微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案

1、微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证方案微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1. 验证方案起草起草时期：年力 口起草人：2. 验证小组成员:3. 验证方案审核部门审核人日期生产部生产车问qcqa4. 验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1. 验证目的和原理1.1验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。验证过程应 严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。1.2原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果來评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。2. 验证方法步骤2.1验证前的准

2、备：进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格 按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。试验菌应包括g、gj酵母菌和霉菌 类微生物以基木覆盖样品中可能存在的微生物。22验证试验的操作计划：川3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算冋收率来 判断限度检查方法是否对产品有影响。2.3试验结杲可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验屮，稀释剂对照组的菌回收率应不小于7()%,试验组回 收率也不低于70%o3 .试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、牛化

3、培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。环境洁净度不应低于1000()级，局部洁净度为 100级(或放置同等级净化工作台)。操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成止压，不低 于 4.9pa。3.1.3试验样品:批号：批号：批号：3.4培养基：培养基名称培养基批号配制口期有效期至改良马丁琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基胆盐乳糖增菌培养基营养琼脂培养皋3.1.5稀释液：ph7.0无菌氯化钠蛋口腺缓冲液以上经115°c高压蒸汽灭菌30mino3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：菌株名称内控编号大肠埃希菌cmcc(

4、b) 44102ec-金黄色葡萄球菌cmcc(b) 26003sa-枯草芽胞杆菌cmcc(b) 63501bs-白色念珠球菌cmcc(f) 98001ca-黑曲霉 cmcc(f) 98003an-编号山菌名首字母一传代代数一制备日期纟i賊03.1.7器具：无菌薄膜过滤器：（孔径0.45um直径50mm）、无菌移液管（5ml）4.验证方法4.1菌液的制备将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在3035°c卜培 养1824小时，将白色念珠菌接种至改良马丁液体培养基中，在2328°c下培养2448小时。将黑 曲霉接种至改良马丁液体培养基屮，在23

5、28°c下培养57夭。将上述培养物川0.9%的无菌氯化钠 溶液制成每1ml含菌落数为50loocfu的菌悬液。4.2实验方法供试液的制备：取样品10g （ml）加入无菌ph7.0氯化钠蛋口月东缓冲液100ml,振摇使分散均匀 ,用匀浆仪混匀口，置45°c水浴使胶囊壳溶化混匀口，制成1： 10均匀的供试液。a样晶试验组取1:10供试液（相当lg或lml供试品）10ml,加至100ml稀释液中混匀，过滤并用稀释液冲洗 滤膜3次，每次100ml,在最后一次冲洗液屮加入5（）loocfu菌液，滤完后，将接有细菌的滤膜取出， 菌而向上（接触细菌和样品的而）贴于己凝固的培养基上。大肠埃

6、希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽葩 杆菌贴于营养琼脂培养基平皿上；白色念珠菌、黑曲霉贴于玫瑰红钠琼脂培养基平皿上。b菌液组収上述制备菌液各lml加至100ml稀释液中混匀，过滤并用稀释液冲洗滤膜3次，每次100ml, 滤完后，将接有细菌的滤膜取出，菌面向上（接触细菌和样品的面）贴于已凝固的培养基上。大肠埃 希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌贴于营养琼脂培养基平h1l± h色念珠菌、黑曲毎贴于玫瑰红 钠琼脂培养基平皿上。c供试品对照组収上述1： 10供试液lomljjg 100ml稀释液中混匀，过滤并用稀释液冲洗滤膜3次 每次100ml, 滤完后，将滤膜取出，接触样品的血向上贴于已凝固的培

7、养基上。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯 草芽抱杆菌贴于营养琼脂培养基平h1l± h色念珠菌、黑曲鶴贴于玫瑰红钠琼脂培养基平皿上。d稀释剂对照组取ph7.0氯化钠-蛋白腺缓冲液冲洗滤膜3次，每次100ml,在最后一次冲洗液屮加入50100cfu 菌液，滤完后，将接有细菌的滤膜取出，菌面向上贴于已凝固的培养基上。大肠埃希菌、金黄色葡萄 球菌、枯草芽砲杆菌贴于营养琼脂培养基平hil±；白色念珠菌、黑曲霉贴于玫瑰红钠琼脂培养皋平iiil 上。4.3培养将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽砲杆菌在3035°c下培养48小时，将口色念珠菌、黑曲霉在2328°c下培养

8、72小时，点计菌落数。5.试验结果5.1产品试验组微生物生长检杏情况：批号：菌种名称产品试验组计数结杲（cfu/皿）平均值大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽他杆菌白色念珠菌黑曲霉5.2供试品对照组微生物生长检查情况：批号： 菌种名称供试站对照组计数结果（cfu/皿）平均值大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽抱杆菌白色念珠菌黑曲霉5.3稀释剂对照组微生物生长检查情况：批号：菌种名称稀释剂对照组计数结果（cfu/皿）平均值大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽抱杆菌白色念珠菌黑曲霉5.4菌液组微生物生长检查情况：批号：菌种名称菌液组计数结果（cfu/皿）平均值大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽泡杆菌白色念珠菌黑曲霉6.

9、 冋收率计算6.1稀释剂对照组菌冋收率菌种名称批号菌落计数（cfu/皿）回收率稀释剂对照组菌液组大肠埃希菌平均值金黄色葡萄球菌平均值枯草芽抱杆菌平均值白色念珠菌平均值黑曲霉平均值表中：回收率=稀释剂对照组的平均菌落数菌液组的平均菌落数x 100%。6.2试验组菌回收率菌种名称批号菌落计数（cfu/ml）回收率试验组供试品对照组菌液组大肠埃希菌平均值金黄色葡萄球菌平均值枯草芽抱杆菌平均值白色念珠菌平均值黑曲霉平均值表中：回收率=（试验组的平均菌落数一供试品对照组的平均菌落数）一菌液组的平均菌落数x100%o7. 结论：7.1经过验证，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、白色念珠菌-、黑曲霉

10、的冋收率分别为 、%o7.2稀释剂回收率为、%o以上验证结果证明，本品采用上述方法进行微生物限度检查。检验人：复核人：8. 验证结果评价分析质控部负责各项验证、试验结果记录，验证小组根据验证、试验结果进行评价，起草验证报告，报验证委员会。验证委员会负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，发放验证证书。対验证结果的评审应包括：（1）验证试验是否有遗漏；（2）验证实施过程中対验证方案有无修改，修改原因、依据以及是否经过批准；（3）验证记录是否完整；（4）验证试验结果是否符合标准要求，偏差及对偏差的说明是否合理，是否需进一步补充试验。9最终审批验证报告市验证组长'市核后，报验证总负责人批准，并签发验证证书。验证报告年 月 日至 年 月 日，验证小组根据批准的微生物限度 检查方法（薄膜过滤法）验证文件对微生物限度检查法进行了相关的一系列验证工作，达 到了预期效果，滋将有关事项说明如下：1、验证方案在实施过程中未做修改。2、验证方案各项性能指标在验证中未作变动，误差在允许范i韦i内。3、验证过程中结果符合规定要求，记录完整属实。4、验证结果符合设计要求和gmp原则要求，可以投入使用。5、组分或检验条件改变时须重新验证。以上情况，请验