实验室动物模型制备注意事项(1)4页

1、自我给药训练程序1、静脉插管手术大鼠经2%戊巴比妥钠（腹腔给药）麻醉，将静脉插管置于右侧颈静脉，插管尖端位于右心房开口处。静脉插管固定后经皮下穿过耳后置于颅骨上方，与静脉自我给药套管相连，用牙科水泥固定于颅骨上，水泥凝固后手术完毕。术后当天静脉给于0.2%的肝素钠0.25ml/只抗凝。将大鼠单笼饲养，术后大鼠体重恢复至手术前即可进行实验。每天静脉注射青霉素20万单位/只以防止静脉给药套管堵塞或发生感染。2、自我给药训练大鼠进行10天的自我给药训练，每天3小时，每小时之间暂停5分钟。训练在大鼠的夜间周期进行。训练采用FR1强化程序，每次给药之间有40秒的不应期，每次给药伴随有5秒的声音及灯光线索

2、。每个训练期以笼灯开启为信号，动物触碰有效鼻触后笼灯关闭，不应期结束后笼灯再次开启。为防止动物给药过量发生死亡，每小时给药次数被限制在一定次数。3、消退训练根据不同的点燃方式选择相应的消退程序。在由给药相关线索点燃的消退训练过程中，笼灯关闭，动物触碰有效或无效鼻触均不引起给药或条件相关线索（灯光声音）或者药物。动物进行消退训练直至触碰有效鼻触的次数降低到基线值的20以下（基线值为自我给药训练最后3天的均值），且维持至少2天。在由药物本身点燃的消退训练过程中，笼灯开启，动物触碰有效或无效鼻触均不引起给药，但是伴有与自我给药训练期间相同的条件相关线索（灯光声音）。动物进行消退训练直至触碰有效鼻触的

3、次数降低到基线值的20以下（基线值为自我给药训练最后3天的均值），且维持至少2天。4、复燃测试 点燃方式可分为训练期间给药伴随相关线索点燃与药物本身点燃。当动物的觅药行为消退至达到上述标准后，对动物进行给药相关线索复燃测试时，除了触碰有效鼻触不引起给药外，测试时的条件与训练期间相同，测试时间为30分钟，并由电脑同步记录测试期间动物触碰有效或无效鼻触的次数。对动物进行药物本身的复燃测试时，根据药物的起效时间，选择恰当的给药途径提前给与点燃剂量的药物。除了触碰有效鼻触不引起给药外，测试时的条件与训练期间相同，并由电脑同步记录测试期间动物触碰有效或无效鼻触的次数。自身给药训练注意事项1. 训练前清洁

4、训练箱；2. 酒精冲洗输液管；3. 再用盐水冲洗输液管，后测泵速；4. 测完泵速后，打开程序，确保程序运行正常；5. 训练中，每隔20分钟观察输液管以及大鼠鼻触情况；6. 每天静脉注射青霉素；7. 每天训练完后，清洗训练箱，并做好消毒工作，保持实验室环境整洁；8. 密切注意温湿度；9. 注意周围环境的影响，尽量保证安静的环境；10. 核团给药前三天疏通套管以确保微注射顺利进行；11. 每天抚摸大鼠，增加交流。条件性位置偏爱(CPP)实验程序常见的条件性位置偏爱实验分为三个步骤：前测（preconditioning）、条件性训练(conditioning)与测试(test)。前测在前测之前通常还

5、可进行长短不同的适应期，以尽可能减少实验动物暴露于实验装置的新奇感（novelty）与对动物造成的应激，也可不用，通过前测使动物适应测试环境。前测时，将实验动物放入箱体中，让其在各箱体中自由活动并记录动物在每侧箱体停留的时间。前测在各个实验室的设计中各不相同，比如可每天测试1次，每次15分钟，连续4天，第4天时记录动物在两侧箱体内的停留时间，若动物在一侧箱体内停留时间超过10分钟，说明动物对一侧环境具有天然倾向，应将动物从实验组中剔除，尽可能保证实验组的动物不具有天然倾向性。这一挑选程序有时会剔除掉25%左右的动物。在正式训练前检测非条件性偏爱（天然偏爱倾向），并根据前测的结果设计合理的实验方

6、案，被认为能够有效控制非条件性偏爱的干扰。如上所述，前测不仅可以使动物熟悉实验装置，而且其基线数值是客观解释实验结果的依据。条件性训练使药物与箱体搭配，将实验动物注射药物后限制于一侧箱体内停留固定时间，使动物在药物与箱体间建立起关联。药物可与任何一侧箱体搭配，但应保证某只动物生理盐水与药物分别搭配两侧，且整个训练过程中固定不变；此外通常将每组动物中的一半与药物搭配一侧箱体，另一半与药物搭配另一侧箱体（counterbalance）。根据药物起效时间不同，注射药物后将动物放入箱体前的预处理(pretreatment) 时间也不同，目的是保证动物进入箱体时药物已完全起效，这一方法也可以用来检测药物

7、奖赏效应的时程曲线（time course）。如果预处理时间较长，应在注射药物后将动物放回饲养笼中。训练搭配的次数不同的研究不同，常见为训练8天，其中药物训练4天，生理盐水训练4天，各自间隔进行。也有研究使用上午训练生理盐水，下午训练药物，反复数天的训练方法，这能够节省训练的时间。条件性训练的次数不等，在一定范围内，搭配的次数越多，CPP越强，但也有报道药物与生理盐水各一次训练动物即已形成CPP。测试测试与训练时程序完全相同，只是动物可以在两个箱体内自由活动，测试通常在末次条件性训练24小时后进行，记录动物在两个箱体内分别停留的时间。常见的测试时间是15分钟。核团立体定位手术标准程序将大鼠用5

8、0%戊巴比妥钠（腹腔给药）麻醉后俯卧位固定于脑立体定位仪。将大鼠头顶颅骨结缔组织刮干净，并用止血弯夹暴露颅骨，调整至前卤与后卤水平。用电钻钻3个孔，拧紧螺丝。记录前卤点的数值后将持套管臂移到将套管埋入目的脑区（中脑腹侧被盖区、伏隔核中央部）。根据Paxinos和Watson(1998)大鼠脑立体定位图谱，选择相应的坐标。套管经不锈钢螺丝和牙科水泥固定于颅骨上，不锈钢探针插入套管以保持通畅和预防感染，待水泥干燥后，将老鼠从定位仪上取下，并注射青霉素防止感染，单笼饲养，恢复7天后开始试验。核团微注射标准程序核团给药的前一天使用生理盐水进行模拟给药，目的是使大鼠熟悉第二天的操作。将微注射器的针管与软

9、管用去离子水和酒精洗净，晾干。将针管与软管内充满生理盐水，并将气泡排出。吸取药物前留一小截气泡，以免药物和生理盐水相混。药物注射到气泡进入针头前停止，以免气泡进入动物脑内。将针头插入大鼠头上埋好的管内，固定。以0.5?l /min 的速度， 推药 1分钟，并停留 1分钟。将其从大鼠头上取下，并盖好套管的帽。行为敏化操作标准程序行为敏化的步骤：适应阶段-形成阶段-撤药戒断-表达阶段 适应阶段（共3天）：目的是使所有大鼠适应箱中环境及腹腔注射过程。基础值测试前2天将所有大鼠放入自发活动箱中适应2h。基础值测试前1天及基础值测试当天均给予所有大鼠注射0.9%生理盐水（1ml/kg, i.p.）并放入箱中适应2h。基础值测试当天记录大鼠在箱中2h的自发活动路程以备分组使用。 敏化形成阶段：每天给予大鼠生理盐水（1mg/ml,i