微生物的实验室培养教案

1、学习必备欢迎下载课题1微生物的试验室培育课题目标（一）学问与技能明白有关培育基的基础学问；把握培育基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术（二）过程与方法分析试验思路的确定和形成的缘由，分析试验流程，对比前面的试验设计，归纳共性，分析差异，增加印象（三）情感、态度与价值观形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神课题重点无菌技术的操作课题难点无菌技术的操作教学方法启示式教学教学工具多媒体课件教学过程（一）引入新课在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染； 而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵 菌种的纯度；这就

2、要涉及到微生物的培育、分别、鉴别等基本技术；现在我们开头学习微生物的培育和应用专题；（二）进行新课1基础学问学习必备欢迎下载1 1 培育基的种类包括固体培育基和液体培育基等；摸索 1琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培育基中用作为凝固剂；【补充】培育基的类型及其应用：标准培育基类型配制特点主要应用固体培育基加入琼脂较多菌种分别 ,鉴定 ,计数物理性质化学组成目的用途半固体培育基加入琼脂较少菌种储存合成培育基由已知成安排制而成，培育基成分明确菌种分类、鉴定自然培育基由自然成安排制而成，培育基成分不明确工业生，产降低成本鉴别培育基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别挑选培育基添加（或缺少）某种化学成分

3、菌种的分别液体培育基不加入琼脂工业生产，连续培育1 2 培育基的化学成分包括水 、 无 机盐、 碳源、 氮源四类养分成分；摸索 2从细胞的化学元素组成来看，培育基中为什么都含有这些养分成分？c、h 、o、n 、p、s 是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97以上；【补充】碳源：如co2 、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并供应能量；氮源：如n2 、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等；含有c、 h、o、n 的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等；1 3 培育基除满意微生物生长的ph 、 特别养分物质和 氧气 等要求；【补

4、充】 生长因子： 某些微生物正常生长代谢过程中必需从培育基中吸取的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等；摸索 3牛肉膏和蛋白胨主要为微生物供应糖 、 维 生素和 有机氮等养分物质；摸索 4培育乳酸杆菌时需要添加维生素，培育霉菌时需要将培育基ph 调剂为酸性 ，培育细菌时需要将ph 调剂为中性或微碱性；活动 2：阅读“无菌技术”，争论回答以下问题：1 4 获得纯洁培育物的关键是防止外来杂菌的入侵；1 5 无菌技术包括：（ 1）对试验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；（ 2）将培育器皿、接种用具和培育基等器具进行灭菌；学习必备欢迎下载（ 3）为防止四周微生物污染，试验操作应在酒精灯

5、火焰邻近旁进行；（ 4）防止已灭菌处理的材料用具与四周物品相接触；1 6 比较消毒和灭菌（填表）比较项理化因素的作用强度毁灭微生物的数量芽孢和孢子能否被毁灭消毒较为温顺部分生活状态的微生物不能灭菌摸索 5无菌技术除了防止培育物被污染外，仍具有的目的是防止感染试验操作者；1 7 消毒方法：（ 1）日常生活常常用到的是煮沸 消毒法；（ 2）对一些不耐高温的液体，就使用巴氏消毒法（作简要介绍）；（ 3）对接种室、接种箱或超净工作台第一喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒成效，然后使用紫外线进行物理消毒；（ 4）试验操作者的双手使用酒精 进行消毒；（ 5）饮水水源用氯气进行消毒；1 8 灭菌方法：（ 1

6、）接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；（ 2）玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；（ 3）培育基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；（ 4）表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯；摸索 6对接种环灭菌时要用酒精灯的充分燃烧层火焰灼烧可能伸入试管或培育皿的部位；摸索 7利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是防止阻碍热空气流通；摸索 8物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要第一打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 有利于锅内温度上升 ；随后关闭排气阀连续加热，气压升至 100k pa，温度为 121 ，并维护 15 30

7、 min ；最终切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 零 时打开锅盖，其目的是防止 容器中的液体暴沸 ；【补充】培育基的配制原就：学习必备欢迎下载目的要明确：依据培育的微生物种类、培育的目的等确定培育基的类型和配制量；养分要和谐：培育基中各种养分物质的浓度和比例要相宜；例如：碳氮比4 1 时，谷氨酸棒状杆菌大量繁衍而产生谷氨酸少；碳氮比为3 1 时，菌体繁衍受抑制而谷氨酸合 成量大增； ph 要相宜：细菌培育基ph 中性或偏碱性，霉菌培育基呈酸性；2试验操作2 1 运算：依据配方比例，运算100ml 培育基各成分用量；2 2 称量：精确称取各成分；称取牛肉膏和蛋白胨时动作要快速，目的是防止牛

8、肉膏吸取空气中水分；2 3 溶化：加水加热熔化牛肉膏；加入蛋白胨和氯化钠连续加热；加入琼脂；用蒸馏水定容到100ml ；整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂；2 4 调 ph ：用 1mol/lnaoh溶液调剂 ph 至偏碱性；2 5 灭菌：将配制好的培育基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培育皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌；2 6 倒平板：待培育基冷却至50左右时在酒精灯火焰邻近操作进行；其过程是：在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口快速通过火焰；左手将培育皿打开一条缝隙，右手将培育基倒入培育皿，马上盖上皿盖；待平板冷却凝固后

9、，将平板倒过来放置；摸索 1锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是毁灭瓶口的杂菌，防止杂菌感染培育基；摸索 2倒平板的目的是防止培育基冷却过程中形成的水滴落到培育基表面；摸索 3如皿盖和皿底之间粘有培育基，就该平板能否培育微生物？为什么？不能；空气中杂菌会在这些粘附培育基上繁衍，并污染皿内培育基；摸索 4配制斜面培育基中，试管要加塞棉塞的目的是保持通气并防止杂菌感染；摸索 5试管培育基形成斜面的作用是增大接种面积；学习必备欢迎下载2 7 接种271 微生物接种的最常用方法是平板划线法和稀释涂布法，另外仍有穿刺接种和斜面接种等；272 平板划线法：通过接种环在琼脂固体培育基表面连续划线的操作，将集合的菌种

10、逐步稀释分散到培育基表面；其操作步骤是：将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红；在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞；将菌种试管口通过火焰达到毁灭试管口杂菌的目的；将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种；将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞；将皿盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划3 5 条平行线，盖上皿盖，不要划破培育基；灼烧接种环， 冷却后从第一区划线末端开头向其次区域内划线；重复上述过程， 完成三、四、五区域内划线；留意不要将第五区的划线与第一区划线相连；将平板倒置放在培育箱中培育；摸索 6取菌种前灼烧接种环的目的是毁灭接种环上的微生物；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接

11、种环的目的是毁灭接种环上残留菌种；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行， 其目的是防止高温杀死菌种；最终灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作 者；摸索 7在第 1 次划线后都从上次划线末端开头的目的是获得由单个细菌形成的标准菌落；2 7 3稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培育基上进行培育；当稀释倍数足够高时， 即可获得单个细菌形成的标准菌落；2 74系列稀释操作：取盛有 9ml 水的无菌试管6 支，编号101、102、 103、104、105、106；用灼烧冷却的移液管吸取1ml 菌液注入编号为101 试管中， 并吹打 3 次， 使之混匀；从

12、101 倍液中吸取1ml 菌液注入到编号为102 试管内吹打匀称，获得102 倍液；依此类推；学习必备欢迎下载摸索 8操作中试管口和移液管应在离火焰12cm 处；整个操作过程中使用了1 支移液管；3结果分析与评判3 1培育未接种培育基的作用是对比，如有菌落形成，说明培育基灭菌不完全；3 2在肉汤培育基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐；3 3培育 12h 和 24h 后的菌落大小不同（相同、不同）；菌落分布位置相同（相同、不同）；缘由是时间越长，菌落中细菌繁衍越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落 数增多；摸索 9在某培育基上显现了3 种特点不同的菌落，缘由有培育基灭菌不完全或杂菌感染等；摸索 10频繁使用的菌种利用暂时保藏法储存，长期储存菌种的方法是甘油管藏法；前者利用固体斜面培育基培育后，储存在4冰箱中，每36 个月转种培育一次，缺点是 储存时间较短， 简单发生污染和变异；后者将菌种与无菌体积等量混合后储存在20冷冻 箱中；（三）课堂总结、点评微培育基生物配制培育基的原就的培育基的配制运算称量溶化实验配