水产动物生理学实验

1、水产动物生理学实验水产动物生理学实验实验一实验一生理学实验及常用仪器介生理学实验及常用仪器介绍绍兴奋与兴奋性的观察及分析兴奋与兴奋性的观察及分析【目的要求【目的要求】1 1通过生理学实验及常用仪器介绍、了解生理学实验通过生理学实验及常用仪器介绍、了解生理学实验的基本任务、内容和方法，理解生理学既是一门理的基本任务、内容和方法，理解生理学既是一门理论科学、又是一门实验科学的重要意义。论科学、又是一门实验科学的重要意义。2 2学习蛙类动物双毁髓的实验方法学习蛙类动物双毁髓的实验方法, ,掌握坐骨神经掌握坐骨神经- -腓腓肠肌标本的制备方法。肠肌标本的制备方法。3 3通过对组织兴奋和兴奋性的实验观察

2、，加深对兴奋通过对组织兴奋和兴奋性的实验观察，加深对兴奋与兴奋性概念的理解。要求学会观察神经与兴奋性概念的理解。要求学会观察神经肌肉标肌肉标本的兴奋与兴奋性，会分析兴奋与兴奋性的区别及本的兴奋与兴奋性，会分析兴奋与兴奋性的区别及相关联系。相关联系。【方法与步骤【方法与步骤】一、生理学实验基本原理及仪器介绍一、生理学实验基本原理及仪器介绍常用的生物机能实验系统常用的生物机能实验系统张力换能器张力换能器神经屏蔽盒神经屏蔽盒血球计数板血球计数板 二、坐骨神经腓肠肌标本的制备二、坐骨神经腓肠肌标本的制备 三、组织兴奋和兴奋性的实验观察三、组织兴奋和兴奋性的实验观察o 依次分别用食盐(化学刺激)、热玻棒

3、(热剌激），锌铜弓（电化学刺激），以及小镊子夹捏(机械刺激)坐骨神经的中枢端观察其反应。再依次重复用刺激直接刺激腓肠肌，观察其反应 实验二、骨骼肌的单收缩、复合收缩与强实验二、骨骼肌的单收缩、复合收缩与强直收缩直收缩 【目的要求【目的要求】1了解骨骼肌收缩的总和现象。了解骨骼肌收缩的总和现象。2观察不同频率的阈上刺激引起肌肉收缩形观察不同频率的阈上刺激引起肌肉收缩形式的改变。式的改变。【基本原理【基本原理】o 两个同等强度的阈上刺激，相继作用于神经-肌肉标本，如果刺激间隔大于单收缩的时程，肌肉则出现两个分离的单收缩；o 如果刺激间隔小于单收缩的时程，则出现两个收缩反应的重叠，称为收缩的总和。o

4、 当同等强度的连续阈上刺激作用于标本时，出现多个收缩反应的融合，称为强直收缩。后一收缩发生在前一收缩的舒张期时，称为不完全强直收。后一收缩发生在前一收缩的收缩期时，各自的收缩完全融合，肌肉处于持续的收缩状态，称为完全强直收缩。【方法与步骤【方法与步骤】1按实验按实验1的方法制备坐骨神的方法制备坐骨神经经-腓肠肌标本并将其固定在腓肠肌标本并将其固定在肌槽上。以单脉冲刺激神经，肌槽上。以单脉冲刺激神经，记录肌肉收缩曲线（图记录肌肉收缩曲线（图2-12）。）。2刺激强度不变，以刺激强度不变，以1s的间隔的间隔输出两个单脉冲刺激标本，输出两个单脉冲刺激标本，肌肉则出现肌肉则出现两个分离的单收缩，记录收

5、缩曲两个分离的单收缩，记录收缩曲线。线。3用同等刺激强度，改变刺激用同等刺激强度，改变刺激间隔，刺激标本，记录肌肉间隔，刺激标本，记录肌肉收缩曲线。收缩曲线。实验三、神经干动作电位观察及神经纤维实验三、神经干动作电位观察及神经纤维兴奋传导速度的测定兴奋传导速度的测定 【目的要求【目的要求】1学习电生理仪的使用方法。学习电生理仪的使用方法。2观察蟾蜍坐骨神经动作电位的基本波形，观察蟾蜍坐骨神经动作电位的基本波形，并了解其产生的基本原理。并了解其产生的基本原理。【基本原理【基本原理】o 神经或肌肉发生兴奋时，兴奋部位发生电位变化，这种可扩布性的电位变化即为动作电位。神经的动作电位是神经兴奋的客观指

6、标。o 如将两个引导电极分别置于正常完整的神经干表面，动作电位先后通过两个引导电极，可引导出两个方向相反的电位偏转，称为双相动作电位。o 如将两引导电极之间的神经麻醉或损伤，动作电位只通过第一个电极引导出来，它只有一个方向的电位偏转，称为单相动作电位。【方法与步骤【方法与步骤】1制备蟾蜍坐骨神经干标本，神经干尽可能分离得长些。在制备过程中，要把神经周围的结缔组织分离干净，但勿损伤神经标本。2连接实验装置： 连接电子刺激器、刺激隔离器、神经屏蔽盒和示波器。注意：各仪器应妥善接地，各仪器的连接应接触良好。3调节刺激器“强度” ，使其从0 逐渐增加。仔细观察其波形。4根据扫描速度，测量从刺激伪迹至两

7、个动作电位起始点之间的时间差（t）。5测量神经屏蔽盒内两对电极之间的距离（s），按公式v=s/t(m/s）计算神经冲动传导的速度。实验四、几种动物血细胞计数和血红蛋白实验四、几种动物血细胞计数和血红蛋白的测定的测定 【目的要求【目的要求】1、学习红细胞、白细胞计数的方法。、学习红细胞、白细胞计数的方法。2、掌握比色法测定血红蛋白含量的方法。、掌握比色法测定血红蛋白含量的方法。3、认识物种间血液学差异。、认识物种间血液学差异。【基本原理【基本原理】o 血液中血细胞数的计算是使用血细胞计数板。而且要用适当的溶液将血液稀释后，放入计数板的计数室内，在显微镜下计算一定容积血液稀释液中的血细胞个数，再将

8、所得结果换算为1ul 血液中的血细胞个数。o 测定血红蛋白含量的方法很多，实验常用比色法。其原理是在一定量的血液中，血红蛋白经少量盐酸的作用，使亚铁血红素变成高铁血红素，呈现较稳定的棕色。【方法与步骤【方法与步骤】o 测定血红蛋白含量测定血红蛋白含量1用滴管加0.1mol/LHCl 于血红蛋白稀释管内，到刻度10 处。2用血红蛋白吸管的尖端接触血滴，吸血至刻度20mm3 处（0.02ml）。3摇匀或用小玻璃棒搅匀后，放置10min，使盐酸与血红蛋白充分作用。4用滴管向稀释管内逐滴加入蒸馏水，直至颜色与标准玻璃色柱相同为止。稀释管上液面的刻度读数即为每100ml 血液血红蛋白的克数。红细胞、白细

9、胞计数红细胞、白细胞计数1采血及稀释用吸管分别吸取0.38ml 白细胞稀释液和3.98ml 红细胞稀释液放入试管内备用。2、用血红蛋白吸血管吸血至刻度20ul 处，将血液吹入分别盛有血细胞稀释液的试管内3计数血液稀释液滴入计数室后，须静置2-3min，然后在低倍显微镜下计数。计数白细胞时，数四角4 个大方格的白细胞总数；计数红细胞时，数中央大方格的四角的4 个中方格和中央的一个中方格共5 个中方格的红细胞总数。4计算白细胞数：将4 个大方格内数得白细胞总数乘以50，即得每mm3 血内的白细胞总数红细胞数：将中央大方格中的5 个中方格内数得的红细胞总数乘以10，000，即得每mm3 血内红细胞总

10、数。实验五、蛙心起搏点观察，期前收缩与代实验五、蛙心起搏点观察，期前收缩与代偿间歇偿间歇 【目的要求【目的要求】1学习暴露蛙类心脏的方法，熟悉心脏的结学习暴露蛙类心脏的方法，熟悉心脏的结构，观察心脏各部分自动节律性活动的时相构，观察心脏各部分自动节律性活动的时相及频率。及频率。2观察心室在收缩活动的不同时期对额外刺观察心室在收缩活动的不同时期对额外刺激的反应，了解心肌兴奋性的变化及代偿间激的反应，了解心肌兴奋性的变化及代偿间歇的发生机理。歇的发生机理。【基本原理【基本原理】o 两栖类动物的心脏为两心房、一心室。正常情况下，心脏的活动节律服从静脉窦的节律，其活动顺序为：静脉窦、心房、心室。这种有

11、节律的活动可以用机械方法或通过换能器记录下来，称为心搏曲线。o 心肌的机能特征之一是绝对不应期几乎占整个收缩期。在心室舒张期给以单个阈上刺激，则产生一次正常节律以外的收缩反应，称为期外收缩。在期外收缩之后，就会出现一个较长时间的间歇期，称为代偿间歇。【方法与步骤【方法与步骤】蛙心起搏点观察蛙心起搏点观察1暴露心脏，观察心脏的结构2观察心搏过程：仔细观察静脉窦、心房及心室收缩的顺序和频率。分别进行斯氏第一结扎和斯氏第二结扎。待心室恢复搏动后，计数每分钟心脏各部分的搏动次数。3记录心搏曲线仔细观察曲线各波与心脏各部位活动的关系。期前收缩与代偿间歇期前收缩与代偿间歇1将蟾蜍双毁髓后暴露心脏，背位固定

12、于蛙板上。用系线的蛙心夹夹住少许心尖肌肉，将系线固定在通用杠杆上。连接张力换能器和生物机能实验系统。2开动生物机能实验系统，记录正常心搏曲线作为对照。3选择刚能引起心室发生期外收缩的刺激强度（于心室舒张期调试），分别在心室收缩的收缩期和舒张期给予单个刺激，观察心搏曲线有无变化。4以同等刺激强度，分别在心室舒张的早期、中期和晚期给予单个刺激，观察心搏曲线的变化。装置图和收缩波型装置图和收缩波型实验六、实验六、蛙心灌流及心血管活动的调节蛙心灌流及心血管活动的调节 【目的要求【目的要求】1学习斯氏离体蛙心灌流法。学习斯氏离体蛙心灌流法。2观察观察Na+、K+、Ca2+及肾上腺素、及肾上腺素、乙酰胆碱

13、等对离体心脏活动的影响。乙酰胆碱等对离体心脏活动的影响。【基本原理【基本原理】o 心肌具有自动节律性收缩活动的特性，可用人工灌流的方法研究心脏活动的规律及其特点，还可通过改变灌流液的成分或加入某些药物来观察其对心脏活动的影响。【方法与步骤【方法与步骤】1离体蛙心的制备：斯氏蛙心插管法取一只蟾蜍或蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按 暴露心脏。将盛有少量任氏液（内加入一滴肝素抗凝）的斯氏蛙心套管由此插入动脉圆锥。再将结线固定在套管的小玻璃钩上。用任氏液反复冲洗心室内余血，使灌流液不再有血液。保持套管内液面高度恒定（1.52cm），即可进行实验。2实验观察(1)开动系统记录正常心搏曲线。(2)向套管内加

14、各种药物，观察心搏曲线的频率及振幅的变化。每次当曲线出现明显变化时，立即吸去套管中的灌流液（作好冲洗标记），用新鲜任氏液清洗23 次，待心搏恢复正常。实验七、消化道运动的观察及离体小肠平实验七、消化道运动的观察及离体小肠平滑肌的特性滑肌的特性 【目的要求【目的要求】1观察消化道的在体运动观察消化道的在体运动2了解哺乳动物离体肠段的一般生理特了解哺乳动物离体肠段的一般生理特性。性。3学习离体器官灌流的一种方法。学习离体器官灌流的一种方法。【基本原理【基本原理】o 哺乳动物的胃肠平滑肌具有自动节律性收缩、伸展性、紧张性和对理化刺激较敏感等生理特性。这些特性对维持消化管一定压力，保持胃肠等一定的形态

15、和位置，适合于消化管内容物的理化变化具有生理意义。在整体内受中枢神经系统和体液因素的调节。本实验观察及记录哺乳动物等离体肠段的一般特性及在一些药物作用下引起的各种效应。【方法与步骤【方法与步骤】1平滑肌离体灌流恒温装置、张力换能器和记录仪。平滑肌离体灌流恒温装置、张力换能器和记录仪。2水浴里的水恒温水浴里的水恒温37，营养管内充满台氏液。，营养管内充满台氏液。3用铁锤击兔或大白鼠的头部，昏迷后，立即剖开腹腔，取出十用铁锤击兔或大白鼠的头部，昏迷后，立即剖开腹腔，取出十二指肠至结肠间的肠段，剪成约二指肠至结肠间的肠段，剪成约34cm小段，放入室温台氏小段，放入室温台氏液内轻轻冲洗，以除去肠的内容

16、物。边洗边通入液内轻轻冲洗，以除去肠的内容物。边洗边通入O2，把肠段，把肠段夹入另一盛有新鲜台氏液的培养皿内，继续通夹入另一盛有新鲜台氏液的培养皿内，继续通O2备用。备用。4营养管内的溶液保持营养管内的溶液保持37，然后取出一小段肠，用缝针将肠的，然后取出一小段肠，用缝针将肠的一端穿线结扎（只结扎半边肠腔）。结扎线系于通用杠杆或张一端穿线结扎（只结扎半边肠腔）。结扎线系于通用杠杆或张力换能器上，肠的另一端则穿入一不锈钢的力换能器上，肠的另一端则穿入一不锈钢的S形小钩，把小钩形小钩，把小钩系于营养管底部的半月形弯钩上，使肠段完全浸浴在台氏液中，系于营养管底部的半月形弯钩上，使肠段完全浸浴在台氏液中，并立即通入并立即通入O2。调节杠杆或换能器的灵敏度后，让肠段稳定。调节杠杆或换能器的灵敏度后，让肠段稳定20min，便可以描记其活动曲线。，便可以描记其活动曲线。5依次加入各种药物，观察和记录肠段运动的变化。依次加入各种药物，观察和记录肠段运动的变化。装置图装置图实验八、胰岛素惊厥实验八、胰岛素惊厥 【目的要求【目的要求】了解胰岛素调节血糖水平的机能。了解胰岛素调节血糖水平的机能。【基本原理【基本原理】o 胰岛素是调节机体血糖的激素之一，当胰岛素是调