风湿性疾病的实验室诊断

1、风湿性疾病的实验室诊断(diagnoses of rheumatic diseases)小 结1.风湿病的概念2.自身抗体的概念3.自身免疫性疾病与风湿病的关系4.部分自身免疫性疾病的抗体谱5.自身抗体的实验室检测及临床意义 1）抗核抗体 4)RF 7) ANCA 2）Ds-DNA 5)CCP 3) ENA 6)ACA一 概念1. 风湿（Rheuma）: 是指关节、关节周围软组织、肌肉、骨骼出现的慢性疼痛。2. 风湿性疾病( rheumatic diseases): 是指一大类病因各不相同,但累及机体多个器官、关节及其周围组织的疾病. 3. 自身免疫性疾病：免疫损伤在风湿性疾病的发病中占有重要

2、位置，许多风湿性疾病，是因为免疫异常所致组织损伤。4. 自身抗体（autoantibidies）：是指抗自身组织器官、细胞内、细胞表面和细胞外成分的免疫球蛋白 一些自身免疫性风湿病伴有特征性的自身抗体(谱) 二 自身抗体实验室诊断1. 抗核抗体( ANA)(1) 定义 传统定义：针对细胞核成分自身抗体的总称. 广义定义：抗核抗体的靶抗原已不再局限于细胞核内，而是扩展到整个细胞，是针对细胞内所有抗原成分的总称。(2) 抗核抗体的分类 (3) 抗核抗体的特性ANA主要是IgG抗体;ANA无器官特异性和种属特异性；ANA主要存在于血清中；(4) ANA检测的临床意义i. ANA可见于多种疾病，特别是

3、结缔组织疾病，常作为结缔组织病的诊断、病情判断和疗效观察的指标。ii. 高滴度ANA提示有自身免疫性疾病可能。iii. ANA检测已成为临床上诊断自身免疫病的一种重要的指标（1）初筛实验：1）间接免疫荧光法2. ANA 检测方法 优点：可同时检测大量抗体，获得较高的检测效率；可检测到一些至今未知的抗体。缺点：操作烦杂（现有全自动设备，可解决问题）；需要有经验的人员读片。2) ELISA法测ANA优点：操作简单，有标准品，可定量；可观察浓度变化，有助于临床进行病情及疗效的观察；缺点：包被靶抗原量有限，易漏检。 3) ELISA法与IIF法ANA检测结果有时不一致IIF法阳性，ELISA法阴性原因

4、：太多数IIF法采用HEp-2 细胞作为包被玻片的基质，大约100 至150 种自身抗原IIF法阴性，ELISA法阳性原因： 1. IIF法抗原含量丰富，抗原存在分布不 均、含量过低 ； 2. 不同处理方法对特定抗原有破坏，可能导致部分特异抗体的漏检； 3. ELISA法方法灵敏度高； 4. 干扰因素：溶血、嗜异性抗体等引起假阳性。 4） 美国风湿学会(ACR) 建议筛查实验：IIF-ANA仍然为ANA检测的金标准 实验室在ANA报告当中必须注明ANA检测方法（2）确认实验1) 缺点一种确认实验不能同时检测所有特异性抗体自身免疫性疾病患者体内存在的自身抗体种类多不是所有相关纯化抗原都能得到（确

5、认实验对抗原的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原。由于一种抗原只能检测一种抗体，多种抗体的检测则需要多种单独的抗原，而目前为止并不是所有相关纯化抗原都能得到，因此应用受到限制。）2) 特异性抗核抗体检测的临床意义抗Sm抗体© 以患者姓名命名是SLE的标志性抗体，阳性率为30.2%。在全部抗Sm阳性的病例中，92.2%为SLE。© SLE病人由活动期转为缓解期后，ANA、抗DNA抗体效价可降低，但Sm抗体依然存在。因此对早期、不典型的SLE或经治疗缓解后的回顾性诊断有一定意义。 SSA抗体 SSA抗体主要见于原发性干燥综合征（SS），阳性率高达6075，合并SLE者为30-5

6、0%，单纯SLE者为8-10%， 其他结缔组织病极少阳性。SSB抗体© SSB抗体是SS血清特异性抗体。在原发性SS阳性率达40。© SSB抗体阳性几乎总伴有抗SSA抗体阳性，其他自身免疫性疾病中如有抗SSB抗体，常伴有继发性干燥综合征。© 在其它结缔组织病中，该两种抗体同时出现，常提示继发性干燥综合征的存在。© 抗SSB和抗SSA抗体相伴出现，有单独的SSA出现，但单独的SSB出现的少。抗nRNP（nuclear RNP）：无疾病特异性© 混合性结缔组织病(MCTD)：几乎均为阳性，且滴度很高，对确立MCTD的诊断很有帮助。MCTD的抗RNP

7、阳性率>95%。高滴度的抗RNP，尤其在没有其他自身抗体存在的情况下，一般认为是混合性结缔组织病（MCTD）的诊断标志。© 其他结缔组织病：抗RNP抗体在其他结缔组织病阳性率较低且滴度低。© 系统性红斑狼疮（SLE）：抗RNP抗体在SLE中的阳性率为40%左右，抗RNP抗体若与抗dsDNA抗体、抗Sm抗体同时存在，则发生狼疮肾炎的可能性较大。© Sm与RNP是同一分子复合物中的不同抗原位点，两种抗原具有相关性，因此血液中两种抗体基本同时存在，单一阳性的情况很少。抗Scl-70靶抗原：DNA-拓扑异构酶1的C端末区。系统性硬皮病的标志性抗体抗Jo-1抗体

8、69; 靶抗原：组氨酰tRNA合成酶，一种细胞浆磷酸蛋白。© 多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM)的标记性抗体© 阳性患者多数伴有间质性肺部疾病和多关节炎及关节痛。© 与阴性患者相比，阳性患者发病年龄轻，病情进展快，疗效差，预后较差。 Sm、RNP、SSA、SSB、Jo-1、Scl-70：是由许多小分子RNA与各自对应的特定蛋白质组成的核糖核蛋白颗粒，分子中不含DNA，称可提取核抗原.3) IIF-ANA初筛会漏检哪些ANAs© IIF-ANA筛查会导致各种ANAs漏检以抗Jo-1、PM-Scl、Scl-70漏检最多，ACA的漏检最少© ANA阴性

9、，病人有症状，进一步检测特异性的自身抗体4) 自身抗体的检测流程ANA筛查实验与特异实验同时进行，提高检出率！DsDNA© 抗dsDNA抗体是SLE患者的特征性标志抗体，是SLE重要诊断标准之一，诊断的特异性可达95%100%。© 检测方法主要有间接免疫荧光法：特异性高 ELISA法：可定量，结果可溯源至WHO（TRINITY）；浓度与病情的活动性呈正相关；由于方法学原因有时有假阳性。© 抗dsDNA抗体定量检测不仅能准确反应患者检测结果偏离正常值的程度，而且抗体水平变化与病情活动相关。病情活动、加剧时，抗体阳性且水平升高，反之，降低甚至消失。© 在EL

10、ISA方法中，采用生物提取的dsDNA作为实验基质，在制备过程中，DNA的内部结构位点可能少部分人为暴露，从而会因抗ssDNA抗体的存在产生偶然性非特异性反应，从而造成假阳性反应。© 绿蝇短膜虫为抗原基质检测抗dsDNA抗体类风湿因子(RF)© 抗人IgG分子Fc片段上抗原决定簇的特异性抗体,分为IgM、G、A、E型.© RF在RA中的阳性率为70%80，是诊断RA的重要标准之一© RF并非RA独有的特异性抗体，对RA的诊断不具特异性.RF（）不等于一定就是RA，RF（）也不能排除不是RA© RF含量与病情的活动性和严重性成正比，持续高滴度的R

11、F常提示RA病情活动.CCP抗体© 1.瓜氨酸是类风湿关节炎（RA）血清抗聚角蛋白微丝蛋白相关抗体的主要抗原决定簇© 2.对RA诊断具有高度特异性（98%）© 3.可在RA早期出现,灵敏度约60%，与RF联合检测灵敏度可提高至70%-80%© 4.预测早期关节炎的发生（提前35）© 5.RA关节侵蚀破坏的早期识别及预测© 6.新RA诊断指标中,CCP抗体已列为RA诊断指标之一.抗心磷脂抗体(ACA)© 1.是针对一组含磷脂结构抗原物质的自身抗体.© 2.见于10%15%的SLE,33%49%的RA,是了解疾病进展及是否伴发APS的实验室指标.© 2.ACA阳性的患者发生血栓性疾病的危险性增高© 3.ACA阳性妇女易发复发生自然流产. 抗中心粒细胞胞浆抗体(ANCA)© ANCA是一组以人中性粒细胞胞质成分为靶抗原,与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体。© 靶抗原：中性蛋白酶3（PR3），髓过氧化物酶（MPO），杀菌/通透性增高蛋白（BPI），丝氨酸蛋白酶，人白细胞弹性蛋白酶（HLE），乳铁蛋白（LF），组织蛋白酶G，葡萄糖醛酸酶，溶菌酶