黄花蒿中黄酮类成分的分离与鉴定研究分析论文-精品

1、 黄花蒿中黄酮类成分的分离与鉴定卜俊恒内蒙古医学院 呼和浩特010059摘 要 目的:在对中药黄花蒿进行了活性研究之后建立了一种高效液相色谱-串联核磁共振同时测定中药黄花蒿中黄酮类成分的方法.使用Phenomenex Luna,C18色谱柱,流动相为甲醇?水溶液6733,在检测波长230nm下,分离出黄花蒿有效成分组中4个主要的成分,这些成分分别属于生物萜类、黄酮类;并采用核磁共振方法鉴定其结构。结果显示:本实验共鉴定出四种成分,分别是:猫眼草黄素?槲皮万寿菊素?猫眼草酚?青蒿酸。对于上溯有效成分进行鉴定,能为更好地阐明中药黄花蒿的有效成分及作用机制提供依据。关键词 黄花蒿;黄酮类化合物;高效

2、液相色谱-串联核磁共振 黄花篙又名青篙,为菊科植物黄花篙Artemisiaanna的干燥地上部分;具有清热解暑、除蒸、截疟等功效1。20世纪70年代我国学者2从中分离得到的青蒿素,是含有过氧基团的倍半萜内酯类化合物,治疗恶性脑疟及抗氯喹株疟疾等疾病具有高效、速效、低毒等特点,是重要的抗疟药物3。对于黄花蒿的研究目前主要是从植物中提取分离青蒿素,由于各种黄花蒿中的有效成分含量差别很大,有些含量很低,药用价值不大4。且如果黄花蒿中的有效成分含量低于5,就没有工业提取价值。目前主要的测定方法有结晶称重法、TLC法、HPLC法3等,由于青蒿素只有末端吸收,因此需经柱前衍生后才能测定5,也有人采用HPL

3、C-ELSD方法测定6。黄花蒿ArtemisiaannuaL.的主要活性成分为青蒿素,含量较低,而其中的某些黄酮类化合物可促进青蒿素与血晶素的反,增强青蒿素的抗疟性。对于黄花蒿的研究,长期以来的重点都集中于其抗疟活性成分青蒿素及其类似物上,对其中含量较高的黄酮类化合物的研究尚未见报道。作者提出高效液相色谱-串联核磁共振方法,可同时定性、定量分析青蒿素和黄酮类化合物。 1 实验部分1.1仪器与材料高效液相色谱-串联核磁共振日本岛津?8A二元泵,核磁共振检测器,色谱柱填料:PRC?ODS 色谱柱内径:2*25cm。药材自采; 甲醇为色谱纯;酸度计DELTA320上海有限公司;纯水机:上海医疗仪器厂

4、水为二次蒸馏水。2 样品处理药材混合后粉碎,用乙醇?水55:45加热回流提取3次,残渣用乙醇加热回流提取3次,合并提取液,回收溶剂,得到总黄酮。3 实验条件色谱柱2*25cm;柱温25,流速0. 2mL/min。进样量5L。流动相:甲醇?水(67:33)检测波长230nm,在此检测波长之下理论塔板数大于2000。分离度符合要求。2 结果2. 1 色谱条件的优化1. 1 色谱柱使用SymmetryShieldTM RP18色谱柱150mm×3.9mm, ID5m得到的色谱图中峰数较少,且峰较宽;换用Phneomnexe Luna C18色谱柱250mm×4. 6mm, ID5

5、m后峰数明显增多,且峰较尖锐.1. 2 检测波测定样品溶液的光谱图,提取从250350nm的谱图,结果表明:在230mn波长为其最适波长。能够;兼顾各种种生物碱的分离完全且分析方法的灵敏度高,样品的整个色谱图图形良好.2.1. 3 柱温设置为20时发现温度受外界影响较大,基线有时漂移且重复性不好;适当提高柱温至25能够克服以上缺陷,基线平稳且使分离较好.2.1. 4 甲醇与水的比例分别采用了甲醇-水溶液为5050、6238、6733、7030、7525不同比例的流动相,分析样品溶液.结果表明:甲醇-水溶液比例为6733时,整个色谱图中大部分峰的峰形和分离度都较好;甲醇比例减小,峰形变宽保留时间

6、延长并出现大包;甲醇比例增大,峰形变窄保留时间缩短,且出现部分重叠.故选择甲醇-水溶液6733.2.2 核磁法鉴定了其中的7个主要成分。见下图(?) 图一 成分的化学式 猫眼草黄素 Chryssplenetin 1 槲皮万寿菊素 Quercetagetin-3,7,34 -teramethylether 2 猫眼草酚 Chqysosplenol D 3 青蒿酸 Artemisinic acid 4 图(一):1为猫眼草黄素;2为槲皮万寿菊素;3为猫眼草酚;4为青蒿乙素化合物1:淡黄色结晶丙酮,1H-NMR600 MHz,DMSO-d6:6?921H,s,H-8、7?661H, d,J 2?0

7、Hz,H-2、6?94 1H, d,J8?5 Hz,H-5、7?611H,dd,J8?5、2?0 Hz,H-6、12?62 5 - OH、9?95 4- OH、3?91-OCH3、3?72?OCH3、3?80?OCH3、3?86?OCH3; 以上数据与文献7中发表的光谱数据对照,基本一致,故鉴定为:猫眼草黄素(chrysoplenetin)。化合物2:黄色结晶丙酮,1H-NMR600 MHz, CDCl3: 12?60 5-OH、5?73 6-OH、7?721H,dd,J8?6、1?8 Hz、H-6、7?681H, d,J 1?8 Hz,H-2、6?96 1H, d,J8?6 Hz,H-5、6

8、?511H,s,H-8、4?004-OCH3、3?967-OCH3、3?923-OCH3、3?883-OCH3; 以上数据与文献8-10中发表的光谱数据对照,基本一致,故鉴定为:槲皮万寿菊素(quercetagetin-3,7,3,4-tetramethyl ether)。化合物3:黄色结晶丙酮, mp 220 222。1H-NMR300 MHz,DMSO-d6:12?655-OH、9?792H,3-OH、4-OH、7?591H,d,J2?1 Hz,H-2、7?471H,dd,J8?4、2?1 Hz,H-6、6?891H,d,J8?4,H-5、6?861H,s,H-8、3?91 7-OCH3、

9、3?79 3-OCH3、3?726-OCH3; 以上数据与文献8,11中发表的光谱数据对照,基本一致,故鉴定为:猫眼草酚chrysosplenol D5,3,4-trihydroxy-3,6,7-trimethoxyflavone。化合物4白色结晶丙酮,质量分数为1%的香草醛浓硫酸溶液显蓝色。1H-NMR300 MHz,CDCl3:1?491H,s,H-1、1?741H,m,H-2a、1?531H,m,H-2b、1?711H,m,H-3a、1?911H,m,H-3b、2?691H,s,H-5、2?741H,ddd,H-7、2?071H,dddd,H-8a、1?411H,s,H-8、1?271H

10、,m,H-9a、1?881H,m,H-9b、1?501H,br?d,H-10、1H,d,H-13b0.983H,d,H-141.343H,s,H-15;13C-NMR75MHz,CDCl3:43?51C-1,CH16?09C-2,CH2、24?18C-3,CH2、58?39C-4,C、58?47C-5,CH、80?89C-6,C、52?56C-7,CH、21?52C-8,CH2、33?72C-9,CH2、30?44C-10,CH、138?61C-11,C、169?70C-12,C、117?24C-13,CH2、18?32C-14,CH3、22?51C-15,CH3。以上数据与文献12中发表的光

11、谱数据对照,基本一致,确定该化合物为青蒿素B。结论 采用高效液相-核磁共振联用法测定黄花蒿中黄酮类化学成分,在本实验条件下,各黄酮化合物均得到了很好的核磁信号,样品分析结果良好。为该中药的质量控制提供了科学依据.总之,建立了一个有效地控制黄花蒿药材质量的快速准确的方法.参考文献 1国家药典委员会编.中华人民共和国药典一部,北京:化学工业出版社2田5:137一138 2 青蒿素结构研究协作组.一种新的倍半萜内酯J.科学通报,1977,3:142. 3 四川省中药研究所药理室.青蒿素的药理研究J.四川医学,1980,1:33-36.4 张萍,张子忠.山东引种黄花蒿青蒿素含量分析J.山东中医药大学学

12、报,2001,253:229-230.5夏铮铮,李劲,张小松.黄花蒿中青蒿素含量测定方法的研究进展J.西部药学,2006,31:40-41.6刘丽芳,王茜,李海燕,等.柱前衍生RP-HPLC法测定青蒿中青蒿素的含量J.中国野生植物资源,2004,236:60-62.7 MARCO JA,BARBERA O,ROORIGUEZ S,et al.Flavonoids and other phenolics fromArtemisia his-panicaJ. Phytochemistry, 1988, 27 10: 3155 -3159.8 DJERMANOVIC M,JOKIC A,MLADEN

13、OVIE S,etal.Querceagetin 6,7,3,4-tetramethyl ether:a newflavonol fromArtemisia annuaJ.Phytochemistry,1975,14:1873.9 HORIE T,KAWAMURA Y,YAMADA T.Revised structure of a natual flavone fromArtemsia lanata J.Phytochemistry,1989,2810:2869-2871.10 BROWNGD,LIANG GY,SY LK.Terpenoids from the seeds ofArtemis

14、ia annuaJ. Phytochemistry, 2003,64:303-323.11 RODRIGUEZ E,CARMAN NJ,VELDE GV,et alMethoxylated flavonoids fromArtemisiaJ. Phytochem-istry,1972,11:3509-351412 AGRAWAL PK,VISHWAKARMA RA,JAIN DC,etal. High field NMR spectroscopic studies of arteannuinB and a reappraisal of the structure of arteannuin C

15、 J.Phytoch- emistry,1991,3010:3469-3471.Flavonoids ingredients in artemisia annua of separation and identification Junheng BuInnermogolia Medical College HohhotABSTRACTObjective: to pick on the activity of artemisia annua medicine research established a by reverse phase HPLC simultaneously determina

16、tion of TCM artemisia annua flavonoid content Methods. Use the Phenomenex using C18 column and mobile phase solution for methanol - 67:33 and in 230nm detected wavelength, effectively separated from artemisia annua into groups of seven main components are biological terpenoids, flavonoids, And the m

17、ethod of using nuclear magnetic resonance NMR. The experimental results show that: the seven components were identified. CaoHuang respectively are: the cat 's-eye, quercetin marigold grass phenol, cat's eye, conventional acid, flavin artemisia, conventional b. For effective components, began

18、 identification for better clarify artemisia annua effective ingredients of traditional mechanism and provides the basis.Keywords: artemisia annua, flavonoids, high performance liquid chromatography HPLC - series nuclear magnetic resonance NMR致谢 本研究及学位论文是在我的老师朱晓伟的亲切关怀和悉心指导下完成的,他严肃地科学态度,严谨的治学精神,精益求精的工作作风,深深地感