磁分离酶联免疫激素定量分析系统检测生殖内分泌六项激素

1、磁分离酶联免疫激素定量分析系统检测生殖内分泌六项激素康 丽(黑龙江省鹤岗矿业集团公司总医院职业病防治所154100)【中图分类号】r446.1【文献标识码】a 【文章编号】1672-5085 (2010)24-0190-02【摘要】目的 了解serozyme-i型磁分离酶联免疫内分泌定量测定仪检测生殖内分泌激素fsh、lh、t、p、e2、prl的性能。方法 使用serozyme- i型磁 分离酶联免疫内分泌定量测定仪及其配套试剂对fsh、lh、t、p、e2、prl检测 结果的线性、精度、互染率、可比性、抗干扰能力进行评价。结果serozyme-i 型磁分离酶联免疫内分泌定量测定系统及其配套试剂

2、对fsh、lh、t、p、e2、prl 检测结果的线性良好；总重复性cv<6%,批内变异cv<4%,批问变异 cv<12%,互染率<3%；与ria法同时检测20份标本，其结果经统计学分析， 两者相关性良好。结论磁分离酶联免疫激素定量分析系统检测生殖内分泌六项 激素重复性好，灵皱度高，快速简便，无放射性污染，有推广应用价值。【关键词】酶联免疫测定磁分离酶标记技术激素磁分离酶联免疫技术是瑞士 serono诊断屮心发明的一种非同位素免疫 检测的先进技术，称为磁性抗体免疫技术(maia)o使双抗体夹心酶联免疫技术在 游离型标记抗体和标记抗原.抗体复

3、合物分离屮具有分离完全和快速的优点，也 为磁性分离技术的推广创造了条件。我们使用该屮心发明的serozyme- i型磁分 离酶联免疫内分泌定量测定系统及其配套试剂对tsh、lh、t、p、e2、prl进行 了检测，现将检测结果报告如下。1实验原理待测物(fsh、lh、t、p、e2、prl)同分别用碱性磷酸酶(alp)和异硫氤酸 荧光素(fitc)标记的单克隆抗体反应形成酶标抗体抗原fitc标记抗体的复合物, 即双抗体夹心。再加入磁分离剂(含有与fitc结合的磁性微粒)，使复合物与磁性 微粒结合，在永久磁体吸引下使其沉淀到管底，分离出游离酶标抗体，加入底物 单磷酸酚ftt（pmp）, alp催化p

4、mp水解释放出酚駄，在ph值为10.5的缓冲液中 呈桃红色，再以永久磁体吸引磁性复合物使其沉淀，上清液置于serozyme- i 型磁分离酶联免疫内分泌定量测定系统进行测定。2材料与方法仪器。serozyme- i型磁分离酶联免疫内分泌定量测定系统（492nm、550nm> 630nm三波长同时检测，程序编辑，曲线绘制，微机控制，打印输出），磁分离 器和混匀器。试剂。采用fsh、lh、t、p、e2、prl试剂盒（由北京倍爱康生物技术有限公司 提供）。（3）检测标本。临床病人标本，空腹采血。（4）检测方法。严格按照试剂盒说明书所介绍的方法进行操作。先绘制标准曲线，复管测定，在serozym

5、e- i型磁分离酶联免疫内分泌定量测定 系统上以fsh、lh、t、p、e2、prl定量程序测定，自动绘制标准曲线，并将数 据贮存人相应的定量程序。然后以同样的方法检测待检标本，将各管用仪器直接 测定读数。3结果3.1标准曲线（线性范围）各标准液浓度相对应的吸光度均值在仪器经对数处理后，线性良好。fsh在0 150mlu/ml, lh 在 0200mlu/ml, t 在 0.555nmol/l, p 在 0120nmol/l, e2 在0llnmol/l, prl在0250ng/ml范围内与吸光度成线性关系。3.2显色稳定性空白对照（基质液+终止液）和测定管（酶标抗体+基质液+终止液）在不同时间

6、（即10min> 20min 30min、60min 120min 时）观察其吸光度变化,入为 550nm,结果见表lo3.3总垂复性取10份静脉血，每份重复测3次，计算其总重复性。结果见表2。3.4批内变异同时将三份标本分别进行lh、fsh的批内检测，n=10,结果见表3、表4。3.5批间变异同时将3份标本分别进行lh、fsh的批间检测，n=5,结果见表5、表6。3.6互染率取-份高值标本，重复测3次，立即测1份低值标本，重复测3次，按（低1低3） / （高 3低 3）×100%,计算互染率。结果为：fsh 1.35%, lh 1.26%,t0.84%, p2.06

7、%, e21.95%, prl2.33%。3. 7对比实验取临床病人标本20份，分别用磁分离酶联免疫法和放射免疫法同吋检测fsh和 lh的含量.并将测定结果进行统计学分析，见表7。两者相关性良好。3.8抗干扰能力取1份病人静脉血，分别注入两只试管，使其溶血和不溶血，同时检测fsh、lh、t、p、e2、prlo结果表明，溶血对检测值有较人影响，cv在1042%。4结论由于体液中激素浓度甚微，而在临床检验的实际工作中，不可能抽取病人较多的 血液，因此要求测定激素的方法极其灵敏而特异。放射免疫测定法使体液中激素 的测定发生了飞跃的发展，但存在着放射性物质污染、需要特殊的仪器、需批量 处理因而出结果时

8、间较长等问题；酶联免疫测定法的灵敏度和特异性都可以和放 免法相媲美，又不存在放免法所具有的问题，所以近年来得到广泛应用。在酶免 测定中，分离游离型标记抗体和标记抗体.抗原复合物是一个重要环节。在多种 分离方法中，磁性分离方法具有分离完全而快速的优点，但因磁性抗体免疫试剂 制备困难而限制了该技术的推广。瑞士 serono诊断中心发明的磁分离酶联免疫 测定（maia）技术，是酶联免疫分析技术与磁性微粒分离技术相结合的一种测定方 法，以一种高亲和力的单克隆抗体为试剂，并采用抗荧光素标记体与直径 lμm的粒子结合成为磁性微粒抗荧光素抗体，抗原抗体反应在均匀液相中进 行，不仅反应速度快，而

9、且均匀，时间明显短于固相分离，为酶免疫分析中磁分 离技术的推广和应用创造了条件。我们用磁分离酶联免法测定生殖内分泌激素fsh、lh、t、p、e2、prl六项，对 该方法在线性范围、显色稳定性、精度、互染率、可比性、抗干扰方面能力进行 评价。结果显示：标准曲线范围较宽，重复性良好；批内精度cv&t;4%、批间 精度cv<2%，总重复性cv均<6%；互染率<3%；与ria法同时检测20 份标本，其结果经统计学分析，两者相关性良好。溶血对检测结果有较大影响, 故在采血时，一定注意不要溶血。用磁分离酶联免法测定生殖内分泌激素fsh、lh、t、p、e2、prl,方法简单： 孵育、分离、显色和测定四步连续进行，标准曲线绘制及结果计算自动程序化, 检测速度快，每秒一管，显著地提高了工作效率，满足医生和病人即刻出结果的 要求。仪器采用三波长同吋检测，可消除试管因素导致的误差，也拓宽仪器量程 5倍，达10个吸光度，拓宽测量范围，h溶液颜色稳定。该项技术采用了非同 位素的碱性磷酸酶作标记物，免除了对人和环境有害的放射性物质污染。操作和 测定设备占用空间小，对实验室条件要求低，条项性能指标可与同位素标记的 ria相媲美。采用磁性分离抗体免疫试剂，开创