实验二实验室环境和人体表面微生物的检查

1、实验二实验室环境和人体表面微生物的检查生科 15.2 周罡 201500181104【实验目的】1. 证实实验室环境与人体表面存在微生物。2. 体会无菌操作的重要性。3. 了解高压蒸汽灭菌的原理和应用范i韦i，学习高压蒸汽灭菌的操作技术。4. 观察不同类群微生物的菌落形态特征。5. 比较不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。6. 掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术。【实验原理】通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上,经过生长繁殖形成儿百万个 聚集在一起的肉眼可见的菌落。平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来 源的样品接种于培养基上，在37

2、6;c温度下培养，12天内每一菌体即能通过很多次细胞分 裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有 它自己的特点。因此，可通过平板培养來检查环境中细菌的数量和类型。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起 或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松 或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类。值得指出的是从微生物群体中经分离、生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。 因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征等综合考虑。 有些微生物的纯培养

3、要经过一系列的分离与纯化过程和多种鉴定方能得到。从混杂的微生物 群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为分离与纯化。【实验器材】1. 溶液和试剂牛肉膏、蛋白腺、nack naoh溶液、hci溶液2. 仪器和其他用品试管，培养皿，500ml锥形瓶，500ml烧杯，500ml量筒、玻璃棒、胶头滴管、电子秤？、 药匙、棉花、纱布、牛皮纸、记号笔、橡皮筋、纸绳、高压蒸汽灭菌锅、ph试纸【实验步骤】1. 配制300ml牛肉膏培养基（1）在烧杯屮加入300ml蒸镭水（2）依次称ft 0.9g牛肉膏，3.0g蛋白月东，1.5gnaci放入烧杯小（3）待英溶解后，调节ph,使其ph值达到7.47.6（4

4、）向烧杯中加入6.0g琼脂粉，并将配好的培养基倒入锥形瓶中，并塞上棉塞，瓶口 及棉塞用牛皮纸包好2. 高温蒸汽灭菌在3支试管中加入蒸帼水，用棉塞塞好，3支试管口用牛皮纸包在一起。把10套培养 皿包在一起，另外5套培养基包在一起。将包好的试管、培养皿、锥形瓶放入高压蒸汽灭菌 锅内,120°c灭菌20mino3. 倒平板培养基从高压蒸汽灭菌锅取岀后，待其冷却到50°c左右。点燃酒精灯，右手持盛培养 基的锥形瓶，用左手将瓶塞轻轻地拔出，在酒精灯上烧一下，瓶口保持对着火焰。左手持 培养皿并将皿盖在火焰旁打开，一缝，迅速倒入培养基15-20ml,加盖后轻轻摇动培养皿， 使培养基均匀分

5、布在培养基底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。4. 微生物的接种（1）空气将6个平板在实验室环境屮移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气屮。5min后，将 其中三个盖上皿盖，分别贴上标签，标号分别为4-5-空-5"-37°c、4-5空占2-37°c、45空 5028°c, lomin后，将剩余三个盖上皿盖，分别贴上标签，标号分别为45空亠37°c、 45空1o'237°c、45空2o'328°c（2）桌面用无菌水湿润棉签，用棉签在实验台面擦拭约2crr）2的范圉，在火焰旁用左手拇指和中 指将平皿开启成一缝，

6、将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平 皿,分别贴上标签,标号分别为45桌-l-37°cs 45桌237°c、4-5桌328°c（3）手用无菌水湿润棉签，用棉签在手上擦拭约2cm2的范围，在火焰旁用左手拇指和中指将 平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿， 分别贴上标签，标号分别为45手-1-37°c 45手237°c、45手328°c（4）自选用无菌水湿润棉签，用棉签分别在衣服表而、手机屏幕表面、1元纸币上擦拭约2cm2 的范围，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝，

7、将棉签伸入，在琼脂表面接种，之 后立即闭合皿盖。共三套平皿，分别贴上标签，标号分别为45衣服-l-37°c.4-5-手机237°c、 4-5-纸币-3-28°c5. 培养将标号为37°c的培养皿放在37°c的环境培养箱屮培养，将标号为2lc的培养皿放在28°c 的环境培养箱中培养，吋间为一周。6. 斜面与平皿制做（1）在烧杯中加入3ooml蒸馆水（2）依次称量o.9g牛肉膏，3.0g蛋白月东，1.5gnaci放入烧杯中（3）待其溶解后，调节ph,使其ph值达到7.47.6（4）在锥形瓶中加入3.0g琼脂粉，将15oml配制好的培养基倒

8、入锥形瓶中（5）往烧杯中剩余的15oml培养基中加入3.0g琼脂粉，然后在加热至其熔化。（6）按实验要求，将配制的培养基用漏斗分装入20支试管内。（7）试管加上橡胶塞后，10支1组包在一起，在橡胶塞外包一层牛皮纸。10套培养皿 用牛皮纸包在一起。（8）将上述试管、锥形瓶和培养皿放在高压蒸汽灭菌锅内以120°c, 20min灭菌。（9）将灭菌后的试管冷却，试管口一段搁在另一根试管上，形成斜面。锥形瓶内的培养 基待其冷却到50°c左右时倒平板10个。7. 观察并描述从培养箱屮取出之前培养的微生物，对着灯光从皿底观察。如需开盖，则要从酒精灯火 焰附近打开皿盖。观察结果见实验结果。

9、8. 平板划线分离在皿底用记号笔分为三区。接种坏在酒精灯上加热至变红，待其冷却后青蘸待分离菌落 23次。在近火焰处，左手拿平板，右手持接种环，培养皿开一小缝，接种环伸入培养皿内， 在1区密集划线，转动平板一定角度，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后从1区引线在2 区划线，然后在2区引线在3区划线。选择2种菌，每种画3个平板，共6个平板。【实验结果】表1实验室和环境和人体表血微工物恒温培养结果描述统计表编号来源描述记录人大小颜色干湿边缘表面形态14-5 空1(x：137°c小鹅黄色干燥整齐扁平圆形郑建豪245-空10'j37°c小白色干燥整齐扁平圆形郑建豪34-5-$ 10'237°c小粉色湿润整齐隆起圆形周罡445 空5'137°c中白色干燥不整齐扁平不规则周罡54-5-空-5'-3-28°c中白色湿润不整齐扁平不规则夏金港645 衣 >-37 °c小黄色湿润整齐扁平圆形吕一鸣表2空气5分钟与10分钟微生物恒温培养结果比