细菌培养及检测ppt课件

1、细菌及其培育和检测的学习汇报目录第一讲微生物细菌学第二讲细菌培育第三讲大肠杆菌第四讲金黄色葡萄球菌第五讲真菌学及其检测第六讲微生物学及其检测第一讲 微生物细菌学细菌的定义细菌的形状细菌的构造细菌的生理细菌的定义细菌是一类具有细胞壁的单细胞原核型微生物。通常运用显微测微尺来丈量细菌的大小，以微米m作为丈量单位细菌的形状1.球形 双球菌：肺炎双球菌2.链球菌：乳酸链球菌3.葡萄球菌：金黄色葡萄球菌细菌的构造根本构造：细胞壁、细胞膜、细胞浆、核质特殊构造：荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢.球菌形状细菌的构造及功能细菌的构造及功能根本构造由外到内细菌的依次是 细胞壁、细胞膜、细胞浆 和核质。特殊构造有荚膜、鞭毛

2、、菌毛和芽孢。 其中能维持细菌的固有形状的构造是细胞壁，控制遗传性状的是 核质， 与细菌的毒力有关的构造是 荚膜和菌毛，抵抗力强 的是 芽孢， 决议细菌有无运动性的构造是 鞭毛。芽孢菌体细菌的生理水分7090：游离水和结合水固形物(1030：有机物蛋白质、核酸、糖类、脂类、其他和无机物细菌的化学组成细菌的化学组成1、自养菌：自养菌具有完备的酶系统，合成才干较强，能以简单的无机碳化物作为碳源，合成菌体所需的有机物质。2、异养菌：异养菌不具备完备的酶系统，合成才干较差，必需利用有机物作为碳源，其代谢所需能量大多从有机物氧化中获得。 致病菌多属异养菌，寄生菌多属自养菌。细菌的营养类型细菌的营养类型水

3、、含碳化合物、含氮化合物、无无机盐细菌的营养物质细菌的营养物质1、细菌繁衍生长的条件：营养物质五种营养成分、温度最适生长温度37、pH最适7.27.6、浸透压多在等渗条件下、气体根据细菌呼吸类型2、细菌的繁衍方式：简单的二分裂细菌的生长繁衍细菌的生长繁衍第二讲 细菌培育根据某种细菌的营养需求而选择多种原料配制而成的培育基，不仅含有这种细菌生长繁衍所需求的各种营养物质，还要有适宜的PH。本实验所用的牛肉膏蛋白胨培育基，运用较广泛，适于芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等多种细菌的培育。配置好的培育基必需经过灭菌。对不同的资料该当采取不同的灭菌方法。培育基普通采用高压蒸汽灭菌法，就是将待灭菌的培育基放入密闭

4、的高压灭菌锅内，经过加热是锅内的冷空气排进以后。封锁排气阀并继续加热，这是锅内的压力就会升高，最终使菌体蛋白质凝固变性，从而到达灭菌的目的。接种环是用火焰灼烧灭菌的。将某种菌种在彻底灭菌的培育基上，经过一段时间的培育后，就可以得到生长良好的细菌群体，它们在培育基上会呈现一定的形状特征。1、经过对牛肉膏蛋白胨培育基的配置，了解配置培育基的普通步骤和方法。2、了解灭菌的根本原理，以及实验中常用的灭菌方法。3、初步学会细菌培育的根本技术。一、细菌培育的实验原理二、目的要求大肠杆菌的生长形状 芽孢杆菌或金黄色葡萄球菌、牛肉膏、蛋白胨、琼脂。 天平、角匙、200mL烧杯、试管、漏斗、量筒、玻璃棒、滴管、

5、胶管、弹簧夹、铁架台、酒精灯、石棉网、三脚架、火柴、纱布、棉花、牛皮纸、线绳、标签、接种环、精细pH试纸或pH计、金属小筐、高压蒸汽灭菌锅、恒温箱 NaCl、1mol/L的NaOH溶液、体积分数为75%的酒精溶液、蒸馏水。三、资料器具四、细菌培育的方法和步骤五、培育四、接种三、搁置斜面二、灭菌一、培育基的配置用天平称取0.5g牛肉膏、1g蛋白胨、0.5gNaCl、2g琼脂。将称好的牛肉膏、蛋白胨和NaCl放入烧杯。 称量 向上述烧杯中参与蒸馏水100ml，用玻璃棒搅匀后，放到酒精灯上加热。当牛肉膏和蛋白胨溶化后，参与琼脂，并继续用微火加热，在琼脂溶化的过程中，要控制火力的大小，并且不断搅拌，以

6、免培育基溢出或烧焦。待琼脂平安溶化后，补加蒸馏水至100ml。 溶化用滴管逐滴滴入1mol/L的NaCl溶液，边滴边搅拌，并随时用pH试纸测pH，直到pH为7.47.6为止。 调pH将培育基趁热分类到干净的试管中，培育基的高度约为试管高度的1/5.留意:分装时不要将培育基沾在管口和试管上段，以免引起污染。 分装培育基分装终了以后，在管口上加一个棉塞。棉塞能防止杂菌污染，保证通气良好。加棉塞时，应使棉塞长度的2/3哎试管口内。加棉塞一、培育基的配置 每10支试管用线绳捆成一捆，并且在管口外面包上一层牛皮纸，然后，用线绳扎好。在每捆试管外挂上标签，注明培育基称号、配制日期和制造者姓名。 包扎1翻开

7、高压蒸汽灭菌锅，将里面的灭菌桶取出，向锅内加水最好用开水，水面与底架平齐为宜。23456排出锅内的冷空气。接通电源，当压力上升到49KPa时，翻开排气阀放气，当压力降到0是时，封锁排气阀。反复上述放气过程一次，以彻底排出锅内的冷空气。 当锅内的压力上升到98KPa时，控制火力大小，使压力维持在98KPa左右20min。切断电源。将扎好的试管管口向上竖放在灭菌桶内，再将灭菌桶放回灭菌锅。留意：灭菌桶内的物品不能放得太挤，否那么影响灭菌效果。加盖，并将排气软管插入灭菌桶的排气槽内。以两两对称的方式，同时旋紧相对的两个紧固螺栓，以防漏气。当压力降至0以后，翻开排气阀，10min以后，旋松紧固螺栓，取

8、出试管。最后。将灭菌锅里的水排放干净。二、灭菌三、搁置斜面当培育基冷却50左右时，将试管带棉塞的一端搁在一根木棒上。搁置的长度要适宜，使培育基构成的斜面的长度不超越试管总长的一半。四、接种13245用肥皂将双手洗净，擦干，再用酒精75棉球擦拭双手。 当手上的酒精挥发终了以后，点燃酒精灯。留意：一定要等手上的酒精挥发终了后，在点燃酒精灯，否那么，容易将手烧伤。接种 留意：整个实验操作过程都要小心谨慎，不要碰翻酒精灯，以免烧伤。 1用左手大拇指、食指和无名指夹住菌种试管和待接种和斜面试管，右手拧松棉塞，不取下。 2右手拿接种环，在火焰上烧灼灭菌，特别是箍处。 3在火焰边取下两个棉塞，不能放下;烧灼

9、管口一周。 4将接种环伸入试管内，冷却后，悄然挑取少量菌体，立刻将接种环抽出。 5在火焰旁将沾有菌种的接种环迅速伸到斜面培育基的底部，由里向外画蛇形细线。 6抽出接种环后。烧管口，塞棉塞，接种环灭菌。熄灭酒精灯。实验后的带菌培育基，假设用的是致病菌，必需经高压蒸汽灭菌后方可倒掉；假设是非致病菌，也要经过加热后再倒掉。接种终了，将所接菌种、接种日期、接种者姓名填写在标签上。五、培育将接种后的试管放入恒温箱内，在25下培育57d，或在37下培育24h。 五、结论 察看斜面培育基上的细菌生长情况如何？ 细菌在液体培育基中生长后，常出现混浊，沉淀或构成菌膜。 细菌接种在固体培育基上，经过一定时间的培育

10、后，外表出现肉眼可见的单个细胞集团，称为菌落。液体培育基外表生长均匀混浊生长沉淀生长固体培育基：菌落、菌苔六、讨论问题答案1.在高压灭菌开场之前，为什么要排尽灭菌锅内的冷空气？在高压锅灭菌以前，假设国内的冷空气没排尽，当压力上升到98KPa，锅内的温度就不会到达应有的温度，导致灭菌不彻底。2.灭菌终了以后，假设压力未降到0就翻开排气阀，会出现什么景象？为什么？假设压力未降到0就翻开排气阀，试管内的培育基就会冲出管口，这是由于高压蒸汽灭菌锅内外的压力不平衡所致。3.这种操作为什么一定要在火焰旁进展？空气中存在有大量的微生物，而接种灯得火焰旁能构成一个无菌区域，在这里操作，可以防止杂菌污染。第三讲

11、 大肠杆菌定义革兰氏阴性短杆菌，大小0.513微米。周身鞭毛，能运动，无芽孢。能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌 特性大肠杆菌是细菌，属于原核生物；具有由肽聚糖组成的细胞壁，只含有核糖体简单的细胞器，没有细胞核有拟核；细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。 代谢大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。 大肠杆菌1 1、培育：在、培育：在LBLB液体培育基上扩展培育液体培育基上扩展培育2、分别： 灭菌灭菌 倒平板倒平板 培养培养 划线分离划线分离 LBLB液体和固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌液体和固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌将固体培养基倒入将固体培养基倒入4 4个灭菌后的培养

12、皿中，制备平面培个灭菌后的培养皿中，制备平面培养基养基在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养12h12h平板划线法平板划线法培养皿倒置，培养皿倒置，3737恒温培养恒温培养12241224小时小时大肠杆菌的培育和分别菌种保管菌种保管培育基的培育基的配制配制灭菌灭菌超净工件台超净工件台倒平板倒平板接种液体接种液体培育培育划线分别划线分别培育培育大肠杆菌检测方法和步骤方法：用平板涂布法将样品稀释后每个水样做3个浓度涂布到伊红美蓝培育基后，待长出菌落，察看符合特征的群落，计算菌落数目，从而求出总数目。培育基成分及其配置1、成分：蛋白胨10g、乳糖 1

13、0g 、磷酸氢二钾 2g 、琼脂 2030g、蒸馏水1000ml 、2%伊红水溶液 20ml、0.5 %美蓝水溶液 13ml 2、配置方法：先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后参与磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.27.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再参与乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115灭菌20min，冷却备用。临用时参与乳糖并加热溶化琼脂，冷至5055，参与伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。实验步骤涂布平板法1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃

14、珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。以8 000-10 000 r/min的速度处置1min,做成1:10的均匀稀释液。 2 用1mL灭菌吸管汲取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。 3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。4.将培育基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管汲取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀，每个稀释度用一个灭菌刮铲，改换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓

15、度向高浓度涂抹时，也可以不改换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上2030min，使菌液浸透入培育基内，然后将平板倒转，保温培育，至长出菌落后即可计数。第四讲 金黄色葡萄球菌概括 葡萄球菌属微球菌科，本菌有19个菌种，从人体上可检出12个种。 葡萄球菌属主要与皮肤腺体和温血动物的粘膜相关系，有些种是人及动物的条件致病菌。 金黄色葡萄球菌对人类有致病性，通常被称为病原性球菌。金黄色葡萄球菌可引起化脓性炎症，又称为化脓性球菌。 易培育，对营养要求不高，在普通培育基中生长良好。需氧或兼性厌氧。最适生长温度37，最适生长pH 7.4。耐盐性强，在含1015%的氯化钠培育基中仍能生长，可用于挑选菌种。在普通营

16、养琼脂平板上培育1824，可构成圆形、外表光滑、不透明的菌落。可产生金黄色色素，色素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内，不渗至培育中。培育特性 在血平板上可构成明显透明的溶血环。为型溶血。 可产生卵磷脂，在卵黄高盐培育基上构成周围有白色沉淀环的菌落。 大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红实验、 VP实验多为阳性，不产生靛基质。触酶阳性。检测方法资料与方法1、资料培育基：7.5%NaCl肉汤培育基，血琼脂平板培育基按常规方法制造试剂：7.5%NaCl肉汤培育基，革兰氏染色，血琼脂平板，Baird-Parker琼脂平板，生理盐水，兔血浆1：4，器材：温箱，显微镜，天平，均质

17、器，载玻片，L型涂片棒，三角瓶，刻度吸管，平皿，试管及试管架，研磨，1ml注射器，实验动物：安康的小白鼠2、方法 待检样品25g+225ml灭菌生理盐水直接计数法 增菌培育方法Baird-Parker琼脂平板 7.5%NaCl肉汤培育基 血平板 血平板涂片染色镜 溶血察看动物接种实验 血浆凝固实验报告第五讲 真菌学及其检测 1、真菌是一类具有细胞壁，不含叶绿素，无根、茎、叶的分化，以寄生或腐生方式生存的真核微生物。异养型。真菌种类多，有10余万种，大多对人体无害，有的甚至有益。繁衍方式两种：即无性和有性繁衍。还有少数真菌，能致人、动植物发病，称为病原性真菌。一、真菌学2、分类： 酵母菌酵母菌

18、霉菌霉菌 担子菌担子菌真真 菌菌二、检测标本直接镜检墨汁染色乳酸酚棉蓝染色不染色抗原检出分别培育二相性真菌氢氧化钾消化后涂片镜检脑心浸液病原性真菌脑心浸液沙氏培育基 血琼脂平板察看菌落性状和菌丝孢子形状显微镜检查湿片法或直接涂片高倍视野镜检，见有菌丝孢子或单细胞真菌有诊断价值，但不能确定真菌种类第六讲 微生物学及其检测一、微生物学 1、 微生物是指广泛分布于自然界中的一群肉眼看不到的微小生物，具有单细胞或简单的多细胞构造，或没有细胞构造的一群最低等的生物。 2、微生物特性 主要有四个方面 种类多 分布广 繁衍快 易变异3、微生物的形状构造4、微生物的化学组成C，H，O，N，P，S以及其他元素

19、5、微生物的营养物质 1 水和无机盐 2 碳源:凡能为微生物提供生长繁衍所需碳元素的营养物质 3氮源：凡能为微生物提供所必需氮元素的营养物质 来源：周围环境中得有机 无机含氮物质 作用:主要用于合成蛋白质，核酸以及含氮的代谢产物 4 能源:能为微生物生命活动提供最初能源来源的营养物质或辐射能 5生长因子：微生物生长不可短少的微量有机物 6、微生物检测步骤一、液体样品： 1、打来紫外灯灭菌30min 2、把一切做诶生物的物品一并带入无菌室 3、用酒精棉对手进展消毒，取出灭菌平皿并编号根据本厂的菌落数进展编号以下样液的菌落数小于100 4、用灭菌吸管汲取1ml灭菌盐水放入编号为“0的平皿中 5、哟偶那个灭菌吸管分别汲取1ml样品放入编号为原液的两个平皿中假设盛装样液的容器诶桶装那么应先把样液转入灭菌容器中再进展取样 6、汲取样液1ml放入灭菌的9ml盐水中，摇匀后分别