盐酸头孢吡肟溶液抑菌试验

1、项目人员 ItemPersonnel部门/岗位Dept./Position签名Signature日期Date方案起草Prepared byQC/检验员年 月 日 (Y) (M) (D) QA/验证QA年 月 日 (Y) (M) (D)方案审核Reviewed byQC/经理 年 月 日 (Y) (M) (D)QA/副经理 年 月 日 (Y) (M) (D)QA/经理年 月 日 (Y) (M) (D)方案批准Approved by质量受权人 年 月 日 (Y) (M) (D)颁发部门Issued byQA生效日期Effective Date 年 月 日 (Y) (M) (D)分发部门Distri

2、buted to QC制作备份：1份Copies prepared: 1pcs目 录1.概述32.目的33.依据及参考文件34.验证小组和各部门职责35.验证时间安排46.验证内容47.偏差处理及变更控制88.验证结果评价内容8附件1 ：培训确认表1附件2：文件检查确认表2附件3 ：设备确认结果3附件4 ：试验器材确认结果4附件5 ：试验用菌种确认结果4附件6：培养基确认结果5附件7：试剂确认结果5附件8：器皿确认结果6附件9：总菌落数计数验证结果记录7附件10：抑菌效力确认结果记录81.概述本公司无菌原料药生产工艺中，药液的无菌保证主要通过滤芯除菌过滤来实现。在一定的周期内，截留在滤芯上的微

3、生物可能生长繁殖，当达到一定的数量级后，可能超出滤芯的理论除菌能力。从盐酸头孢吡肟过滤系统相关物料组成分析，药主药为抗生素粗品，理论上分析，上述物料均具有较强的抑菌作用，极不利于微生物的生长繁殖（详见表1）。本方案拟在实验室模拟过滤系统最有利于微生物生长的环境，并在此环境下接种一定数量的微生物，定期取样、培养并观察计数，计算微生物的含菌生长繁殖量。考察滤芯使用周期内盐酸头孢吡肟溶液的微生物增加率，计算微生物累积值，为除菌过滤系统验证提供数据支持。2.目的考察滤芯使用周期内盐酸头孢吡肟溶液的微生物增加率，计算微生物累积值，为除菌过滤系统验证提供数据支持。3.依据及参考文件3.1中国药典2010年

4、版二部附录XI J“微生物限度检查法”3.2中国药品检验标准操作规范2010年版“微生物限度检查法”3.3药品GMP指南2011年版“无菌药品”3.4中国药典2010年版二部附录 N“抑菌剂效力检查法指导原则”3.5 SOP-QC-0213-V01微生物限度检查法3.6 SOP-QA-017-V021验证管理规程4.验证小组和各部门职责4.1验证小组及对应职责职位姓名部门具体职责组长谢圣坤QC验证总协调工作，并审核验证的数据组员常磊QC负责验证方案和验证报告的起草，负责验证数据的收集，负责检品的检测与验证记录的填写。辛海安QC负责检品的检测与验证记录的填写。朱利安许维雅李艳姣刘利彭艳妃QC监督

5、验证过程实施及验证过程中的偏差及OOS处理。吴东琴QA负责验证方案和验证报告的归档保存。监督验证过程实施及验证过程中的偏差及OOS处理。4.2验证委员会姓名职务职责颜杰质量受权人1.负责验证方案及报告的批准；2.负责验证过程中出现的偏差/OOS的批准放行。马立如QA经理1.负责验证方案及报告的审核；2.负责验证过程中出现的偏差/OOS的评估。张德志QA副经理5.验证时间安排时 间工作内容2013.0304方案起草、审批2013.04标准确认、检验方法确认2013.04完成报告6.验证内容6.1验证前准备6.1.1培训确认本次验证内容是否已对相关人员进行培训，检查确认结果记录在附件1培训确认表。

6、6.1.2文件确认本次验证前验证方案及相关指导的SOP是否已经批准。检查确认结果记录在附件2文件检查确认表。如无相关文件，则需要增加发放。6.1.3仪器设备确认检查所涉及的设备是否符合实验要求，确认结果填写在附件3 设备确认结果中。可接受标准：设备应经验证，在校准有效期内。6.1.4试验器材确认检查所涉用试验器材，确认结果填写在附件4试验器材确认结果中，可接受标准：试验器材各配件应齐全，无损坏。6.1.5试验用菌种确认检查所涉及的试验用菌种是否符合实验要求，确认结果填写在附件5 试验用菌种确认结果中。可接受标准：菌种形态特征应良好、菌种代数不得超过第五代。6.1.6培养基确认检查所涉及的培养基

7、是否符合实验要求，确认结果填写在附件6 培养基确认结果。可接受标准：培养基应在有效期内，应做适用性检查。6.1.7试剂确认检查所涉用试剂是否符合实验要求，确认结果填写在附件7试剂确认结果中。可接受标准：试剂在有效期内。6.1.8器皿确认检查所涉用器皿是否符合实验要求。确认结果填写在附件8器皿确认记录中。可接受标准：一般玻璃器皿要求洁净，无破损，量器要进行校准。6.1.9确认用培养基、缓冲液应置121湿热灭菌30分钟，平皿、刻度吸管应置200干热灭菌2小时。6.2验证方法6.2.1抑菌试验时间盐酸头孢吡肟溶液：盐酸头孢吡肟生产周期内，主药系统A用于盐酸头孢吡肟溶液的过滤，每批过滤时间约1.52h

8、，1天过滤34批，期间用丙酮甲醇浸泡，滤芯使用周期为15天。本方案考察盐酸头孢吡肟溶液在一次过滤时间内（1.52h）对试验菌的作用效果。因盐酸头孢吡肟溶液的杀菌效力非常强，理论上每次过滤都可视为一次系统灭菌，若通过试验可证明这一点，则不再考察浸泡液甲醇丙酮的抑菌效力。若在试验时间内，微生物的下降对数值没有达到预期要求，则需另起方案考察浸泡液甲醇丙酮15天内的抑菌效力。6.2.2 菌种选择及菌液配制：细菌：金黄色葡萄球菌（ATCC6538）、铜绿假单胞菌（ATCC9027）、大肠埃希菌（ATCC 8739）细菌芽孢：枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢（ATCC9372）枯草芽孢杆菌ATCC6633真菌：白

9、色念球菌（ATCC10231）、黑曲霉（ATCC16404）环境菌：表皮葡萄球菌耐药菌：本公司菌种库中暂没有盐酸头孢吡肟溶液的耐药菌。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢枯草芽孢杆菌、表皮葡萄球菌的新鲜培养物接种至胰酪胨大豆琼脂培养基中经3035培养1824小时；白色念珠菌的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基中经2025培养2472小时。上述培养物分别加入pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml洗下菌苔转移至空试管中作为菌悬液原液，用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液进行10倍梯度稀释至含菌数108cfu/ml的菌悬液。取黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中经

10、2025培养57天，加入含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml洗下孢子吸出，转移至空试管中作为菌悬液原液，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液进行10倍梯度稀释至含孢子数107cfu/ml的孢子悬液。6.2.3菌液计数：分别取上述5种细菌采用平皿法测定1ml菌悬液的菌数，注入不超过45胰酪胨大豆琼脂培养基1520ml，每株试验菌平行制备2个平板，于3035倒置培养。分别取上述2种真菌采用平皿法测定1ml菌悬液的菌数，注入不超过45沙氏葡萄糖琼脂培养基1520ml，每株试验菌平行制备2个平板，于2025倒置培养。6.2.

11、4盐酸头孢吡肟溶液检验方法计数方法验证在进行盐酸头孢吡肟溶液的抑菌效果验证之前，必需确认其检验计数方法验证。方法如下：Ø 试验组：Ø 过供试液之前先用10ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液加入过滤器中，以润湿滤膜。取1ml盐酸头孢吡肟溶液加入100ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，用薄膜过滤器滤干，再用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液400ml冲洗（100ml/次，冲洗4次），在最后100ml中分别加入金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢枯草芽孢杆菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌液各1ml（含50100cfu试验菌），滤干，每种菌平

12、行制备2张膜，细菌将滤膜菌面朝上贴于胰酪胨大豆琼脂培养基平板上，置3035培养48小时计数，酵母菌及霉菌将滤膜菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上，置2025培养72小时逐日点计菌数。菌液组：测定所加的试验菌数。Ø 供试品对照组：制备方法同试验组，不加验证菌液。Ø 稀释剂对照组：用相应的稀释液替代供试品，按试验组的制备方法和菌落计数法测定菌数。试验结果：结果填写附件9总菌落数计数验证结果记录6.2.5盐酸头孢吡肟溶液抑菌试验供试液制备：取盐酸头孢吡肟溶液30 ml/份共8份，具体方法如下：Ø 试验组：取盐酸头孢吡肟溶液30 ml/份5份，分别加金黄色葡萄球菌、铜

13、绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢枯草芽孢杆菌、表皮葡萄球菌菌液0.3ml（含菌量为107108 cfu），盐酸头孢吡肟溶液中每1ml含菌量为106105107cfu106cfu，每种菌分别加1份；取盐酸头孢吡肟溶液30 ml/份共2份，分别加白色念珠菌、黑曲霉1ml0.3ml（含菌量为106107 cfu），使盐酸头孢吡肟溶液中每1ml含菌量为105106 cfu，每种菌分别加1份，使供试液中的试验菌均匀分布。然后将接种的供试液在试验期间置2025，避光贮存，并防止污染。在供试品刚接种（0时）及表1规定的间隔时间，分别从上述每个容器中取供试品3ml，其中1ml用PH7pH7.0

14、无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释成1：10；1：102二两个稀释级，原液及稀释后的2个级别，采用6.2.14的方法测定每份供试品中含有的菌数。Ø 菌液组：测定所加的试验菌数。Ø 供试品对照组：取盐酸头孢吡肟溶液30ml/份共1份，制备方法同试验组，不加验证菌液。试验结果：结果填写附件10抑菌效力确认结果记录6.2.6 结果判断：1.盐酸头孢吡肟溶液计数方法确认结果判断：稀释剂对照组的菌回收率均应不低于70%。若试验组的菌回收率均不低于70%，则可按该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌或酵母菌数；若任一次试验中试验组的菌回收率低于70%，需分析原因，采取适当方法重新验证

15、。注：试验组回收率（%）=（试验组平均菌落数供试品对照组平均菌落数）÷菌液组平均菌落数×100%稀释剂对照组回收率（%）= 稀释剂对照组平均菌落数÷菌液组平均菌落数×100%2.抑菌效力结果判断：表1供试品标准以及取样时间盐酸头孢吡肟溶液0h、1.52h分别取样。计算考察时间段内菌数的下降对数值。7.偏差处理及变更控制确认过程中如果有任何偏差应及时记录，分析原因，评价是否是重大偏差，并提出整改措施。重大偏差填写偏差处理单，并将偏差复印件附于确认报告中。确认过程中是否有变更，如有变更将变更在确认报告中进行说明。8.验证结果评价内容对验证结果进行综合评价，内

16、容包括但不限于：确认实验是否有遗漏；确认验证过程中是否有偏差，偏差是否已经采取纠偏措施和预防措施；确认记录是否完整；是否需要进一步补充实验。评价必须以书面形式写出报告。附件1 ：培训确认表 培训确认表培训人/日期培训对象部门职责签名谢圣坤QC验证总协调工作，并审核验证的数据彭艳妃QC监督验证过程实施及验证过程中的偏差及OOS处理。辛海安QC负责检品的检测与验证记录的填写。朱利安QC许维雅QC刘利QC李艳姣QC吴东琴QA负责验证方案和验证报告的归档保存。监督验证过程实施及验证过程中的偏差及OOS处理。附件2：文件检查确认表文件检查确认表SOP名称SOP编号是否已批准培养基管理规程SOP-QC-0

17、17-V01是 否菌种管理规程SOP-QC-012-V02是 否XG1.D型脉动真空灭菌柜使用、保养标准操作规程SOP-QC-0343-V01是 否培养箱使用和维护保养标准操作规程SOP-QC-303-V00是 否电子天平使用标准操作规程SOP-QC-317-V00是 否洁净工作台使用及维护保养标准操作规程SOP-QC-304-V00是 否生物安全柜使用、保养标准操作规程SOP-QC-0386-V00是 否Haier 药品保存箱使用及保养标准操作规程SOP-QC-0395-V00是 否红外电热灭菌器使用、保养标准操作规程SOP-QC-0389-V00是 否评价：确认人/日期： QA复核人/日期

18、： 附件3 ：设备确认结果设备确认结果设备名称型 号生产厂家及出厂编号校准有效期至验证编号霉菌培养箱MJ-300BS-II上海新苗医疗器械制造有限公司(0812240005)霉菌培养箱MJ-300BS-II上海新苗医疗器械制造有限公司(1005240001)生化培养箱SPX-300BS-II上海新苗医疗器械制造有限公司（0405011）电热恒温培养箱DHP-9162上海一恒科技有限公司（035184）脉动真空灭菌柜XG1.DTX-0.36B山东新华医疗器械股份有限公司（201009535）脉动真空灭菌柜XG1.DTS-0.24BXG1.DTX-0.36B山东新华医疗器械股份有限公司（20122

19、02420100953）生物安全柜BSC-1600A2苏州安泰空气技术有限公司（J10060420）生物安全柜BSC-1600A2苏州安泰空气技术有限公司（J10060421）生物安全柜BSC-1300A2苏州安泰空气技术有限公司（J10050341）电子天平PB602-N梅特勒-托利多仪器有限公司（1201130089）评价：确认人/日期： QA复核/日期： 附件4 ：试验器材确认结果试验器材确认结果名称型 号来 源检查项目及标准检查结果微孔滤膜孔径0.45m，直径50mm杭州高得泰林有限公司完整，无破损封闭式无菌检查薄膜过滤器STV2、STV3型浙江宁海白石药检仪器厂完整，洁净，无破损评价

20、：确认人/日期： QA复核人/日期： 附件5 ：试验用菌种确认结果试验用菌种确认结果菌种名称及编号来 源保存方法及条件菌种代数（不得超过第五代）/形态特征金黄色葡萄球菌（ATCC6538）美国菌种收集中心培养基斜面2-8大肠埃希菌（ATCC8739）美国菌种收集中心培养基斜面2-8枯草芽孢杆菌ATCC6633枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢（ATCC9372）美国菌种收集中心上海福泽医药器材有限公司培养基斜面2-8铜绿假单胞菌（ATCC9027）美国菌种收集中心培养基斜面2-8表皮葡萄球菌环境菌培养基斜面2-8白色念球菌（ATCC10231）美国菌种收集中心培养基斜面2-8黑曲霉(ATCC16404)

21、美国菌种收集中心培养基斜面2-8评价：确认人/日期： QA复核人/日期： 附件6：培养基确认结果培养基确认结果培养基名称来 源检查项目及标准批号/有效期至/检查结果胰酪胨大豆琼脂培养基北京三药科技开发公司1.应在有效期内2.应做适用性检查沙氏葡萄糖琼脂培养基北京三药科技开发公司1.应在有效期内2.应做适用性检查评价：确认人/日期： QA复核人/日期： 附件7：试剂确认结果 试剂确认结果试剂名称规格来 源检查项目及标准批 号/有效期至pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液250g/瓶北京三药科技开发公司应在有效期内氯化钠500g/瓶广州化学试剂厂应在有效期内新洁尔灭溶液500ml/瓶广东恒健制药有限公司应在有效期内洗必泰5kg/箱锦州九泰制药有限责任公司应在有效期内聚山梨酯80500ml/瓶天津市大茂化学试剂厂应在有效期内评价：确认人/日期： QA复核人/日期： 附件8：器皿确认结果 器皿确认结果容器名称规格型号检查项目及标准检查结果培养皿9cm洁净，无破