20g牛胆盐10g乳糖5g磷酸氢二钾4g氯化钠5g磷酸1氢钾1.3g方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水培养基37克，

4、加入1000ml纯化水中，加热煮沸溶解，分装，121°c高压灭菌20分钟备用。4. 1. 8培养基配制注意事项：(1) 采用干燥培养基，按说明配制，应对灭菌后的培养基ph进行校验。(2) 配制的培养基不应有沉淀，应于溶化后趁热过滤，灭菌后使用。(3) 培养基的分装量不得超过容器的2/3,以免灭菌时溢出。包装时，塞 子必须塞紧，以免松动或脱落造成染菌。(4) 培养基配制后应在2小时内灭菌，避免细菌繁殖。(5) 灭菌后的培养基应保存在225°c,防止污染，可在3周内用毕；保 存于密闭容器中，可在1年内使用。制备好的培养基放置时间不宜过 长，以免水分散失及染菌。(6) 宜采用水浴

5、加热熔化琼脂培养基，勿用电炉直接熔化琼脂培养基，以 免营养成份过度受热而破坏。(7) 已熔化的培养基应8小时内一次用完，剩余培养基不宜再用。4.2培养基的适用性检查4. 21微生物限度检查中计数用培养基包括:(营养琼脂、玫瑰红钠琼脂)、控 制菌检查用培养基包括胆盐乳糖培养基。4. 2. 2计数培养基适用性检查试验用菌株大肠埃希菌(escherichiacoli) cmcc (b) 44102金黄色葡糖球菌(staphylococcus aureus) cmcc (b) 26003枯草芽砲杆菌(bac订lus subt订is) cmcc (b) 63501白色念珠菌(candida albica

6、ns) cmcc (f) 98001黑曲霉菌(aspergillus niger) cmcc (f) 98003铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa) cmcc (b) 101044. 2. 3检查方法4. 2. 3. 1培养基制备 按规定程序新鲜配制营养琼脂（被检培养基和对照培养 基）、玫塊红钠培养基（被检培养基和对照培养基）、胆盐乳糖培养基，灭菌后备 用。4. 2. 3. 2营养琼脂培养基4. 2. 3. 2. 1方法:取7个无菌平皿，分别接种大肠埃希菌、金黄色葡糖球菌、 枯草芽砲杆菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50loocfu）,另一平皿不接种 菌作为空白对照，

7、倾注对照营养琼脂培养基，混匀，凝固后于3035°c倒置培 养48h, i|-数；被检培养基同法操作。4. 2. 3. 2. 2结果判断：若被检培养基的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平 均数的70%,且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基 的适用性检查符合规定。4. 2. 3. 3玫瑰红钠琼脂培养基4.2. 3. 3. 1方法：取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌，黑曲霉菌各2皿， 每皿接种lml菌液（含菌50loocfu）,另一平皿不接种菌作为空白对照，倾注 对照玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固后于倒置培养72h,计数；被检培养基同 法操作。4. 2. 3. 3.

8、 2结果判断：若被检培养基的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平 均数的70%,且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基 的适用性检查符合规定。4. 2. 3.4胆盐乳糖培养基4.2. 3.4. 1方法：新鲜配制100ml/瓶的对照胆盐乳糖培养基4瓶，121°c灭菌 15min,备用。分别接种大肠埃希菌、铜绿假单胞菌以及金黃色葡糖球菌各一瓶, 接种菌液量lml （不大于loocfu）,另一瓶不接种菌作为空白对照；被检培养基 同法操作，置规定温度培养。4.2. 3.4.2结果判断：培养18小时，与对照培养基比较，被检培养基屮试验菌 应生长良好，表现为液体培养基变浑浊；

9、培养48小吋，空白培养瓶和接种金黃 色葡糖球菌的培养瓶应不得浑浊。4. 2. 3. 5mug 培养基4.2. 3. 5. 1方法：新鲜配制5ml/支的对照mug培养基,121°c灭菌15min,备用。 取3支，接种大肠埃希菌2支，接种菌液0.加1 （不大于loocfu）,另支不接 种菌作为空白对照，培养5小时，在366nm紫外光灯下观察结果；被检培养基同 法操作，置规定温度培养。4. 2. 3. 5. 2结果判断：空白培养管应不得浑浊，且366nm处观察无荧光；与对照 培养基比较，被检培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基变浑浊，366nm 处应呈现荧光。若荧光不明显，则可延长至

10、24h。4. 2. 3. 6麦康凯琼脂培养基4. 2. 3. 6. 1方法:新鲜配制对照麦康凯琼脂培养基,12vc灭菌15min,冷却至 60°c倾注平1111, 35°c培养箱预培8h后备用。取5个无菌麦康凯琼脂平板，分别 涂布接种大肠埃希菌和乙型副伤寒沙门菌各5皿，接种菌液0. 1ml （含菌50 loocfu）,另一平板不接种菌作空白对照，涂布均匀后于规定温度倒置培养；被 检培养基同法操作。4. 2. 3. 6. 2结果判断：培养18小吋，被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应 与对照培养基上的菌落一致；培养24小吋，空白平板应无菌落生长。4. 2. 3. 7四硫磺酸钠亮绿培养基（ttb）4. 2. 3. 7. 1方法:新鲜配制10ml/支的对照ttb培养基基础,121°c灭菌15min, 备用。临用前，无菌操作加入0.2ml碘试液和0. lml亮绿试液。取5支，分别接 种乙型副伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌各2支，接种菌液lml （不大于loocfu）, 另一支不接种菌作为空白对照；被检培养基同法操作，置规定温度培养。4.2. 3. 7.2结果判断：培养18小时，与对照培养基比较，被检培养基屮试验菌 应生长良好，表现为液体培养基上清浑浊；培养24h,空白的培养管和接种