利用微生物法测定维生素功能饮料中生物素含量

1、利用微生物法测定维生素功能饮料中生物素含量文iffie烬蛛81贝法魂阳市市场话行鼓执法中心、次阳食为药韵植就所/+：物«( biotin )也就是通过口身无法合成的人体所 任1必需的水藩性维牛素实，它备与机体二大节养物质 的代谢-是人及动物不可成狄的骨芥物质c f1前.生物农 的测定方法主要有微生物法、eusa法、荧光测定法、液 相色谱质潜联用法.微分豚仲伏安等方法.其中俄生物法 是美国官方分析化学家协会(aoac )的推作方法,也足 中国现行标准、fda 直使用的方法。本文采用国标中微 生物方法来测定谁生索功能it料中生物素的台址.从细t 关系、精密度以及回收率三个方而来睑证kr好

2、的无现性 与稳定性个本妍究通过测定参加枇物乳杆带(lctobacihvs phntarum )的的悬液的吸光(ftahj生物家含虽之间的税性 关系，进师得出功能饮料中生物舞的含世 以生物索含林 (ng)为横坐标.吸光值(a)为纵坐标.fto.ol-o.lngzml 葩即内测得标准曲级(r2 = 0.992) 标准偏差为3.6% (n = 6),加标的平均网收率为96.7%o本方法的页现性较好, 适用于推生京功能伏料中生物«tm的测定。、材料1 .标准38株.机物孔杆fulaclobgihits pkmarvm ( atcc 8014 )。2. 标准品.牛物索怵准品(c10h16n20

3、3s).纯度 99%：3. 培养甚.通过实凝室培养瓶片收的乳酸轩值琼脂以 及肉汤堵芥基、生物索测定用培养基；物纯水二、方法1. 标准潜液的配制。标淮溶液的储藏液,中间液及i.作 液的配制要严格按照gb 50o9.25&-20xx 食品平安国家标 准食品中生物素的测定.其中的匚作液要求现川现就 另需注怠的是 ne制过程中均需采用棕色容域瓶进行定 容，并丁4y冰箱进行保存。2. 很测样液的处理.闰家怀准将待测样品分成三大 类.此次喊验样品选择的是维生素功能性饮料，因此选择 共中对强化生物京的伏科或维生素值混料等样皿的处 理方式进行样液处理 这里需要注意的是对于ph的尚整， 还要将此次5ml

4、的样皿待测液稀耗200倍.使得m生物素含 枇城终 lto.olnr/ml-o.ln«/nilaiffl 之内3. 接神函愚液的制备。将侦先冻存好的(物乳杆依r 作使株fis珠于陈存管中转接于乳敢肝俏肉汤.36p培养24h 后奏心去上清.参加0.85%的naci溶液，混匀再肉心去上 浒直至透光率到达80%：4. 测定管系列管配制.怵准系列管按黑丧1依次参加. 混匀.衍个梯度做3个平行.绘制标准曲裁时.以衍点均(ft 计算；试样系列管按照表2依次参加，混匀，旬个梯度做3 个平行。si«1： ddh/o、标准工作液、生物索测定用培养参加 (ml)编号12345678910ddh2

5、o5543202)0忻刑作液0012345345培养基5555555555注:1试管未核村空白；2试管按什空白；3-7试曾参加低浓度杯准溶波；8-1cha您参加高浓度标准落波，«2：超纯水、样品溶液、生物素测定用培养h参加 (ml)编号1234ddhq4321待测样液1234培养基55555. 培养. ( 1 )灭阿：将所有试管放入121灭档锅， 高压灭w5min0 (2)接谄和培养：试骨快速拎却到室 温，在无曲条件下，除标准系列管中未接神空白和样品 空白外向每只试管接种50»ltt物乳杆倘弟悬戒.于 37%： ± it培并箱中培养20h,直到透光率无明显变化，也

6、三、结果与分析1.线性关系分析怵准系列曲线如图1.结果显示.住 生物索含址在内，标准曲线的线性关系r 好.回v力程为:y = ().w)89x +0.0034. r2 = 0.99251.0000 8000g0004000-2000 000生物mh i ng)y = 0.8689x4.00034 r2 = 0.99250.608就是建大溶液混浊度6. 测定.光利用装有技神空口试被的比色1iil ( icm ) 进行藜外分光光度汁谓0,后进行标准系列管和试样系列管 的吸光值测定。空白对照窝液清每测定一支试管前均 湍要用涡旋混匀：将所测结果绘制成标准曲线，其中横坐 标为生物素含m (叩)、纵坐标为

7、吸光(ft (a) o7. 计算。样液中生物索含w按以下公式汁机堂x型m j000其中.x为样品中生物索含m ( jig/looml) ; e为有效 测试管试样中生物索族度平均值(wml) .伪样被稀梓倍 &(2tx) . m为样液质状<g) . 100和1000为换每系致2.情密同一批次的维牛索功能饮料按照上述方法精确堕取n = 6份并进行测试，测得样液中生物素含员平均ff(>j96,67p.g/100g. rsd为3.3%.详见友3。表3：测试结果样液123456平均值rsd%含搬(h-g/inog)92.0098.0094.0096.00)02.0098.009(3.

8、673.63.回收率.同一批次的雄牛索功能伙料按照述方法素的网收率.为920% - 102.0% ,洋见衣4精确妆取n-g份并进衬测试.计尊收率 待测样液生物短号加标fit ( g/looml.)测得fit ( pig/loomlj1可收率(%)1kx).(x)92.0092.02100.0098.0098.03100.00&4.00lm.o4100.0096.0096.05100.00102.00102.06100.0098.0098.0四、结束语微生物方法虽工作址大.周期劾污染，但却能够 检测出可被人体吸收的有活性的生物京含u :桩物乳h弟 的活力与其对牛.物术的灵敏性成正比,因此

9、在使用前，© tsim f结合.故玻璃器皿使川前苗蜜严格滑洗.井200气: 热2k测址吸光值时.为形免吸光值出现较大俯差而影 响蛟终结果.应迅速测定每支涡旋混匀后的试讨'7;作者简介：谭艳妮(1987.10-),硕士研究生，工程确保俐株传代及保召过程中无污染因为生物素极易与抗师.很生物学身分孑生物学。202x年山东省广饶县玉米生产主推技术应用现状文 最文就9歧田篇谛醇广嫌昼衣炊农村扇q/-v21年中央农村丁.作会议关于“农“翎域亚点丁作 乙u提出.耍牢牢把住根食平安七助权.楸贷生产年年 要抓紧”的硬荽求：山东省广饶块为确保全ihrft平安生 产.灵活成用多邛!主推技术助力玉米

10、生产.一、广饶县玉米生产根本情况202x年广饶11玉米神仙面w46.98万而，其中芥插松 玉* (mft )0.28万由、夏玉米粒用玉米捕种面积 46.7万由。近几年.在种万品种上,广饶县万柚面根较 大的皿抻有五个,分别为：农大372面积,登海605、中 科工505、存海618im8l郑单958.广饶以夏k米播期一 般在6月初开始,6月中下旬全部播种完成,插种密度乎 均为4270株/亩部井滩区一般住描神府和苗期浇水 2次,县北部黄渔区般插件期浇水】次,2月上中旬收 获完成。202x年广饶县夏玉米平均亩椎数4117袱、袱粒 数472.49粒,千粒敢321.46g,平均询产532.73公斤(不含 绝产而枳),总产24.35万吨202()年夏玉米价格好于往 年，平均每公斤2.4元，由产值约1278.55元.柬燃了农户 种植粮食作物的热悄。二、主要技术推广及成效-s 一场四改”技术.即：合理增加种植密度.改 仲苗密性高产品种改紊种为直播、改机放用肥为尼方施 肥.改人工种植为机嫉化作业。据统计.202x年广洗其玉 米平均抻植密度为4270株；宜播血枳为42.？万由，占夏插 玉米面枳的93.58%；机播而