蛋白芯片联合检测多种抗结核抗体

1、论文分析结核病最具威胁性的感染性疾病之一全球每年新发900万例每年死亡数约为300万我国每年新发145万例每年死亡数约为25万肺结核病诊断金标准：痰涂片找到抗酸杆菌灵敏度低、特异性差、漏诊漏治时有发生阳性 确诊肺结核；阴性 不能保证没有患肺结核（痰涂片检查是手工操作为主，具有一定的局限性：痰标本的好坏，涂片取样问题，染色剂的问题，均可导致痰涂片检查结果不准。）PPD法（结核菌素实验）并不用于临床检测结核抗体检测商业化芯片（特异度、灵敏度低）蛋白芯片稳定、高通量、高度敏感蛋白芯片：7种结核特异性抗原样品：静脉血（分离血清） 胸水、腹水、关节液（高速离心驱除纤维蛋白原等干扰成分） 1 2 3 4

2、5 6 7A Ag85A 38kD CFP10 MPT51 + + +B Ag85A 38kD CFP10 MPT51 16kD TB10.4 ESAT-6C Ag85A 38kD CFP10 MPT51 16kD TB10.4 ESAT-6D - - Blank Blank 16kD TB10.4 ESAT-6+:人类IgG-：空载体表 达的蛋白选定蛋白细胞定位设计引物构建载体、克隆纯化蛋白若患者已感染结核分枝杆菌，则体内出现相应抗体，在蛋白芯片上即显示阳性。信号检测：免疫金银染色法（胶体金葡萄球菌A蛋白探针）胶体金：特定大小的金颗粒，由于静电作用呈稳定胶体状态。胶体金葡萄球菌A蛋白探针标记

3、后：黑褐色颗粒（LM下） 大量聚集粉红色斑点（肉眼） 加入银显影液放大结果特异性吸附抗体或抗原胶体金-SPAIgG的Fc段（样品中）结核分枝杆菌特异性抗原（蛋白芯片上）胶体金葡萄球菌A蛋白探针胶体金标记葡萄球菌A蛋白探针的制备样品采集处理蛋白芯片的制备室温孵育1h、洗涤室温孵育30min、洗涤银显影液避光作用10min，洗涤晾干分析显色强度（ CanonLiDE20扫描仪）胶体金-SPAIgG的Fc段（样品中）结核分枝杆菌特异性抗原（蛋白芯片上） 1 2 3 4 5 6 7A Ag85A 38kD CFP10 MPT51 + + +B Ag85A 38kD CFP10 MPT51 16kD T

4、B10.4 ESAT-6C Ag85A 38kD CFP10 MPT51 16kD TB10.4 ESAT-6D - - Blank Blank 16kD TB10.4 ESAT-6+:人类IgG -：空载体表达的蛋白 1 2 3 4 5 6 7A Ag85A 38kD CFP10 MPT51 + + +B Ag85A 38kD CFP10 MPT51 16kD TB10.4 ESAT-6C Ag85A 38kD CFP10 MPT51 16kD TB10.4 ESAT-6D - - Blank Blank 16kD TB10.4 ESAT-6若为阴性说明该蛋白芯片不可用若为阳性说明该蛋白芯片

5、不可用胶体金SPAIgG的Fc段（样品中）结核分枝杆菌特异性抗原（蛋白芯片上） 1 2 3 4 5 6 7A Ag85A 38kD CFP10 MPT51 + + +B Ag85A 38kD CFP10 MPT51 16kD TB10.4 ESAT-6C Ag85A 38kD CFP10 MPT51 16kD TB10.4 ESAT-6D - - Blank Blank 16kD TB10.4 ESAT-6 1 2 3 4 5 6 7A Ag85A 38kD CFP10 MPT51 + + +B Ag85A 38kD CFP10 MPT51 16kD TB10.4 ESAT-6C Ag85A 38kD CFP10 MPT51 16kD TB10.4 ESAT-6D - - Blank Blank 16kD TB10.4 ESAT-6Ag85A和6kD蛋白阳性38kD和TB10.4蛋白阳性结果判断原则：7种抗原中任何2种或2中以上抗原阳性则判定为阳性仅1种抗原阳性判定为可疑7中抗原均为阴性判定为阴性本实验基于结核分枝杆菌抗原的检测蛋白芯片具有较高的灵敏度和特异度，在