实验四-细菌及其所致病害ppt课件

1、实验四 细菌病原及其所致病害中国农业大学植物病理学系中国农业大学植物病理学系张力群张力群 教授教授：6273146462731464；：；：2021.10.162021.10.16实验目的：n了解细菌病原及其所致病害特点；了解细菌病原及其所致病害特点；n学习病原细菌分别纯化技术；学习病原细菌分别纯化技术；n学习植物病原细菌的接种方法，了解植物病原细学习植物病原细菌的接种方法，了解植物病原细菌的侵入方式；菌的侵入方式；n证明细菌的致病性柯赫氏法那么。证明细菌的致病性柯赫氏法那么。 细菌在植物上引起的病症n坏死：叶枯和叶斑坏死：叶枯和叶斑水渍

2、状水渍状n腐烂：果蔬、块茎腐烂：果蔬、块茎/根的软腐根的软腐n萎蔫：全株性，青枯萎蔫：全株性，青枯 n畸形：肿瘤、发根，畸形：肿瘤、发根，丛枝丛枝 n变色：黄化变色：黄化- Xanthomonas, Pseudomonas - Erwinia, Pantoea- Ralstonia, Clavibacter, Pantoea- Agrobacterium, Phytoplasma, Spiroplasma - Phytoplasma, SpiroplasmaPseudomonas sp. 引起菜豆引起菜豆豆叶斑豆叶斑坏死 necrosisPseudomonas sp.在番茄上呵斥的在番茄上呵斥

3、的叶斑和果斑叶斑和果斑Erwinia sp. 引起苹果火疫病引起苹果火疫病Xanthomonas sp.引起青椒叶斑引起青椒叶斑腐烂腐烂 rotErwinia spp. 引引起多种作物软腐起多种作物软腐萎蔫萎蔫 wiltRalstonia spp. 引起引起多种作物萎蔫病多种作物萎蔫病维管束变色维管束变色畸形畸形 malformationPhytoplasma sp.引引起枣疯病丛枝起枣疯病丛枝Agrobacterium sp. 引起根癌引起根癌Phytoplasma sp.引起番茄黄化引起番茄黄化Phytoplasma sp. 引引起椰树死黄病起椰树死黄病变色变色 discoloration

4、Liberibacter sp. 引起柑桔黄龙病引起柑桔黄龙病Pseudomonas sp. 引引起大豆细菌性疫病起大豆细菌性疫病n菌溢菌溢bacterial ooze：n 发病萎蔫植物组织放发病萎蔫植物组织放入盛有水的试管或平皿中入盛有水的试管或平皿中排出云雾状分散物；高湿排出云雾状分散物；高湿条件下，发病植物组织泌条件下，发病植物组织泌出的脓状物。出的脓状物。细菌性病害的鉴定性病征：细菌性病害的鉴定性病征：n室内镜检n喷菌菌溢景象n细菌病害特有n 分别培育n 选择性培育基n n 致病性检测n 过敏性坏死反响n具有病原性的细菌接种到植物组织烟草后，接种位点附近组织迅速坏死。n Kochs法那

5、么n 实验内容n大白菜大白菜 软腐病菌的分别：系列稀释法；软腐病菌的分别：系列稀释法；n大白菜大白菜 软腐病菌的接种：伤口接种；软腐病菌的接种：伤口接种；实验资料和器具n植物病原细菌：胡萝卜软腐欧文氏菌植物病原细菌：胡萝卜软腐欧文氏菌 Erwinia carotovora n植物资料：大白菜；植物资料：大白菜；n牛肉膏蛋白胨培育基；牛肉膏蛋白胨培育基；n70%乙醇溶液；乙醇溶液；n灭菌水、移液器、震荡器、接种针、镊子、剪灭菌水、移液器、震荡器、接种针、镊子、剪刀、玻棒、涂布器、灭菌塑料离心管、试管架、刀、玻棒、涂布器、灭菌塑料离心管、试管架、保湿盒、记号笔、吸水纸、酒精灯、打火机等保湿盒、记号

6、笔、吸水纸、酒精灯、打火机等n细菌分别纯化的方法：细菌分别纯化的方法：n平板划线法；平板划线法；n系列稀释法；系列稀释法；大白菜软腐病菌的分别n选取新颖发病的大白菜叶片，安康叶片；选取新颖发病的大白菜叶片，安康叶片；n对待分别部位进展外表消毒对待分别部位进展外表消毒70乙醇；乙醇；n用灭菌刀片切取用灭菌刀片切取0.50.5 cm病健交界处植物组病健交界处植物组织，置于灭菌离心管中；织，置于灭菌离心管中；n参与参与0.5mL灭菌水，用玻璃棒充分碾碎，震荡；灭菌水，用玻璃棒充分碾碎，震荡；n系列稀释系列稀释4次；次；n取第取第2，3，4次稀释液各次稀释液各50 L，均匀涂板；，均匀涂板；n菌液被培

7、育基吸收后，反转放置，菌液被培育基吸收后，反转放置，28培育。培育。胡罗卜软腐欧文氏菌的接种n挑取培育好细菌置于灭菌试管中，参与少量灭菌生理挑取培育好细菌置于灭菌试管中，参与少量灭菌生理盐水；盐水；n将试管置于震荡器上震荡使细菌充分悬浮；将试管置于震荡器上震荡使细菌充分悬浮；n利用浊度计或分光光度计确定细菌悬液浓度利用浊度计或分光光度计确定细菌悬液浓度106-108 106-108 cells/mLcells/mL；n用无菌的接种针在大白菜叶片中部刺伤扎孔用无菌的接种针在大白菜叶片中部刺伤扎孔3-53-5个；个；用移液器滴加细菌悬液用移液器滴加细菌悬液5-105-10微升；大白菜接种在刺伤微升；大白菜接种在刺伤处；等量灭菌水接种作为对照。处；等量灭菌水接种作为对照。n接种后植物资料置于消毒容器中，接种后植物资料置于消毒容器中，25-28 C25-28 C下保湿培育下保湿培育24-48 h24-48 h察看并记录结果。察看并记录结果。作业：作业：n撰写实验报告撰写实验报告n详细记录病原细菌分别和接种方法；详细记录病原细菌分别和接种方法；n纯化所得单菌落数量、种类和菌落特征；纯化所得单菌落数量、种类和菌落特征；n计算所分别植物资料中的活菌数计算所分别植物资料中的活菌数CFU