实验二葡萄糖的一般杂质检查

1、实验二葡萄糖的一般杂质检查一、目的要求1. 掌握一般杂质检查的原理、操作方法及限量计算方法。2. 熟悉药物中一般朵质检查的目的和意义。3. 常握葡萄糖中氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属限量检查的基本原理和方法。二、基木原理葡萄糖是用淀粉以无机酸水解或在酶催化下经过水解得稀葡萄糖液，再经脱 色、浓缩结晶制得。1. 国内生产方法有以卜几种：酸水解法：以无机酸将淀粉水解为葡萄糖。（c6h1oo5） n + nh20 譽亠 nc6h1206双酶水解法：以生物酶为催化剂将淀粉水解为匍萄糖。（c6hioo5）n + 毗0 罟酸 nc6h1206酸酶水解法：以盐酸为液化剂，糖化酶为催化剂，将淀粉水解为葡萄糖。（

2、c6hioo5）n + 门屯0 © /化酶门c6h1206根据葡萄糖生产工艺特点，应进行氯化物、重金属、神盐等一般杂质检查， 进行蛋白质、可溶性淀粉等特殊杂质检查。2. 各种杂质检查原理如2氯化物检查法 氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银作用，生成氯化银口色浑浊 液，与一定量的标准氯化钠溶液和硝酸银在同样条件下处理生成的氯化银浑浊相 比较，测定供试品中氯化物的限量。cl- + ag* agcl i硫酸盐检查法药物屮微量硫酸盐与氯化锁在酸性溶液屮作用，牛成硫酸 顿微粒而显白色浑浊液，同一沱量标准硫酸钾溶液与氯化顿在同样条件下，用同 法处理生成的浑浊比较，判断药物中含硫酸盐的限量。s04 2

3、-十 ba2+ -> basod i铁盐检查法三价铁盐在硝酸酸性溶液中与硫氧酸盐生成红色可溶性硫 氧酸铁络离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。fe3 卄 6scn> fe （scn） 6 3-红色进行葡萄糖的铁盐检查时，需在显色前加硝酸3滴，煮沸5min,使fe2+氧 化为fe3+。rtl于硝酸中可能含有亚硝酸，亚硝酸也能与硫氧酸根离子反应生成红 色的亚硝酰硫氤化物，影响比色，凶此加入显色剂之前加热煮沸有助于除去氧化 氮，以消除氧化氮生产的亚硝酸干扰。重金属检查法重金属是指在实验条件下，能与s2-作用生成硫化物而显 色的金属杂质，女u,银、铅、汞、铜、镉、彼、神、锐、锡、

4、锌、钻、银等。在 药品生产过程中遇到铅的机会较多，且铅在体内易积蓄中毒，故检查吋以铅为代 表。硫代乙酰胺(thioacetamide)在弱酸性(ph约3. 5)溶液中水解，产生硫化氢, 可与重金属离子结合生成有色硫化物的均匀沉淀，可与对照标准液同法处理比 较。本方法的适宜目视比色范围为27ml溶液中含铅1020憾，相当于标准铅溶 液12汕，检查中根据规泄含重金属的限量确泄供试品的取用量。ch3csnh2+h2o 一- ch3c0nh2+h2spb2+h2s - pbs i + 2h+神盐检查法 中国药典主要采用古蔡氏(gutzeit)法检查神盐。其原 理是利用金属锌与酸作用产生新生态的氧，与药

5、物中的微量神盐作用生成具挥发 性的神化氢，遇渙化汞(或氯化汞)试纸，产生黃色至棕色的脚斑，与定量标准神 溶液所生成的神斑比较，可判泄药物中含碑盐的限量。其反应如下：as03 3- + 3zn + 9hash3 t + 3zn2+ + 3h20ash3 + 2hgbr2一-2hbr + ash(hgbr)2(黄色)ash3 + 3 hgbr23hbr + as(hgbr)3(棕色)五价神在酸性溶液中也能被金属锌还原为神化氢，但生成神化氢的速度较三 价神慢，故在反应液中加入碘化钾及酸性氯化亚锡将五价神还原为三价神，碘化 钾被氧化生成的碘乂可被氯化亚锡还原为碘离子。as043- + 2i-+ 2h4

6、aso33- + 12 + h20as043- + sn2卄 2has033- + sn4卄 h2012 + sn2i2t- + sn4+溶液中的碘离子，与反应中产生的锌离子能形成配合物，使生成碑化氢的反 应不断进行。4t- + zn2+ -> znt42-氯化亚锡与碘化钾存在，可抑制锐化氢的生成，因锐化氢也能与漠化汞试纸 作用生成锐斑，在实验条件下100憾锐存在不会干扰测定。氯化亚锡又可与锌作 用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀而连续地发生。干燥失重测定法干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后所减失的重 量，根据所减失的重量和取样量计算供试品干燥失重的百分率。干燥失重

7、检查法 主要控制药物中的水分，也包括其他挥发性物质如乙醇等。炽灼残渣检查法炽灼残渣系指冇机药物经加热灰化后再被硫酸破坏，于 高温(700°c800°c)炽灼，有机物质被破坏分解为挥发性物质逸出，残留的非挥 发性无机杂质(多为金属的氧化物或盐类)成为硫酸盐，称为炽灼残渣。如炽灼残 渣需留作重金属检查，则控制炽灼温度在500°c600°co三、仪器与试剂电热恒温t燥箱，普通电炉，水浴锅，50ml比色管，量筒，50ml烧杯；葡 萄糖，硝酸银，氯化钠，盐酸，硫酸钾，氯化顿，硫氧酸镀，硝酸，硫酸铁鞍， 硫代乙酰胺，硝酸铅，醋酸盐缓冲液，甘油，氢氧化钠。四、实验方法

8、1. 酸度取本品20g,加水20ml溶解后，加酚駄指示液(取酚駄lg,加乙醇100ml 使溶解，即得。)3滴与氢氧化钠滴泄液(0.02mol/l) 0.20ml,应显粉红色。2. 溶液的澄清度与颜色取木品5.0g,加热水溶解后，放冷，用水稀释至loml,溶液应澄清无色； 如显浑浊，与1号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，与对照液（取比色用氯 化钻液3.0ml、比色用銘酸钾液3.0ml与比色用硫酸铜液6.0ml,加水稀释成 50ml） l.oml加水稀释至10ml比较，不得更深。浊度标准贮备液的制备 称取于1o5°c干燥至恒重的硫酸腓l.oog,置 100ml量瓶中，加水适量使溶解，必

9、要时可在40°c的水浴中温热溶解，并用水稀 释至刻度，摇匀，放置46h；取此溶液与等容量的10%乌洛托品溶液混合，摇 匀，于25°c避光静置24h,即得。木液置冷处避光保存，可在两个月内使用，用 前摇匀。浊度标准原液的制备取浊度标准贮备液15.0ml,置1000ml量瓶中，加 水稀释至刻度，摇匀，取适量，置lcm吸收池屮，照紫外可见分光光度法，在 550nm的波长处测迄 其吸光度应在0.120.15范围内。本液应在48h内使用， 用前摇匀。浊度标准液的制备（1号） 取浊度标准原液5.0ml加水95.0ml ,摇匀, 即得。3. 乙醇溶液的澄清度取木品l.og,加90%乙醇3

10、0ml,置水浴上加热回流约lomin,溶液应澄清。4. 氯化物取木品0.60g,加水溶解使成25ml（如溶液呈碱性，可滴加硝酸使遇石蕊试 纸显中性反应），再加稀硝酸（取105ml硝酸加水稀释至loooml,即得o） 10ml, 溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml,摇匀，即 得供试液。另取标准氯化钠溶液（10ug/ml） 6.0ml置50ml纳氏比色管中，加稀 硝酸10ml,用水稀释使成约40ml,摇匀，即得对照液。向供试液与对照液屮分 别加硝酸银试液（0.1mol/l）1.0ml,用水稀释使成50ml,摇匀，暗处放置5min, 同置黑色背景上，从比色管上方向下观察

11、，如发生浑浊，样品管不得比对照管更 浓（0.01 %）稀硝酸：取105ml硝酸加水稀释至loooml,即得。标准氯化钠溶液的制备：称取氯化钠0.165g,置1000ml量瓶中，加水适量 使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量贮备液loml,置looml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀， 即得（每lml相当于10mg）硝酸银试液.硝酸银试液 可取用硝酸银滴定液（。lmoi/l）05. 硫酸盐取木品2.0g ,加水溶解使成约40ml （溶液如显碱性，可滴加硝酸使成屮性; 溶液如不澄清，滤过），置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸（取234ml盐酸加水稀 释至loooml,即得。）2ml,摇匀

12、，即得供试品溶液。另取标准硫酸钾溶液（每 lml相当于loomg的so42-） 2.0ml,置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml, 加稀盐酸2ml,摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液屮，分别加入25% 氯化倾溶液5ml,用稀释使成50ml,充分摇匀。放置10min,同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，供试液如发生浑浊，与对照液比较不得更浓。 (0.010%)o标准硫酸钾溶液的制备：称取硫酸钾0.181g,置loooml量瓶屮，加水适量 使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每iml相当于100憾的so4)25%氯化锁溶液6. 亚硫酸盐与可溶性淀粉取本品l.og,加水10ml溶解后

13、，加碘试液(0.05mol/l)l滴，应即显黄色。7. 干燥失重取木品约l.og,然后在105°c干燥至恒重，减失重量不得过9.5%。8. 炽灼残渣取木品1.02.0g置已炽灼至恒重的瓷堆竭中，精密称定，缓缓炽灼至完全 炭化，放冷，加硫酸0.5lml润湿，低温加热至硫酸蒸气除尽，在700°c800°c 炽灼使完全灰化，移置干蝶器内，放冷，精密称眾后，再在700800炽灼至 恒重，所得炽灼残渣不得超过0.1%。9. 蛋白质取本品l.og,加水10ml溶解后，加磺基水杨酸溶液(1->5) 3ml,不得发 生沉淀。10. 铁盐取木品2.0g ,于50ml烧杯屮，加

14、水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸 5min,放冷，移入50ml比色管中，用水洗涤烧杯，洗液并入比色管中，加水稀 释使成45ml,加硫會(酸鞍溶液(30-100) 3ml,摇匀。如显色，与标准铁溶液(每 lml相当于lougfe), 2.0ml用同-方法制成的对照液比较，不得 更 深 (0.010%)。标准铁溶液的制备：称取硫酸铁鞍(fenh4(so4)2 -12h2o)0.863g,置1 ooornl 量瓶屮，加水溶解后，加硫酸2.5ml,用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml,置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀， 即得(每iml相当于10|ig的fe)1

15、1. 重金属取本品4.0g置于25ml纳氏比色管屮，加23ml水溶解后，加醋酸盐缓冲液 (ph3.5) 2ml,加硫代乙酰胺试液2ml,放置2min后，与标准铅溶液(10pg/ml pb2+)2ml用同一方法制成的対照液同置白纸上自上向下比较，不得更深(百万分 之五)。醋酸盐缓冲液(ph = 3.5)：取醋酸镀25g,加水25ml溶解后，加7mol/l盐酸溶 液38ml,用2mol/l盐酸溶液或5mol/l氨溶液准确调节ph至3.5(电位法指示)，用 水稀释至100ml,即得。硫代乙酰胺试液配制：取硫代乙酰胺4g,加水使溶解成looml,置于冰箱屮 保存。临用前取混合液由氢氧化钠液(lmol/

16、l)15ml,水5.0ml及甘油20ml组 成5.0ml,加上述硫代乙酰胺溶液l.oml,置水浴上加热20s,冷却，立即使用。标准铅溶液的制备：称取硝酸铅0.160g,置loooml量瓶屮，加硝酸5ml与 水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml,置looml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀, 即得（每iml相当于10mg的pb）o配制与贮存的玻璃容器均不得含铅。12 神盐取木品2.0g,置检神瓶中，加水5ml溶解后，加稀硫酸5ml与溪化钾溪试 液（取澳30g,与澳化钾30g,加水使溶解成looml） 0.5ml,置水浴上加热约 20min,使保持稍过量的

17、澳存在，必要吋，再补加漠化钾漠试液适量，并随吋补 充蒸发的水分，放冷，加盐酸5ml与水适量使成28n）l,加碘化钾试液5ml及酸 性氯化亚锡试液（取氯化亚锡1.5g,加水10ml与少量的盐酸使溶解，即得。本液 应临用新配）5滴，在室温放置lomin后，加锌粒2g,迅速将瓶塞塞紧（瓶塞上已 安放好装有酷酸铅棉及漠化汞试纸的导气管），保持反应温度在25°c40°c （视 反应快慢而沱，但不应超过40°c）,反应45min后，取出澳化汞试纸，将生成的 碑斑与标准碑溶液一沱量制成的标准神斑比较，颜色不得更深（0.0001%）。标准備溶液的制备：称取三氧化二神0.132g,

18、置loooml量瓶屮，加20%氢 氧化钠溶液5ml溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml,用水稀释至 刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml,置loooml量瓶屮，加稀硫酸10ml,用水 稀释至刻度,摇匀,即得（每iml相当于1遽的as）。标准神斑的制备：精密吸取标准神溶液2ml置另一检神瓶中，加盐酸5ml 与水21ml,自“再加碘化钾试液5ml及”起，依法操作即可。五、操作注意爭项1. 纳氏比色管的选择与洗涤比色或比浊操作，一般均在纳氏比色管屮进行，因此在选用比色管时，必须 注意使样品与标准管的体积相等，玻璃色质一致，最好不带任何颜色，管上的刻 度均匀，如有差别，不得人于2mm。纳氏比色管用后应立即冲洗，比色管洗涤时 避免用毛刷或去污粉等洗刷，以免管琏划出条痕影响比色或比浊。2. 平行操作原则进行比色、比浊、神盐检查时，样品液与对照液的实验条件应尽可能一致， 严格按照操作步骤平行操作，按规定顺序加入试剂。比色、比浊前可利用手腕转 动360°的旋摇使比色管内试剂充分混匀。比色方法一般是将两管同置于片色背景 上，从侧面观察；比浊方法是将两管同置于黑色或白色背景上，自上而下地观察。3. 实验屮应准确选