阴道细菌临床检验方法的分析与比较

1、阴道细菌临床检验方法的分析与比较摘要：目的比较三种不同检验方法对阴道细菌的阳性检出率。方法 采集木院收治的86例阴道疾病患者的阴道分泌物，分别采取细菌培养法、 革兰染色法及pcr法检验阴道分泌物，并将检验结果进行对比分析。结果 革兰染色法检验总阳性检出率为75%, pcr法检验总阳性检出率为97. 06%； pcr法检验结果与细菌培养法无统计学差异性，p>0. 05；革兰染色法检验 结果与细菌培养法冇统计学显著性差异，p<0.01； pcr法与革兰染色法冇 统计学明显性差异，p<0. 05o结论pcr检验法具有较高的阳性检出率，且 操作简便快捷，能够满足临床诊断需要，可于阴道

2、细菌临床检验工作中推 广应用。关键词：阴道细菌；细菌培养；pcr；革兰染色法正常健康女性的阴道内各定植菌群保持着相对平衡状态，当自身抵抗 力下降或者阴道内环境发生改变时，各菌群数量随z改变而出现比例失 衡，从而导致阴道炎的发生1。阴道炎是妇科临床中一种最为常见的感 染性炎症疾病，如炎症上行感染可导致异位妊娠、急慢性盆腔炎及不孕症 等严重疾病2。我院对阴道疾病患者的分泌物以3种不同的检验方法进 行检验，以分析出最具有临床适用性的检验方法，现将详细情况总结如下。1资料与方法1. 1 一般资料 以本院2013年1月3月收治的86例阴道疾病患者作为本院研究资料。年龄为2148岁，平均(28.63

3、77;4.26)岁;全部患者 均有明显阴道炎临床表现，并伴有不同程度的阴道瘙痒，阴道内均可见人 量白带分泌物。1. 2方法1.2.1样木采集采集全部患者的阴道分泌物后分别采取a-细菌培养 法、b-革兰染色法及c-pcr法进行检验。全部患者均取截石位，在无菌阴 道镜下显示宫颈，于阴道后穹窿处，以无菌棉签沾取分泌物，准备好已置 入无菌生理盐水的检验试管，将取得的分泌物移入试管中。1. 2. 2细菌培养方法 取出试管屮的阴道分泌物样本，于无菌条件下使 用无菌接种环将其接种至细菌分离专用培养基上，置入二氧化碳培养箱， 于35°c条件下孵育48 h,择取光滑、半透明、灰色的滴露状菌株依据生 化

4、鉴定标准行生化检验。1.2.3革兰染色方法 以95%乙醇溶液浸泡清洁玻片，拭干备用；取试 管屮的阴道分泌样本均匀涂于玻片上，于医用显微镜下对涂片进行检验分 析。1.2.4pcr方法 提取500 pl试管中的阴道分泌物样本放入至生理盐 水中，以12000 r/min速度离心10 min后去清除上清液，加入带有适当 碱性的裂解液，于98°c温度下加热10 min,以12000 r/min速度再次离 心5 min,取上清液制备为dna模板。进行pcr细菌检验阴性与阳性对比 时，选取与阴道分泌物dna模板相同的pcr试剂，将无添加物的dna作为 阴性组，添加了 dna模板后的pcr扩容作为阳

5、性组。将两组进行对比分析, 检查pcr的产物与扩容情况，自总体积当中取得25 ul引物、模板、缓冲液及离子水，以无菌石蜡油30 ul将其覆盖，进入至pcr循环，循环共 32 环3, pcr 循环标准参数为：95°c 5 min、94°c 1 min、58°c 1 min、 72°c 1 min,最后一环于72°c条件下延伸5 min。1.3统计学分析法3种检验方法的检验结果进行循环对比，采取x2 检验，使用spss 19.0软件进行计算；以细菌培养法检验结果为金标准， 计算革兰染色法与pcr法阳性检出率。2结果2.1检验结果以细菌培养法为检验金

6、标准，革兰染色法检验总阳性检 出率为75%, pcr法检验总阳性检出率为97.06%,见表1。2.2统计学结果pcr法检验结果与细菌培养法无统计学差异性， p>0. 05；革兰染色法检验结果与细菌培养法有统计学显著性差异，p<0.01； pcr法与革兰染色法有统计学明显性差异，p<0. 05；见表2。3讨论细菌检验是临床工作屮的一项重要内容，可为感染性疾病的诊断治疗 提供科学性指导，并且能够提高疾病传播的防控力度4。阴道炎的主要 致病原因为阴道内上皮细胞组织在阴道内环境的作用下，致细菌侵润其表 层糖原，使阴道内杆菌出现酸碱度改变经，杆菌数量异常减少，致病菌异 常增殖，从而引发

7、阴道炎5。阴道炎病起较为缓慢，初期症状不严重， 不易引起患者重视，因此明确致病菌对于疾病的冇效治疗至关重要。阴道 细菌检验是阴道疾病临床诊断的重耍方法，检验的准确度对疾病的诊断与 致病菌的确定均具有重要作用。目前临床中常用的阴道细菌检验方法有细菌培养法、pcr法及革兰染色法等。其中细菌培养法是临床公认的阴道细菌检验金标准，但细菌培养 法的检验过程较为复杂，对检验设备与环境的耍求高，不易于基层医疗单 位开展，从某种程度上说限制了其临床应用范围。革兰染色法具有操作简 便的优势，在临床屮应用广泛，但能够影响检验结果的因素较多，导致革 兰染色法在检验过程中存在着一定的误差。常见的误差原因有：染色过程

8、中的脱色不当，脱色过度可致革兰阳性菌于显微镜观察下被确定为革兰阴 性菌，脱色不足则可致检验中将革兰阴性菌判断为革兰阳性菌。因此革兰 染色法虽具有操作方面的优势，但其检验结果较不理想。pcr技术最早是 由khorana等于1971年提出的核酸体外扩增设想而逐步形成的。pcr检测 法将pcr技术的敏感性、杂交dna的特异性以及光谱学精确度等优点融合 于一体，使得pcr检测具有理想的准确度同时操作也更加简便易行。本次研究中细菌培养法的阳性检出率为79.07%,革兰染色法为 59. 30%,pcr法为76. 74%；以细菌培养法为金标准革兰染色法准确率为75%, 而pcr法的准确率高达97. 06%o

9、经统计学卡方检验，细菌培养法检验结果 与pcr无统计学差异性p>0. 05,但与革兰染色法具有统计学差异性 p<0.01，同时pcr法检验结果明显优于革兰染色法p<0. 05o充分的说明了 pcr法在阴道细菌检验中具有理想的阳性检出率，同时由于其操作简便， 检验快捷，可于阴道细菌临床检验中推广应用。参考文献：1 钟里华.156例妇女阴道细菌临床检验方法的比较分析j中国医 药指南，2013, 11 (19)： 553-5542 史跃杰99例阴道细菌的检验方法比较分析j现代预防医学，2011, 38 (14)： 2815-2817.3 吴祥如实验室对阴道细菌的两种检验方法对比j中国