电化学发光原理简介

1、电化学发光免疫分析技术简介演讲人：赵志德演讲时间：2010-3-18内容标记免疫的发展简介电化学发光技术原理电化学发光技术特点内容标记免疫的发展简介电化学发光技术原理电化学发光技术特点免疫测定免疫测定的发展和应用标记免疫测定（ng-pg）电化学发光免疫测定法 化学发光免疫测定法 荧光免疫测定法V酶免疫测定法 放射免疫测定法免疫浊度测定（曲-ng）免疫胶乳浊度测定法V免疫透射浊度测定法V免疫速率散射浊度测定法标记免疫技术的发展Innovation酶免荧光免疫化学发光EIA/FIA/LIA1960，SstaWe labeled components放射免疫RIA 二the bc»5i51

2、97080，S电化学发光ECLextremely stable regentsfast reaction time?.,high sensitivityr large measurement range k all an-alyts mcl.DNA-detection鳥 翠詢 homogoneQiJS Time assay methods20009S内容标记免疫的发展简介电化学发光技术原理 电化学发光技术特点电化学发光免疫分析(ECLIA)Eletrochemiluminescence immunoassayTrends in immunodiagnosticsHomogeneous andi

3、mmunoassays solid phaseLiquid phaseradioimmun oassaysPolyclonal antibodiesManualEvolution in antibody technology and use of monoclonal antibodies 什么是电化学发光免疫分析(ECLIA) ?心ECL是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应， 是电化学和化学发光两个过程的完美结合电化学发光免疫测定是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合 的产物，是目前非常先进的标记免疫测定技术。ELECTROCHEMILUMINESCENCEIMMUNOASSAY

4、亲和链霉素生物素磁性微粒子钉标记物专利的电化学发光检测技术 免疫复合物Elecsys® - the basic immuno assay principleAntige n Antibody Peptide Nucleic acid Paramagnetic microparticle-SB-AgAb complex labelled with Ru(bpy)3+2+反应时间：18分钟电化学发光技术主要技术三联毗睫钉标记技术链霉亲和素一生物素技术磁性微粒子技术电启动的化学发光反应专利的电化学发光检测技术钉复合物标记A ruthenium complex is used as the

5、ECL1 label三联毗噪钉N轻基琥珀酰胺(NHS)酯三联毗叮钉复合物Ru（bp）3+2+ 标记；水溶性小分子，免疫损伤小；结构稳定，受干扰影响小；与三丙胺（发光电子供体）共同 参与氧化还原反应；应用广泛（激素，核酸等）电化学发光具有广泛的检测空间）磁性微粒子 A亲和素生物素令抗原探针¥钉标记物电化学发光技术主要技术三联毗喘钉标记技术链霉亲和素一生物素技术磁性微粒子技术电启动的化学发光反应专利的电化学发光检测技术 共价配合物The Streptavidin-Biotin solid phaseTetrameric ProteinStreptavidin *4 Biotins Str

6、eptavidin14 Biotins严 mol/L生物素一链霉亲和素耦联体系1分子亲和素+4分子生物素结合力强，特异性高提高检测灵敏度电化学发光技术主要技术三联毗喘钉标记技术链霉亲和素一生物素技术磁性微粒子技术电启动的化学发光反应专利的电化学发光检测技术磁:性颗粒载彳*直径仅2.8 um,体积小，悬浮于 液体中，构成均一，稳定的类均 相试剂凹凸不平，增强包被效率磁性吸引，易于AgAb复合物的 结合分离反应前仪器自动混匀电化学发光技术主要技术三联毗喘钉标记技术链霉亲和素一生物素技术磁性微粒子技术电启动的化学发光反应电极表面的电化学发光反应The ECL? reaction at the ele

7、ctrode surface'Electrochemiluminescence'ElectrochemiluminescenceTPATPfRu(bpy)習e-Ru(bpy)習 ground 1 stateexcited statePhoton (620 nm)'Electrochemiluminescence电化学发光信号的检测稳定的检测窗口ECL? signal generationECL* intensity counts350 000300 000applied voltage mV 25002000250 000200 000150 0001500100010

8、0 00050 000oJqS0.00 0.20500r0.400.600.801.001.20 timesec"Electrochemiluminescence电化学发光免疫反应全过程The measuring cell电化学发光免疫反应过程-1.反应杯的标记免疫反应Elecsys® - the basic immunoassay principle磁性微粒子钉标记物An tige nAntibody Peptide Nucleic acidElecsys HIV Combi图解电极清洗液电化学发光免疫反应过程-2.测量池中的ECL反应光电倍增管电极工作电极磁铁电化学发光

9、免疫反应过程-2.测量池中的ECL反应电化学发光免疫反应过程3.电极表面的电化学发光反应The ECL* reaction at the electrode surfaceTPA"TPARu(bpy)習Ru(bpy)潜 ground statePhoton (620 nm)Ru(bpy)習 excited state内容标记免疫的发展简介电化学发光技术原理 电化学发光技术特点电化学发光技术特点试剂稳定测量范围宽，灵敏度高特异性优异检测菜单丰富准确性好，精密度高操作简便试剂稳定性货架期18个月，开封后3个月Stability of Elecsys reagents such as TS

10、HEven under stress conditions (3 weeks at 353C) the recovery is excellent (- approx. 5%) without recalibration.Even under stress conditions (3 weeks at 353C) the recovery is excellent (- approx. 5%) without recalibration.Sign al (counts)6.0x1065.0x1064.0x13.0x1062.0x1061.0x10601 week 22°C Fresh

11、 reagents 3 weeks 35°C (stress model)10152025303540Concentration n/U/mlIEven under stress conditions (3 weeks at 353C) the recovery is excellent (- approx. 5%) without recalibration.电化学发光技术特点试剂稳定测量范围宽，灵敏度高特异性优异检测菜单丰富准确性好，精密度高操作简便检测范围宽，减少稀释Enhanced sensitivity in combination with broad measuring

12、 range9 min0.0010.010.11 -10000IU/ml1 1(10100100010 000TSH0.0018 min0.01-100 HlU/mlmionmnn in non10100100010 0000.07-10000.010.001110100100010 000CEA 18 min高灵敏度可用于感染的早期检Elecsys HBsAg(qorj gKhun!®c-a_«s- 3 OS 卄 Q>=wo<iOI.E1W2I»?2KLO®lfl-ooz畸轴厂成J C/ffJ MicnM. 2003f易川站心第四代HIV同

13、时检测HIV P24抗原和抗HIV抗体的试剂 缩短窗口期，提高检测安全性HIV RNA (Plasma)days after infection电化学发光技术特点试剂稳定测量范围宽，灵敏度高特异性优异检测菜单丰富准确性好，精密度高操作简便cut-offs/co-ratiosAAou nbEu.Elecsys® Anti-HCV 献血员中的特异性: 99. 71%Elecsys® HIV combi 献血员中的特异性: 99. 74%sa)一 dEES jo ozFrequency distribution in blood donorso o o o Q o5 4o0030

14、0200Elecsys® HIV combi 临床特异性优异（常规标本） 特异性达到99. 63%No of samplesElecsys HIV combi initially reactive COI>1Elecsys HIV combi repeatedly reactiveCOI>1WB confirmed positive/ IndeterminateBlood donors| 84063129.6/4.Unselected samples from daily routine| 3810333417/3Dialysis patients| 242 2 . 2

15、.0 Pregnant women1 337 n 0 Elecsys® Anti-HCV 对于各种基因型的检出in1C51 (lb2.3 63/3345/4542/4270/7G13/1311/11mtHCV$Genotypef >77/b-2 a/b/c 厂.3a/b禺、3 a/c/d/f/h6/6 aTotal:la, lb, 2No of samples detected positiveElecsys® HIV combi 检测HN变异 识别所有基因型和变异株HIV-1 group M subtypesA, A/B, A/C, A/C/A, A/D. A/E,

16、 A/E/C, A/G, A/G/A, CRF02-AGB, B/CC, C/A, C/EDCRF01 AE (r=E), E/A/E, E/C, E/DF, F/BG. G/AHJCRF11HIV-1 group 0HIV-2244/244电化学发光技术特点试剂稳定测量范围宽，灵敏度高特异性优异检测菜单丰富准确性好，精密度高操作简便丰富的检测菜单甲状腺功能 Anti-TG Anti-TPO Anti-TSHR FT3 FT4 T3 T4 T-Uptake TG TSH贫血 Ferriti n Vitamin B12 FolateRBC Folate激素ACTHC-Peptide Cortis

17、olDHEA-S EstradiolFSH HCG+B InsulinLHProgester one Prolacti n SHBG Testoter one孕早期唐氏筛査 Free B-HCG PAPP-A肿瘤标志物AFPCA 12511CA 15-3CA 19-9CA 72-4CEACYFRA 21-1Free PSANSES-100 Total PSA軽igE心肌标志物CK-MBDigoxi n Digitoxin Myoglobin NT-proBNP Trop onin T骨标志物 B-Crosslaps 25-(OH)Vit.d3Intact PTH PTH STAT N-MID

18、Osteocalcin Total-P1NP传染性疾病Anti-HAV Anti-HAV IgM Anti-HBc Anti-HBc IgM Anti-Hbe Anti-HBs HBe Ag HBs Ag HBs Ag confirmatory An ti-HCV HIV Antigen HIV Combi HIV Ag confirmatory Rubella IgG/IgM Toxo IgG/IgM CMV IgG /IgM自身免疫 An ti-CCP脓毒血症IL-6 BRAHMSPCT先兆子痫风 险评估SFLT1PIGF电化学发光技术特点试剂稳定测量范围宽，灵敏度高特异性优异检测菜单丰富准确性好，精密度高操作简便准确可靠的检测结果：可溯源性级校准品二稚品 士作枝准品definition of Slunit 匚商业校准品商业校准品Result呂校淮品工作校准品Result参考方法参考测量步骤厂商选择性的测量步骤厂商标准测量步骤用