抗生素类药物分析ppt课件

1、第十一章第十一章第一节第一节 概述概述抗生素的定义抗生素的定义 抗生素是细菌、放线菌和真抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。作用。抗生素的来源抗生素的来源1. 1. 生物合成发酵生物合成发酵 2. 2. 化学合成或半合成化学合成或半合成抗生素质量的复杂性抗生素质量的复杂性 产品稳定性差产品稳定性差 分子构造大多不稳分子构造大多不稳 定，降解后疗效下定，降解后疗效下降、失效或添加毒降、失效或添加毒副作用副作用发酵过程不易控制发酵过程不易控制易受污染易受污染消费工艺复杂消费工艺复杂发酵液中杂质

2、发酵液中杂质 无机盐、脂肪、各种蛋白质、无机盐、脂肪、各种蛋白质、各种降解产物、色素、热原、各种降解产物、色素、热原、毒性物质毒性物质 添加添加 异常毒性、细菌内毒素、异常毒性、细菌内毒素、热原、降压物质、无菌热原、降压物质、无菌 检查检查含量测定方法含量测定方法一生物学方法一生物学方法测定抗生素抑菌或杀菌的才干测定抗生素抑菌或杀菌的才干优点优点1、与临床效果一致、与临床效果一致2、灵敏度高、灵敏度高3、干扰物质少、干扰物质少缺陷缺陷1、操作繁琐、操作繁琐2、培育时间长、培育时间长2、测定误差大、测定误差大二化学及物理化学方法二化学及物理化学方法以理化方法测定主药含量以理化方法测定主药含量优点

3、优点 1. 准确度高准确度高2. 简单、快速简单、快速1. 不一定代表生物效价不一定代表生物效价缺陷缺陷2. 易受杂质干扰易受杂质干扰分类按构造与性质：分类按构造与性质： 内酰胺类、氨基糖苷类、内酰胺类、氨基糖苷类、 四环素类、大环内酯类、四环素类、大环内酯类、 氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类 林可霉素类、其他抗生素类林可霉素类、其他抗生素类NSCH3CH3COOHOHN1234567RCO母核（6-氨基青霉烷酸）第二节第二节 内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 青霉素类青霉素类头孢菌素类头孢菌素类7654321NONHSCH2R1COOH母核（7-氨基头孢菌烷酸）RCOCON

4、SOHNCOOHCH3CH3CH2青霉素青霉素青霉素青霉素G、苄青霉素、苄青霉素NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH2氨苄西林氨苄西林氨苄青霉素氨苄青霉素阿莫西林阿莫西林羟氨苄青霉素羟氨苄青霉素NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素头孢氨苄头孢氨苄NONHSCH3COOHOCNH2CH2头孢拉定头孢拉定CH2NH2CONONHSCH3COOH头孢羟氨苄头孢羟氨苄NONHSCH3COOHOCNH2CH2HO头孢噻吩钠头孢噻吩钠SCH2CONONHSCH2OCOCH3COON

5、aNSOHNCOOKCH3CH3OCCH2酸性酸性构造与性质构造与性质一、一、NaNa与碱金属与碱金属(Na+、K+)成盐成盐 一羧基一羧基 易溶于水易溶于水 与有机碱与有机碱(普鲁卡因普鲁卡因)成盐成盐 难溶于水难溶于水普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2NSO1234567二手性二手性C 87654321NOS(5%头孢唑啉钠溶液头孢唑啉钠溶液 1824)20D 头孢菌素类头孢菌素类 C6 C7青霉素类青霉素类 C3 C5 C6 旋光性旋光性 三共轭体系三共轭体系 NSO头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系

6、青霉素类青霉素类 母核无明显母核无明显UV 多数有苯环取代基多数有苯环取代基 NOS UV青霉素钠青霉素钠UV7-20四四内酰胺环内酰胺环 水溶液水溶液 不稳定不稳定 枯燥纯真枯燥纯真 稳定稳定 不稳定不稳定性要素性要素四元环张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 某些金属离子某些金属离子温度温度失失效效降降解解青青霉霉素素类类酸酸、碱碱、青青霉霉素素酶酶某些氧化剂某些氧化剂例例青霉素的降解反响青霉素的降解反响青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑青霉噻唑酰基羟胺酸酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉

7、醛青霉醛HgCl2失效失效降解降解头孢菌素类头孢菌素类酸、碱、胺类酸、碱、胺类内酰胺酶内酰胺酶 二、二、K+、Na+反响反响一一鉴别鉴别 焰色焰色鲜黄色鲜黄色 + 醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼钠四苯硼钠 + Ac白白 K+二呈色反响二呈色反响1. 羟肟酸铁反响羟肟酸铁反响 -内酰胺类内酰胺类NaOH HClNOHH内内酰酰胺胺类类呈色呈色羟肟酸衍生物羟肟酸衍生物Fe3+/3H+NSONSCOHNHOHH2NOH HClNSCHNHOFe3+3OH+Fe3+/3 红、棕、褐红、棕、褐2、 与与H2SO4 - HNO3反响反响亮亮黄黄红红棕棕黄黄色色头头孢

8、孢噻噻肟肟钠钠头头孢孢噻噻吩吩钠钠头头孢孢氨氨苄苄 HNOSOH头孢菌素类头孢菌素类NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH23. 茚三酮反响茚三酮反响蓝蓝紫紫色色氨氨基基茚茚三三酮酮 - -氨基氨基-氨基、伯胺氨基、伯胺某些羟基胺类某些羟基胺类酮式酮式烯醇式烯醇式茚三酮茚三酮茚三酮茚三酮缩合缩合蓝紫色蓝紫色+H2OCNCH2RC OH2RCHH2NCOOH2OHCCOCOCOHNH2CCOCOCOCOHCNCCOCOCOCOHCHRNCCOCOCO4. 双缩脲反响双缩脲反响-内酰胺类内酰胺类 CONH紫紫内酰胺类内酰胺类碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜 开环分解开环分解2OHCONH2CuCOH

9、NCCH3COONaCH3SNHNCH3CH3COONaCSNOHOHOOCH2NH2CH2HH蓝紫色蓝紫色5. 与变色酸与变色酸-硫酸反响硫酸反响活泼活泼“-CH2-青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨苄西林氨苄西林HCHOCHSOH ”羰羰基基侧侧链链含含“分解分解变色酸变色酸显色显色NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2 变变色色酸酸阿阿莫莫西西林林HCHOSOH150缩合缩合色色褐褐SO3HSO3HHOHOSO3HSO3HHOHOOHOHHO3SHO3SCHHCHO 缩合缩合6. 与重氮苯磺酸反响与重氮苯磺酸反响橙橙黄黄色色重重氮氮苯苯磺磺酸酸 OHHC巧合巧合酚羟基酚羟基头孢哌

10、酮头孢哌酮SNOHCONHCHCONHH5C2OONNOCOOHCH2SNNNNCH3NClNNaO3S OH巧合巧合NNNNCH3SNOHCONHCHCONHH5C2OONNOCOOHCH2SNNNaO3S7. 与铜盐反响与铜盐反响 CuSOHAc头头孢孢氨氨苄苄橄榄绿色橄榄绿色NaOH专属反响专属反响三沉淀反响三沉淀反响1. 遇酸遇酸白白青青霉霉素素青青霉霉素素钠钠青青霉霉素素钾钾 H2. 有机胺盐反响有机胺盐反响1重氮化重氮化 - 巧合反响巧合反响 青青霉霉素素普普鲁鲁卡卡因因普普鲁鲁卡卡因因青青霉霉素素 H重氮化重氮化-巧合反响巧合反响红红 芳伯氨基芳伯氨基C2H52NCH2CH2OO

11、CNSOHNCOOHCH3CH3OCH+C2H52CH2NH2H2NCOOCH2CH2N普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素NCH2CH2OOC2C2H5N+Cl-N2C2H5COOCH2CH2NNH2HClNaNO2 2与三硝基苯酚反响与三硝基苯酚反响 三硝基苯酚三硝基苯酚二苄基乙二胺二苄基乙二胺苄星青霉素苄星青霉素NaOH二苄基乙二胺二苄基乙二胺三硝基苯酚三硝基苯酚H2OHOH-HCONSOHNCOOHCH3CH3CH2CH2NCH2CH2NHCH2OHNO2O2NNO2CH2NCH2CH2NHCH2光谱法光谱法四四1、 UV法法A,Emin,max,%1cm1 光谱图光谱图样品、

12、分解产物样品、分解产物nm339HA 苯苯唑唑青青霉霉烯烯酸酸苯苯唑唑青青霉霉素素Cu2+头孢氨苄头孢氨苄 max = 262nm青霉素青霉素V钠钠 A280nm/A264nm = 1.301.50NOCONHCH3NOSCH3CH3COONaNOCHCH3OCOCNHNCHHCCH3CH3SHCHCOOHCu2+pH3.8氯唑青霉素氯唑青霉素 341 0.682双氯青霉素双氯青霉素 342 0.653苯唑青霉素苯唑青霉素 339 1.328max %1cm1E(nm) ml/g50 2、 IR法法117401815 cmVOC116901710 cmVOC-内酰胺环内酰胺环酰胺酰胺3、 NM

13、R法法 利用不同构造的原子核在利用不同构造的原子核在D2O中中有有不同的不同的NMR光谱进展鉴别光谱进展鉴别JP以吸收峰频率对峰强度进展作图以吸收峰频率对峰强度进展作图 主要研讨原子核的磁化性质及其在主要研讨原子核的磁化性质及其在外磁场中的运动规律外磁场中的运动规律硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素NMR谱谱7-08硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素NMR色谱法色谱法五五1、 TLC法法对照品对照法对照品对照法和和斑斑点点颜颜色色比比较较供供试试品品对对照照品品相相同同条条件件fR2、 HPLC法法Rt比比较较供供试试品品对对照照品品相相同同条条件件 精细称取样品精细称取样品0.1009g，置，置250ml碘瓶中

14、，碘瓶中，加水加水10ml，振摇使溶解，精细加溴滴定液，振摇使溶解，精细加溴滴定液(0.1mol/L)25.0ml，再加盐酸，再加盐酸5ml，立刻密塞，立刻密塞并振摇并振摇1分钟，在暗处静置分钟，在暗处静置15分钟后，留意分钟后，留意微开瓶塞，加碘化钾试液微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立刻密塞，立刻密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液0.09863mol/L滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消逝，耗费硫代硫酸钠滴定液续滴定至蓝色消逝，耗费硫代硫酸钠滴定液(0.09863mol/L)13.80ml，并将滴定结果用空，并将滴定结

15、果用空白实验校正，空白实验耗费硫代硫酸钠滴定白实验校正，空白实验耗费硫代硫酸钠滴定液液0.09863mol/L21.64ml。每。每1ml溴滴定溴滴定液液(0.1mol/L)相当于相当于13.01mg的的C12H17N2NaO3。NSOHNCOOKCH3CH3OCCH2酸性酸性构造与性质构造与性质一、一、NaNa与碱金属与碱金属(Na+、K+)成盐成盐 一羧基一羧基 易溶于水易溶于水 与有机碱与有机碱(普鲁卡因普鲁卡因)成盐成盐 难溶于水难溶于水普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2NSO1234567二手性二手性C 87654

16、321NOS(5%头孢唑啉钠溶液头孢唑啉钠溶液 1824)20D 头孢菌素类头孢菌素类 C6 C7青霉素类青霉素类 C3 C5 C6 旋光性旋光性 三共轭体系三共轭体系 NSO头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系 青霉素类青霉素类 母核无明显母核无明显UV 多数有苯环取代基多数有苯环取代基 NOS UV青霉素钠青霉素钠UV7-20四四内酰胺环内酰胺环 水溶液水溶液 不稳定不稳定 枯燥纯真枯燥纯真 稳定稳定 不稳定不稳定性要素性要素四元环张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 某些金属离子某些金属离子温度温度失失效效降降解解青青霉霉素素类类酸酸、碱碱、青青霉霉素素酶酶某些氧化

17、剂某些氧化剂例例青霉素的降解反响青霉素的降解反响青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑青霉噻唑酰基羟胺酸酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2失效失效降解降解头孢菌素类头孢菌素类酸、碱、胺类酸、碱、胺类内酰胺酶内酰胺酶 (头孢噻吩钠水溶液头孢噻吩钠水溶液2524h失活失活8%)二、二、K+、Na+反响反响一一鉴别鉴别 焰色焰色鲜黄色鲜黄色 + 醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼钠四苯硼钠 + Ac白白 K+二呈色反响二呈色反响1. 羟肟酸铁反响羟肟酸铁反响

18、 -内酰胺类内酰胺类NaOH HClNOHH内内酰酰胺胺类类呈色呈色羟肟酸衍生物羟肟酸衍生物Fe3+/3H+NSONSCOHNHOHH2NOH HClNSCHNHOFe3+3OH+Fe3+/3 红、棕、褐红、棕、褐例：例：ChP(2000)头孢哌酮头孢哌酮鉴别鉴别 取本品取本品10mg，加水，加水2ml与盐与盐酸羟胺溶液酸羟胺溶液取取34.8%盐酸羟胺溶盐酸羟胺溶液液1份，醋酸钠份，醋酸钠-氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液1份，份，乙醇乙醇4份份3ml，振摇溶解后，放置，振摇溶解后，放置5min，加酸性硫酸铁铵试液，加酸性硫酸铁铵试液1ml，摇匀，显红棕色。摇匀，显红棕色。2、 与与H2SO4 - H

19、NO3反响反响蓝绿色蓝绿色红棕红棕黄色黄色头孢噻啶头孢噻啶头孢噻吩钠头孢噻吩钠头孢氨苄头孢氨苄 HNOSOH头孢菌素类头孢菌素类NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH23. 茚三酮反响茚三酮反响蓝蓝紫紫色色氨氨基基茚茚三三酮酮 -氨基、伯胺氨基、伯胺某些羟基胺类某些羟基胺类酮式酮式烯醇式烯醇式茚三酮茚三酮茚三酮茚三酮缩合缩合蓝紫色蓝紫色+H2OCNCH2RC OH2RCHH2NCOOH2OHCCOCOCOHNH2CCOCOCOCOHCNCCOCOCOCOHCHRNCCOCOCO4. 双缩脲反响双缩脲反响-内酰胺类内酰胺类 CONH紫紫内酰胺类内酰胺类碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜 开环分解开环

20、分解2OHCONH2CuCOHNCCH3COONaCH3SNHNCH3CH3COONaCSNOHOHOOCH2NH2CH2HH蓝紫色蓝紫色5. 与变色酸与变色酸-硫酸反响硫酸反响活泼活泼“-CH2-青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨苄西林氨苄西林HCHOCHSOH ”羰羰基基侧侧链链含含“分解分解变色酸变色酸显色显色 变变色色酸酸阿阿莫莫西西林林HCHOSOH150缩合缩合NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2色色褐褐SO3HSO3HHOHOSO3HSO3HHOHOOHOHHO3SHO3SCHHCHO 缩合缩合6. 与重氮苯磺酸反响与重氮苯磺酸反响橙橙黄黄色色重重氮氮苯苯磺磺酸酸 OH

21、HC巧合巧合酚羟基酚羟基头孢哌酮头孢哌酮SNOHCONHCHCONHH5C2OONNOCOOHCH2SNNNNCH3NClNNaO3S OH巧合巧合NNNNCH3SNOHCONHCHCONHH5C2OONNOCOOHCH2SNNNaO3S7. 与铜盐反响与铜盐反响 CuSOHAc头头孢孢氨氨苄苄橄榄绿色橄榄绿色NaOH专属反响专属反响三沉淀反响三沉淀反响1. 遇酸遇酸白白青青霉霉素素青青霉霉素素钠钠青青霉霉素素钾钾 H2. 有机胺盐反响有机胺盐反响1重氮化重氮化 - 巧合反响巧合反响 青青霉霉素素普普鲁鲁卡卡因因普普鲁鲁卡卡因因青青霉霉素素 H重氮化重氮化-巧合反响巧合反响红红 芳伯氨基芳伯氨

22、基C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCH+C2H52CH2NH2H2NCOOCH2CH2N普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素NCH2CH2OOC2C2H5N+Cl-N2C2H5COOCH2CH2NNH2HClNaNO2 2与三硝基苯酚反响与三硝基苯酚反响 三硝基苯酚三硝基苯酚二苄基乙二胺二苄基乙二胺苄星青霉素苄星青霉素NaOH二苄基乙二胺二苄基乙二胺三硝基苯酚三硝基苯酚H2OHOH-HCONSOHNCOOHCH3CH3CH2CH2NCH2CH2NHCH2OHNO2O2NNO2CH2NCH2CH2NHCH2光谱法光谱法四四1、UV法法A,Emin,max,%

23、cm 光光谱谱图图样品、分解产物样品、分解产物头孢氨苄头孢氨苄 max = 262nm青霉素青霉素V钠钠 A280nm/A264nm = 1.301.50苯唑青霉烯酸苯唑青霉烯酸苯唑青霉素苯唑青霉素 HCu2+nmA NOCONHCH3NOSCH3CH3COONaNOCHCH3OCOCNHNCHHCCH3CH3SHCHCOOHCu2+pH3.8氯唑青霉素氯唑青霉素 341 0.682双氯青霉素双氯青霉素 342 0.653苯唑青霉素苯唑青霉素 339 1.328max %cmE (nm) ml/g 2、 IR法法117401815 cmVOC116901710 cmVOC-内酰胺环内酰胺环酰胺

24、酰胺3、 NMR法法 利用不同构造的原子核在利用不同构造的原子核在D2O中中有有不同的不同的NMR光谱进展鉴别光谱进展鉴别JP 主要研讨原子核的磁化性质及其在主要研讨原子核的磁化性质及其在外磁场中的运动规律外磁场中的运动规律色谱法色谱法五五1、TLC法法对照品对照法对照品对照法和斑点颜色和斑点颜色比较比较供试品供试品对照品对照品相同条件相同条件fR2、HPLC法法Rt比比较较供供试试品品对对照照品品相相同同条条件件三、三、 含量测定含量测定 IINaOH头头孢孢菌菌素素族族青青霉霉素素族族水解水解 H碘量法碘量法一一1. 原理原理水解产物水解产物 OSNaNaIOSNaI定量过量定量过量剩余剩

25、余-内酰胺类内酰胺类ChP反响分两步进展：反响分两步进展：1. 水解反响水解反响 (按化学计算量进展按化学计算量进展)2. 氧化氧化-复原反响复原反响 (无固定的量关无固定的量关系，受温度、系，受温度、PH值和时间等要素值和时间等要素影响，应严厉控制反响条件并采影响，应严厉控制反响条件并采用规范品平行对照测定用规范品平行对照测定)NSCH3CH3COOHOHNRCORCOHHNCOONaCH3CH3SNCOONaI24+ 5H2O+ 2HClNaOHCCH3CH3SO3HCHNH2COOHCHNHCORCOOH2+2NaCl+8HI第一步第一步第二步第二步例例注射用普鲁卡因青霉素注射用普鲁卡因

26、青霉素 含量测定含量测定 取装量差别项下的内容物，精细称取装量差别项下的内容物，精细称取约取约0.12g，置，置100ml量瓶中，加水使溶量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精细量取解并稀释至刻度，摇匀，精细量取5ml，置碘瓶中，加置碘瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液1ml放置放置20分钟，再加分钟，再加1mol/L盐酸溶液盐酸溶液1ml与醋酸与醋酸-醋酸钠缓冲液醋酸钠缓冲液(pH4.5)5ml，精细，精细参与碘滴定液参与碘滴定液(0.01mol/L)15ml，密塞，密塞，摇匀，在摇匀，在2025暗处放置暗处放置20分钟，用分钟，用硫代硫酸钠滴定液硫代硫酸钠滴定液0.01mol/

27、L滴定，滴定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴定并至近终点时加淀粉指示液，继续滴定并强力振摇，至蓝色消逝；另精细量取供强力振摇，至蓝色消逝；另精细量取供试品溶液试品溶液5ml，置碘瓶中，加醋酸，置碘瓶中，加醋酸-醋酸醋酸钠缓冲液钠缓冲液pH4.55ml，精细参与碘滴，精细参与碘滴定液定液0.01mol/L15ml，密塞，摇匀，密塞，摇匀，在暗处放置在暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴定分钟，用硫代硫酸钠滴定液液0.01mol/L滴定，作为空白。同时滴定，作为空白。同时用青霉素钠对照品同法测定作对照，算用青霉素钠对照品同法测定作对照，算出供试品的含量。出供试品的含量。V样样空空V样样对照液对照液+缓

28、冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴+碱碱+酸酸+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴 V对空对空V对对2. 方法方法供试液供试液+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴+碱碱+酸酸+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴 空白实验空白实验A、消除样品已降解产物的干扰、消除样品已降解产物的干扰B、消除样品中其他耗费碘的杂、消除样品中其他耗费碘的杂 质的干扰质的干扰C、消除碘挥发呵斥的误差、消除碘挥发呵斥的误差 以未经水解的样品作空白测定以未经水解的样品作空白测定空白空白样品样品I2Na2S2O3I-I2 采用规范品平行对照测定采用规范品平行对照测定A、可消除温度、可消除温度、pH、操作、环、操作、环 境等条件的影响

29、境等条件的影响B、使本法测定结果与微生物检定、使本法测定结果与微生物检定 法一致法一致3. 条件条件1弱酸性弱酸性 pH4.5碱碱 I2 IO3- + I-酸酸 普鲁卡因与碘在酸性条件普鲁卡因与碘在酸性条件 下会产生复盐沉淀下会产生复盐沉淀2温度温度 2426温度温度38 未水解的供试品亦耗费碘未水解的供试品亦耗费碘3水解时间水解时间以水解以水解20分钟后的耗碘量最大分钟后的耗碘量最大4反响时间反响时间反响反响20分钟后，耗碘量随时间的分钟后，耗碘量随时间的变化较小，可减小含量测定的误变化较小，可减小含量测定的误差。差。4. 特点特点1灵敏度高灵敏度高样品样品 : 碘碘 = 1 : 82反响条

30、件、实验操作要求高反响条件、实验操作要求高V对、对、V对空对空V样、样、V样空样空1份含量份含量加试剂次序、反响时间、滴定速度一样加试剂次序、反响时间、滴定速度一样4I28I-5. 计算计算原料原料%WWVVVV对对照照品品）（）（含含量量样样对对对对对对空空样样样样空空 汞量法汞量法二二1. 原理原理SHROH 青青霉霉素素族族水解水解HgRS ）（青霉素族青霉素族ChP Hg .pH2. 方法方法 总总样样VNOHgHNONaOH 醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液pH4.6滴定滴定水解水解 降降空空醋醋酸酸盐盐缓缓冲冲液液VNOHg pH4.6滴定滴定样样品品 以未经水解的样品作空白测定以未经水解

31、的样品作空白测定例例青霉素钠青霉素钠 含量测定含量测定 取本品约取本品约50mg，精细称定，加水，精细称定，加水5ml溶解后，加溶解后，加1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液5ml，摇匀，放置，摇匀，放置15分钟，加分钟，加1mol/L硝酸溶硝酸溶液液5ml，醋酸盐缓冲液，醋酸盐缓冲液(pH4.6)20ml及水及水20ml，摇匀，照电位滴定法，摇匀，照电位滴定法(附录附录 A),用铂电极为指示电极，汞用铂电极为指示电极，汞-硫酸亚汞电极硫酸亚汞电极为参比电极，在为参比电极，在3540，用硝酸汞滴，用硝酸汞滴定液定液(0.02mol/L)缓慢滴定，缓慢滴定，控制滴定过程约为控制滴定过程约为15分

32、钟，不计第分钟，不计第一个等当点，计算第二个等当点时耗费一个等当点，计算第二个等当点时耗费滴定液的量。每滴定液的量。每1ml硝酸汞滴定液硝酸汞滴定液(0.02mol/L)相当于相当于7.128mg的总青霉素的总青霉素(按按C16H17N2NaO4S计算计算)。 另取本品约另取本品约0.5g，精细称定，加水，精细称定，加水与上述醋酸盐缓冲液各与上述醋酸盐缓冲液各25ml，振摇使完，振摇使完全溶解，在室温下，立刻用硝酸汞滴定全溶解，在室温下，立刻用硝酸汞滴定液液(0.02mol/L)滴定，终点判别方法同上滴定，终点判别方法同上.每每1ml硝酸汞滴定液硝酸汞滴定液0.02mol/L相当相当于于7.1

33、28mg的降解物按的降解物按C16H17N2NaO4S计算。计算。 总青霉素的百分含量与降解物的百总青霉素的百分含量与降解物的百分含量之差值即为青霉素的含量。分含量之差值即为青霉素的含量。3、 讨论讨论1以第二次滴定突跃为终点以第二次滴定突跃为终点 电位法指示终点电位法指示终点 2反响摩尔比反响摩尔比 1 : 13空白实验空白实验 消除已降解产物干扰消除已降解产物干扰4优点优点 不需规范品不需规范品%WFTV%WFTV% 空空空空样样样样含含量量4、 计算计算%FTWVWV% ）（含含量量空空空空样样样样 精细称取含水量为精细称取含水量为0.5%的青霉素的青霉素钠钠0.0502g，按药典方法测

34、定总青霉素含，按药典方法测定总青霉素含量时，用去硝酸汞滴定液量时，用去硝酸汞滴定液(0.02021mol/L)6.97ml。另精细称取上述样品。另精细称取上述样品0.5013g，按药典方法测定降解物含量时，用去硝按药典方法测定降解物含量时，用去硝酸汞滴定液酸汞滴定液(0.02021mol/L)1.33ml。以干。以干燥品计算，求样品中青霉素的含量。燥品计算，求样品中青霉素的含量。例例青霉素钠青霉素钠 含量测定含量测定 .T %. %. 三三1、 原理原理青霉噻唑酸青霉噻唑酸青霉素类青霉素类NaOH钠盐钠盐OHNaClHClNaOH （剩剩余余）-内酰胺类内酰胺类ChPNSCH3CH3COONa

35、OHNRCONSCH3CH3COONaCHNONaORCO 定量过量定量过量NaOH2、 方法方法 供供试试液液内内酰酰胺胺类类OHNaOH定量过量定量过量 HCl回滴回滴中和中和中和中和例例苯唑西林钠苯唑西林钠 含量测定含量测定 取本品约取本品约0.5g，精细称定，加新沸，精细称定，加新沸过的并用过的并用0.01mol/L氢氧化钠溶液中和至氢氧化钠溶液中和至酚酞指示液刚显红色的水酚酞指示液刚显红色的水20ml，使溶解，使溶解,再用再用0.01mol/L氢氧化钠溶液中和后，精氢氧化钠溶液中和后，精密加氢氧化钠滴定液密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)25ml，摇匀，置水浴中加热摇匀，置水浴中

36、加热20分钟，留意防止分钟，留意防止吸收空气中的二氧化碳，冷却后，加酚吸收空气中的二氧化碳，冷却后，加酚酞指示液酞指示液12滴，用盐酸滴定液滴，用盐酸滴定液0.1mol/L滴定，并将滴定结果用空滴定，并将滴定结果用空白实验校正。每白实验校正。每1ml的氢氧化钠滴定液的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于相当于40.14mgC19H19N3O5S。 %WFTVV% 样样空空含量含量3、讨论讨论1水解前先中和溶剂和样品水解前先中和溶剂和样品2加热时防止吸收加热时防止吸收CO2 CONaNaOHCO不能使酚酞变红不能使酚酞变红3空白实验校正空白实验校正(消除消除Na2CO3干扰干扰)4特点特点

37、简便快速简便快速 不适用于有残留酯的产品不适用于有残留酯的产品 %.%.799100101009009863001301080136421 nmCupHA 青霉烯酸青霉烯酸青霉素族青霉素族水解水解可见可见-紫外分光光度法紫外分光光度法四四1、 酸水解法铜盐法酸水解法铜盐法1原理原理稳定剂稳定剂JP青霉素族青霉素族CH2COCONHHCCH3CH3CCOOHCCNHSHCONSOHNCOOHCH3CH3CH2 pHACu 2方法方法标标样样枸枸橼橼酸酸硫硫酸酸铜铜标标准准液液供供试试液液AAnmA 3203特点特点实验条件随各药物稳定性不同而定实验条件随各药物稳定性不同而定规范品对照法规范品对照

38、法%WWAA标标准准品品含含量量样样标标标标样样 4 4计算计算2、 硫醇汞盐法硫醇汞盐法1原理原理青青霉霉烯烯酸酸硫硫醇醇汞汞盐盐青青霉霉素素族族 HgCl咪唑咪唑nmmax 青霉素族青霉素族ChPHgClCH3CH3COONaSNHCONCH2NHCOCH3NSOHNCOONaCH3CH3OCCH2NHCOCH3 HgCl咪唑咪唑nmmax 2方法方法对照品法对照品法%WWAA%对对照照品品样样标标标标样样 计算计算标标样样咪咪唑唑硼硼酸酸缓缓冲冲液液标标准准液液供供试试液液AAHgCl 2pH 9例例氨苄西林钠氨苄西林钠 含量测定含量测定 取本品约取本品约60mg 置置100ml量瓶中，

39、加量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精细量取水溶解并稀释至刻度，摇匀，精细量取5ml，置另一，置另一100ml量瓶中，加水稀释至量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再精细量取刻度，摇匀，再精细量取5ml，置，置25ml量瓶中，加硼酸缓冲液量瓶中，加硼酸缓冲液2.5ml与醋酐的乙与醋酐的乙腈溶液腈溶液1500.25ml，放置，放置5min后，后，加咪唑溶液至刻度，摇匀，置加咪唑溶液至刻度，摇匀，置60水浴水浴中，加热中，加热30min，取出冷却，照分光光，取出冷却，照分光光度法附录度法附录 A ，在，在325nm的波优的波优点测定吸收度；另取氨苄西林三水合点测定吸收度；另取氨苄西林三水合物规范品，按

40、同法测定，计算，即得。物规范品，按同法测定，计算，即得。 3讨论讨论a. 咪唑催化的水解产率高，硫咪唑催化的水解产率高，硫 醇汞盐稳定醇汞盐稳定3hb. 侧链有侧链有-NH2时，需加醋酐先时，需加醋酐先 将其乙酰化后才干发生上述将其乙酰化后才干发生上述 反响反响NSOHNCOOCH3CH3OCCH2NH2NaNSOHNCOONaCH3CH3OCCH2NHCOCH3 OCHCH pH94特点特点A、简便快速、简便快速B、用规范品对照，重现性良、用规范品对照，重现性良 好，好，RSD1%3、 羟肟酸比色法羟肟酸比色法USP JPFe3+/3H+红色红色-内酰胺类内酰胺类NaOH HClNOHH内内

41、酰酰胺胺类类羟羟肟肟酸酸衍衍生生物物HPLC法法ChP 头孢菌素类头孢菌素类内标法校正因子内标法校正因子外标法外标法特点特点 快速、高效、灵敏快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好专属性强、重现性好 一法多用鉴别、检查、含测一法多用鉴别、检查、含测哌拉西宁哌拉西宁 原料药原料药 含量测定含量测定色谱条件色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇剂；以甲醇0.2mol/L磷酸二氢钠溶磷酸二氢钠溶液液10氢氧化四乙基铵溶液氢氧化四乙基铵溶液水水400503547用磷酸调理用磷酸调理pH值至值至5.5为流动相。检测波长为为流动相。检测波长为254nm。第三节第三节 氨

42、基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素苷苷苷苷元元糖糖缩缩合合 氨基糖苷氨基糖苷苷元苷元氨基糖氨基糖缩合缩合 链霉素链霉素 双氢链霉素双氢链霉素新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素庆大霉素庆大霉素 巴龙霉素巴龙霉素链霉素链霉素链霉胍链霉胍 + 链霉糖链霉糖 + N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺 苷元苷元糖糖链霉双糖胺链霉双糖胺NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲

43、基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺庆大霉素庆大霉素 糖糖 苷元苷元绛红糖胺绛红糖胺 + 脱氧链霉胺脱氧链霉胺 + 加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 ROC R1R2HNNH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺ROC R1R2HNNH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺庆大霉素庆大霉素C复合物复合物 庆大霉素庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆

44、大霉素庆大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素庆大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H 庆大霉素庆大霉素C2b R=R1=H R2=CH3一、一、构造与性质构造与性质多与硫酸成盐多与硫酸成盐链霉素链霉素 3个个庆大霉素庆大霉素 5个个碱性中心碱性中心碱性碱性一一水溶性水溶性溶解性溶解性二二链霉素链霉素 pH57.5庆大霉素庆大霉素 pH212 稳定稳定UV三三稳定性稳定性四四链霉素水解产物反响链霉素水解产物反响五五NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3坂口反响坂口反响N-甲基葡

45、萄甲基葡萄糖胺反响糖胺反响麦芽酚反响麦芽酚反响二、二、 鉴别鉴别 茚三酮反响茚三酮反响一一蓝蓝紫紫色色庆庆大大霉霉素素链链霉霉素素茚茚三三酮酮羟基胺构造羟基胺构造N-甲基葡萄糖胺反响甲基葡萄糖胺反响二二甲甲基基葡葡萄萄糖糖胺胺庆庆大大霉霉素素链链霉霉素素水水解解 N乙酰丙酮乙酰丙酮 OH-吡咯衍生物吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+红色红色Elson-Morgan反响反响NHCH3NHNHNH C NH2HOOHOHNHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNCH3COCH3HHOCH2CHOH3(缩合缩合)323COCHCOCHCH OHHHH3CH3CCHNNCOC

46、H3CH3COCH3CH3N红色红色对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+NCH3COCH3HHOCH2CHOH3 麦芽酚反响麦芽酚反响三三 链霉糖特有反链霉糖特有反响响链链霉霉糖糖链链霉霉素素 OH麦麦芽芽酚酚紫紫红红色色 3FeH+分子重排分子重排NH C NH2HOOHOHNHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHNHNHCH3H2O NaOHOOOHCH3OOCH3Fe3+H+OFe33+/紫红紫红麦芽酚麦芽酚链霉胍特有反响链霉胍特有反响橙红橙红羟基喹啉羟基喹啉链霉胍链霉胍链霉素链霉素次溴酸钠次溴酸钠 8OH或或-萘酚萘酚NOH8-8-羟基喹啉羟基喹啉坂口反响坂口反响四四

47、 - -萘酚萘酚OHONBrRNHCO NH四四 24SO反响反响白白 BaSOSOBaH+UV法法五五IR法法六六庆大霉素无庆大霉素无UV吸收吸收nmmax 链链霉霉素素TLC法法七七三、三、 检查检查链霉素杂质链霉素杂质一一链霉素链霉素B甘露糖链霉素甘露糖链霉素 方法方法 TLC中的对照品法中的对照品法 BP1. 来源来源 反响中间体反响中间体对微生物的活性无明显差别对微生物的活性无明显差别毒副作用和耐药性不同毒副作用和耐药性不同发酵菌种不同发酵菌种不同工艺差别工艺差别C组分比例组分比例不一致不一致规定控制各组分的相对百分含量规定控制各组分的相对百分含量ChPUSPBPJP庆大霉素庆大霉素

48、C组分的测定组分的测定二二 .pH吲吲哚哚衍衍生生物物巯巯基基醋醋酸酸邻邻苯苯二二醛醛氨氨基基max = 330nm衍生化原理衍生化原理 1.1.1-烷基硫代烷基硫代-2-烷基烷基异吲哚衍生物异吲哚衍生物RNH2+HSCH2COOHOH-CHOCHONRSCH2COOHRPHPLC方法方法 2.规定规定 C1 2550% C1 2550% C1a 1540% C1a 1540% C2a +C2 2050% C2a +C2 2050%计算计算 3.%AAAAA%ACCCCiiaa 峰面积归一化法峰面积归一化法三、三、 含量测定含量测定链霉素、庆大霉素链霉素、庆大霉素微生物检定法微生物检定法 本法

49、系利用抗生素在琼脂培育本法系利用抗生素在琼脂培育基内的分散作用量反响平行线原理基内的分散作用量反响平行线原理的设计，比较规范品与供试品两者的设计，比较规范品与供试品两者对接种的实验菌产生抑菌圈的大小对接种的实验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。，以测定供试品效价的一种方法。四、血清中庆大霉素的四、血清中庆大霉素的HPLC法法 血浆样品的预处置血浆样品的预处置 离子对色谱法的目的：离子对色谱法的目的： 除去氨基酸、肽、胺的干扰除去氨基酸、肽、胺的干扰 选用选用OPA为荧光衍生化试剂为荧光衍生化试剂 采用柱后衍生化法采用柱后衍生化法 2CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR

50、2R1第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素ABCD2CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R11234567891011122CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HO四环素四环素TCtetracycline2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOCl金霉素金霉素 (CTC) chlortetracycline氯四环素氯四环素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOOH土霉素土霉素 (OTC) oxytetracycline氧四环素氧四环素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3OH多西环素多西环素 (DOTC) doxycycline

51、脱氧土霉素脱氧土霉素美他环素美他环素METC metacyclineHOHCONH2OOHOHOOHN CH3 2OHCH22CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R1一、一、 构造与性质构造与性质两性两性一一1. 与酸、碱均能成盐与酸、碱均能成盐2.强酸或强碱中溶解度强酸或强碱中溶解度 酚羟基、烯醇型羟基酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性弱酸性二甲胺基二甲胺基 弱碱性弱碱性吸湿性吸湿性二二多含结晶水多含结晶水与金属离子生成有色配位化合物与金属离子生成有色配位化合物Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+ UV三三与金属离子络合与金属离子络合四四pH3 7.5 荧光荧光 HOHOCaOOOO

52、HOHOO不稳定性不稳定性四四1. 差向异构化差向异构化差差向向金金霉霉素素差差向向四四环环素素金金霉霉素素四四环环素素 pH淡黄淡黄黑黑蓝色荧光蓝色荧光OHCONH2OOHOHOOHCH3HCH32NHO差向四环素差向四环素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HO2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHR2R1HO土霉素、多西环素不易差向异构化土霉素、多西环素不易差向异构化2. 降解反响降解反响1酸性下降解酸性下降解脱水金霉素脱水金霉素脱水四环素脱水四环素金霉素金霉素四环素四环素 pHmax = 445nmmax = 435nm橙黄色橙黄色2CH3NHOHCONH2OOHOHO

53、OHCH3HON CH3 2HOHCONH2OOHOOHCH3OH脱水四环素脱水四环素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOpH26pH26TCOHCONH2OOHOHOOHCH3HCH32NHOETCN CH3 2HOHCONH2OOHOOHCH3OHATCN2CH3OHCONH2OOHOHOHOCH3HEATCpH2pH22碱性下降解碱性下降解异异四四环环素素四四环环素素 OH荧光荧光HOHCONH2OOHOHOOHCH3ON CH3 2二、二、 鉴别实验鉴别实验H2SO4反响反响一一黄色黄色朱红色朱红色绿绿蓝蓝深紫色深紫色盐酸多西环素盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸土霉素盐酸金霉

54、素盐酸金霉素盐酸四环素盐酸四环素 SOHFeCl3反响反响二二褐色褐色橙褐色橙褐色深褐色深褐色红棕色红棕色盐酸多西环素盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸金霉素盐酸四环素盐酸四环素 FeClCl-反响反响三三白白 AgClAgClHNOnmmax 1mol/L盐酸盐酸-甲醇甲醇11000.01mg/mlUV法法四四荧光法荧光法五五土土霉霉素素金金霉霉素素四四环环素素绿色荧光绿色荧光蓝色荧光蓝色荧光黄色荧光黄色荧光 OHUV绿色荧光绿色荧光H+UVTLC法法六六正相分配薄层正相分配薄层 色谱色谱IR法法五五EDTA 抑制痕量金属呵斥的抑制痕量金属呵斥的 拖尾景象拖尾景象三、三、 检查检

55、查 4-差向四环素差向四环素ETC 脱水四环素脱水四环素ATC 差向脱水四环素差向脱水四环素EATC 盐酸金霉素盐酸金霉素CTC 有关物质有关物质一一TLC法法1995版版HPLC法法2000版版规范品对照法规范品对照法盐酸四环素盐酸四环素四环素有关物质四环素有关物质TLC图图I. 供试液供试液( 5 mg/ml)ETC( 0.2 mg/ml) ATC( 0.025 mg/ml)IV. EATC ( 0.025 mg/ml)CTC ( 0.1 mg/ml)VI. 混合液混合液40.50.52吸收度吸收度二二nmmax 、盐酸四环素盐酸四环素CTC).(Anm 控控制制杂质吸收度杂质吸收度EATCATC.Anm、控制控制 异四环素异四环素控制控制 .Anm 注射用注射用四、四、