选修1第二讲微生物的分离、培养及数量测定

1、选修1 第二讲 微生物的分离、培养及数量测定一、单项选择题1培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是()化学消毒灼烧灭菌干热灭菌紫外线灭菌高压蒸汽灭菌巴氏消毒法ABC D2下列关于微生物培养和利用的叙述不正确的是()A利用稀释涂布平板法只能分离微生物不能对微生物进行计数B接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单菌落C以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌D用大白菜腌制泡菜的过程中亚硝酸盐含量变化是先增加后减少3.分离土壤中纤维素分解菌用到的方法是（ ）稀释倒平板法 涂布平板法单细胞挑取法 选择培养分离A. B.C. D.4用来判断

2、选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照是()A未接种的选择培养基B未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D接种了的选择培养基5某实验小组欲从土壤中筛选出能分解淀粉的芽孢杆菌。下列叙述不正确的是()A采样与培养：称量1 g土样置于刚配制的液体培养基中，30振荡培养B接种：为避免培养液中菌体浓度过高，需经过系列稀释后接种C选择：所用的固体培养基，作为唯一碳源的是淀粉D筛选：将适量的碘液滴加到平板中的菌落周围，出现透明圈的说明此种菌能分解淀粉6.下列关于微生物分离和培养的有关叙述，错误的是（ ）A.微生物培养前，需对培养基进行消毒B.测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法C.

3、分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度D.分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源二、双项选择题7微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染，请分析下列操作中错误的是()A煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢B无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒C家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌D加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌8用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时()A可以用相同的培养基B都需要使用接种针进行接种C都需要在酒精灯火焰旁进行接种D都可以用来计数活菌三、非选择题9选择培养是微生物学中最强有力的技术手段之

4、一。该技术主要是利用不同微生物间生命活动特点的不同，制定环境条件，使仅适应该条件的微生物生长旺盛，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从中分离到所需的特定微生物。选择条件可根据所需分离的微生物的特点，从物理、化学、生物及综合多个方面进行选择，如温度、pH、紫外线、高压、光照、氧气、营养等许多方面。下图描述了采用选择方法从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。(1)本实验所需培养基为_，碳源为_。(2)实验原理是_。(3)重复培养的目的是_。(4)的菌落中大部分是降解_的微生物。(5)为_组，为_组，设置的目的是_。(6)采用_法，接种到的培养基中，在操作过程中为

5、防止污染应注意的事项是_。10下图为分离并统计分解纤维素的微生物的实验流程，据此回答有关问题： (1)要从富含纤维素的环境中分离纤维素分解菌，从高温热泉中寻找耐热菌，这说明_。(2)某同学根据需要，配制了纤维素分解菌的培养基如下，整个实验过程严格执行无菌操作。纤维素粉NaNO3Na2HPO4·7H2OKH2PO4MgSO4·7H2OKCl酵母膏、水解酪素5 g1 g1.2 g0.9 g0.5 g0.5 g适量如果将其中的纤维素粉换成_，菌落数_，即可说明选择培养基的作用。(3)接种微生物最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，本实验宜采用_法，原因是_。11为了探究土壤中的微

6、生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请分析回答问题：KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素琼脂1.4 g2.1 g0.2 g1 g10 g15 g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL(1)简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理：_。(2)培养基中加入尿素的目的是筛选_，这种培养基属于_培养基。(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的_和_，实验中需要振荡培养，原因是_。(4)转入固体培养基时，常采用_接种，获得单菌落后继续筛选。(5)实验结束后，

7、使用过的培养基应该进行_处理后，才能倒掉。12在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂(含氮有机化合物)在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明)。(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行_处理。(2)要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从物理性质、用途方面来看，上述培养皿中培养基的特点是_。(3)在划线培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是_或有氧条件抑制了这些细菌的生长。(4)在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的

8、氮源主要是_，有透明带菌落利用的氮源主要是_，据此可筛选出目的菌。(5)科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株A和B，然后对突变株A和B进行实验，结果如下表所示：接种的菌种一般培养基实验处理及结果A不生长添加营养物质甲，能生长B不生长添加营养物质乙，能生长AB能生长不添加营养物质甲、乙就能生长突变株A不能在一般培养基上生长的原因是_。突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可能原因是_。详解答案一、单项选择题1解析：培养基用高压蒸汽灭菌法；培养皿能耐高温，用干热灭菌法；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底灭菌的效果；实验操作者的双手可用化学试剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消

9、毒；为不破坏其营养成分，牛奶可采用巴氏消毒法。答案：A2解析：划线接种可以将菌体分散，最后得到单个菌体细胞，经过培养可以得到单个菌落；用稀释涂布平板法可以分离微生物，也可以对微生物进行计数；在泡菜的腌制过程中，开始亚硝酸盐含量增加，10天后含量开始下降；以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌。答案：A3解析：分离土壤中纤维素分解菌，先进行选择培养，增大纤维素分解菌的浓度，梯度稀释，涂布平板，培养，单细胞挑取以获得纯培养。答案：B4解析：将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上生长的菌落数目，因此，用牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。对照遵循的原

10、则是单一变量原则，所以与选择培养基一样，应进行接种培养。答案：C5解析：为了确保分离出的目的菌是从土壤中分离的，所用培养液和仪器等都要严格消毒，所以刚配制的培养基必须经高压蒸汽灭菌处理才能使用。答案：A6解析：微生物培养前，需对培养基进行灭菌，而不是消毒；测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法而一般不用活菌计数；分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度以便能从中选择出菌落数在30300间的平板进行计数；分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源。答案：A二、双项选择题7解析：无菌操作包括消毒和灭菌。需进行消毒处理的有植物的外植体及操作人员的双手等，需进行灭菌的有器皿、培养基、添加

11、剂(指示剂或染色剂)等。煮沸可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢，属于消毒；家庭制作葡萄酒时所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能灭菌。答案：CD8解析：平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基；平板划线法采用接种针进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作；纯化时，要进行无菌操作，需要在酒精灯火焰旁接种，以避免空气中的微生物混入培养基；平板划线法一般用于分离而不是用于计数。答案：AC三、非选择题9解析：选择培养又称为增殖培养，主要是利用不同微生物的生长繁殖对环境和培养基的特殊要求进行富集培养和分离。要从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物，必须根据该微生物的特点，采用以对羟基

12、苯甲酸为唯一碳源的培养基进行选择培养。设置对照实验的目的是说明通过选择培养的确得到了欲分离的目标微生物。答案：(1)选择培养基对羟基苯甲酸(2)利用以对羟基苯甲酸为唯一碳源的选择培养基，经富集培养，选择出能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物(3)增大分解对羟基苯甲酸微生物的比例(4)对羟基苯甲酸(5)对照实验说明通过富集培养的确得到了欲分离的目标微生物(6)单细胞挑取接种环在火焰上灼烧灭菌，烧红的接种环在火焰旁冷却，同时打开皿盖挑取菌落接种到试管中，并塞好棉塞，接种环在火焰上灼烧，杀灭残留物10解析：(1)因为纤维素分解菌与耐热菌有不同的生活习性，生活在不同的环境中，故要根据目的菌株对生存环境

13、的要求，到相应的环境中去寻找。(2)因为葡萄糖是能被微生物直接利用的有机小分子，所以如果将其中的纤维素粉换成葡萄糖，纤维素分解菌及其他细菌会生长繁殖得更快，故菌落数明显多于选择培养基。(3)因为稀释涂布平板法要将菌液进行一系列的梯度稀释，故该法可根据稀释体积计算每克样品中的细菌数，而平板划线法则不能这样，所以本实验宜采用稀释涂布平板法。答案：(1)根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找(2)葡萄糖明显多于选择培养基上的菌落数(3)稀释涂布平板平板划线法难以根据稀释体积计算每克样品中的细菌数11解析：尿素是培养基中的唯一氮源，因此原则上只有能够利用尿素的微生物才能够在此培养基上生长。

14、由于细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，pH升高，故在以尿素为唯一氮源的培养基中加入的酚红指示剂将变成红色；这种培养基属于选择培养基，可筛选目的菌；目的菌生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的尿素和葡萄糖；振荡培养的目的是提供氧气；固体培养基培养时的接种方法常用稀释涂布平板法或平板划线法；倒掉培养基之前应对其进行灭菌处理。答案：(1)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，pH升高，使酚红指示剂变为红色(2)目的菌选择(3)尿素葡萄糖为目的菌提供氧气(4)稀释涂布平板法(或平板划线法)(5)灭菌12 解析：(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。(2)从物理状态来看，题图培养皿中培养基属于固体培养基；从用途方面来看，该培养皿中培养基属于选择培养基。该除草剂为含氮有机化合物，降解该除草剂的细菌可以除草剂为氮源，故该培养基中除加入除草剂外，不再含有其他氮源，以选择出能降解该除草剂的细菌。(3)在以该除草剂为唯一氮源的培养基上，不能降解该除草剂的细菌(除具有固氮能力的细菌外)是不能生长的。(4)含一定量该除草剂的培养基不透明，形成透明圈是由于该除草剂