土霉素片微生物检查方法的验证

1、土霉素片微生物检查方法的验证【论文关键词】土霉素片；微生物限度检查法【论文摘要】目的：建立土霉素片的微生物限度检查方法。方 法：采用薄膜过滤法对土霉素片处理后,分别进行细菌、霉菌及酵母 菌计数方法的验证。结果：金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的回收率均 大于70%。结论：土霉素片采用薄膜过滤法检查微生物限度方法成立。terramycin piece microorganism inspection method confirmation wang yanning guo lingboabstract objective:establishment terramycin piece microorga

2、nism limit inspection method method: uses the thin film to filter the law after terramycin piece processing, separately carri es on the bacterium, the mold and the saccharomycetes counts the method confirmation. result: the golden yellow staphylococcus and the white rosary fungus returns-ratio is bi

3、gger than 70% conclusion: the terramycin piece uses the thin film to filter the law inspection microorganism limit method to be tcnablc.key words terramycin piece; microorganism limit inspection method土霉素是四环素类抗生素，能特异性地与细菌核糖体30s亚基的a位结合，抑制肽链的增长和影响细菌蛋白质的合成，对细菌有 广谱抑菌作用。因此其微生物限度检查不能用平皿法，而应采用薄膜 过滤法消除其抑菌作用

4、后再检查。1材料1.1仪器：hws-250型恒温恒湿箱（天津苏瑞科技开发有限 公司），集菌仪（杭州泰林生物技术设备有限公司），薄膜（孔径 0. 22um）,康氏振荡器。1.2试剂：玫瑰红钠琼脂培养基，营养琼脂培养基，胆盐乳 糖增菌培养基，mug培养基，甘露醇氯化钠琼脂培养基等，均由中国 药品生物制品检定所提供。1.3菌种：阳性对照菌：金黄色葡萄球菌（验证细菌）、口色 念珠菌（验证酵母菌、霉菌）；阴性对照：金黄色葡萄球菌（验证大肠 埃希菌）。所用菌种均由中国药品生物制品检定所提供；稀释剂及冲洗 剂为ph7. 0氯化钠-蛋白月东缓冲液。1.4样品：土霉素片025g （25万单位）,厂家为河南华 利

5、药业有限责任公司，批号为07070601c2方法与结果2. 1细菌、霉菌、酵母菌检查方法验证。2. 1. 1细菌检测方法验证。2. 1. 1. 1试验组：取供试品10g,加入pii7. 0氯化钠-蛋口月东 缓冲液，于康氏振荡器上振摇10分钟，使片分散，500转、分离心后, 分离上清液作为供试液。取上述供试液10ml,加入100ml稀释剂中， 薄膜过滤，用冲洗液冲洗2次，每次100ml,第3次冲洗液中加入金 黄色葡萄球菌菌悬液05ml,薄膜过滤，取出滤膜，面朝上贴于营养 琼脂平皿上,35°c培养48小时，计数。2. 1.1.2菌液组：取金黄色葡萄球菌菌悬液0. 5ml,直接接种 于营养

6、琼脂平皿上，35°c培养48小吋，计数。2. 1. 1. 3供试品对照组：取上述供试液10ml,加入100ml稀 释剂中，薄膜过滤，用冲洗液冲洗3次，每次100ml,取出滤膜，面 朝上贴于营养琼脂平川l上，35°c培养48小时，计数。2. 1.1. 4稀释剂对照组：取稀释液10ml,薄膜过滤，用冲洗 液冲洗2次，每次100ml,第3次冲洗液中加入0. 5ml金黄色葡萄球菌 菌悬液，薄膜过滤，取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂平皿上，35°c 培养48小时，计数。2.1.1. 5上述试验连续做三次，结果如下：金黄色葡萄球菌计数后平均值：稀释剂对照组菌数：第一次47个，第

7、二次53个，第三次49 个；菌液组菌数：第一次58个，第二次64个，第三次60个；试验组菌数：第一次45个，第二次54个，第三次46个；供试品对照组菌数：第一次0个，第二次0个，第三次0个。2. 1. 1. 6计算金黄色葡萄球菌回收率。2. 1. 1. 6. 1稀释剂对照组的回收率：（稀释剂对照组的平均菌 落数/菌液组的平均菌落数）x100%第一次：47/58x100%二81.0%第二次：53/64x100%二82.8%第三次:49/60 xi00%二81. 7%2. 1. 1.6.2试验组的回收率：（试验组的平均菌落数-供试品对照组平均菌落数）/菌液组 平均菌落数x100%第一次：（45-0

8、） /58x100%二77.6%第二次:（54-0） /64x100%二84.4%第三次：（46-0） /60 xi00%二76.7%2. 1.2霉菌、酵母菌检查方法验证。2. 1.2. 1试验组:取供试品10g,加入ph70氯化钠-蛋白月东 缓冲液，于康氏振荡器上振摇10分钟，使片分散，500转、分离心后, 分离上清液作为供试液。取上述供试液10ml,加入100ml稀释剂屮， 薄膜过滤，用冲洗液冲洗2次，每次100ml,第3次冲洗液中加入白 色念珠菌菌悬液0.5ml,薄膜过滤，取出滤膜，面朝上贴于营养琼脂 平皿上，23°c培养72小时，计数。2. 1. 2. 2菌液组：取白色念珠菌

9、菌悬液0. 5ml,直接接种于营 养琼脂平川l上，23°c培养72小时，计数。2. 1. 2. 3供试品对照组：取上述供试液10ml,加入100ml稀 释剂中，薄膜过滤，用冲洗液冲洗3次，每次100ml,取出滤膜，面 朝上贴于营养琼脂平皿上，23°c培养72小时，计数。2. 1.2.4稀释剂对照组：取稀释液10ml,薄膜过滤，用冲洗 液冲洗2次，每次100ml,第三次冲洗液中加入0. 5ml白色念珠菌菌悬 液，薄膜过滤，取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂平皿上，23°c培养 72小时，计数。2. 1.2.5上述试验连续做三次，结果如下:口色念珠菌计数后平均值：稀释剂对

10、照组菌数：第一次56个，第二次60个，第三次53 个；菌液组菌数：第一次45个，第二次47个，第三次42个；试验组菌数：第一次43个，第二次45个，第三次44个；供试品对照组菌数：第一次0个，第二次0个，第三次0个。2. 1.2.6计算白色念珠菌的回收率。2. 1. 2. 6. 1稀释剂对照组的回收率：（稀释剂对照组的平均菌落数/菌液组的平均菌落数）x 100%第一次:45/56x 100%二80.4%第二次：47/60x100%二7& 3%第三次：42/53x100%二78. 2%2. 1.2. 6. 2试验组的冋收率：（试验组的平均菌落数-供试品对照组平均菌落数）/菌液组 平均菌落

11、数x100%第一次：（43-0） /56x 100%二76.8%第二次：(45-0) /60x100%二75.0%第三次：(44-0) /53x 100%二83.0%2.2大肠埃希菌检测方法验证。2.2. 1试验组:取供试品10g,加入ph7.0氯化钠-蛋白月东缓 冲液，于康氏振荡器上振摇10分钟，使片分散，500转/分离心后， 分离上清液作为供试液。取上述供试液10ml,加入100ml稀释剂中， 薄膜过滤，用冲洗液冲洗2次，每次100ml,第三次冲洗液中加入大 肠埃希菌菌悬液0. 2ml,薄膜过滤，取出滤膜，放入100ml胆盐乳糖 培养基屮，35°c培养24小时，取0. 2ml上述培养物加入5ml mug培养 基中，24小时后，加靛基质试液5滴,液面呈现玫瑰红环。2.2.2阴性菌对照组：照上述方法操作，第三次冲洗吋冲洗 液中加入2ml金黄色葡萄球菌菌液，薄膜过滤，取出滤膜加入100ml 胆盐乳糖培养基中，于35°c培养24小时，再取上述培养物划线接种 于甘露醇氯化钠琼脂培养基的平板上，于35°c培养2