磷酸氟达拉滨的合成、工艺研究及质量控制.doc

1、摘要磷酸氟达拉滨为阿糖腺苷的氟化核苷酸衍生物，某些药理作用与阿糖胞苷相似。阿糖腺苷很快被腺苷脱氨酶作用而失活，而本品却不被这种酶灭活.口服后，加磷酸化成为活性代谢物2-氟-阿糖腺苷二、三磷酸盐，可抑制DNA合成。本文主要以2,6-二氨基嘌呤和2，3,5-三O-苄基1-O-对硝基苯甲酰基D-阿拉伯呋喃糖为原料经过多步反应得到目标产物磷酸氟达拉滨.合成反应总收率为3。54.5%。关键词:磷酸氟达拉滨; 2，6-二氨基嘌呤； 合成 目 录 一、绪论5（一）临床分析、病因及治疗的概况5二、磷酸氟达拉滨的制备6（一)氨基保护反应9（二）糖成环、甲基化反应10(三)糖羟基保护反应11（四）糖1-去甲基反应

2、12（五）糖1羟基上对硝基苯甲酸保护反应14（六）糖氯代反应15（七)缩合反应16（八）氨基脱保护反应18（九）2氟取代反应19(十）脱苄基保护反应21（十一）合成磷酸氟达拉滨反应22（十二)磷酸氟达拉滨精制24三、磷酸氟达拉滨工艺的研究24（一)仪器24(二)方法与结果26四、生产过程中对质量的控制28(一）薄层色谱法28(二)高效液相色谱法28五、生产质量的要求30六、结论36七、参考文献38引言磷酸氟达拉滨,英文名为Fludarabine,其化学名称为9D阿拉伯酸呋喃糖2氟腺嘌呤5磷酸盐。CAS登录号为【75607-67-9】，分子量为365.2.磷酸氟达拉滨是一种抗肿瘤药，用于其他疗法

3、无效的慢性淋巴细胞性白血病的治疗.该药由德国Berlex Labs开发，1991 年首先在美国上市,目前磷酸氟达拉滨在慢性淋巴细胞性白血病药品市场上处于领先地位.磷酸氟达拉滨摄入后经去磷酸作用生成代谢物9-氟阿糖腺苷,后者在细胞内经磷酸化变成具抗肿瘤活性的F-Ara-ATP。本品的抗肿瘤机制涉及参入肿瘤细胞DNA或RNA链，使链停止延伸，以达到抑制DNA 或RNA合成的目的。本品与其它抗癌药阿糖胞苷、米托蒽醌等联用，可增强对肿瘤细胞的杀死作用。一、 绪论（一） 临床分析、病因及治疗的概况由于细胞内脱氧核糖核酸的变异形成的骨髓中造血组织的不正常工作。骨髓中的干细胞每天可以制造成千上万的红血球和白

4、血球。若人体过分生产不成熟的白血球，妨害骨髓的其他工作，使得骨髓生产其它血细胞的功能降低.病情可以扩散到淋巴结、脾、肝、中枢神经系统和其它器官。磷酸氟达拉滨进入体内被快速地去磷酸化成为2FaraA，可以被细胞摄取，然后被细胞内的脱氧胞苷激酶磷酸化后成为有活性的三磷酸盐2FaraATP。该代谢产物可以通过抑制核糖核酸还原酶、DNA聚合酶、delta和<101>,DNA引物酶和DNA连接酶的活性从而抑制DNA的合成.此外还可以部分抑制RNA聚合酶的活性从而减少蛋白的合成。2FaraATP作用机理的某些方面还不清楚，估计主要是通过影响DNA、RNA和蛋白质的合成而抑制细胞生长，其中抑制D

5、NA的合成是其主要作用。另外,体外研究显示，慢性淋巴细胞白血病（CLL）的淋巴细胞用2FaraA处理后，出现广泛的DNA片段化和细胞凋亡.二、 磷酸氟达拉滨的制备2,6二氨基嘌呤为原料，与乙酸酐吡啶酰化得到2,6-二乙酰氨基嘌呤，再与 D阿拉伯呋喃糖成环反应得中间体1（1-O甲基-D阿拉伯呋喃糖)，然后羟基保护反应得到中间体（1O-甲基2，3，5-O-三苄基 -D阿拉伯呋喃糖)，再与乙酸和盐酸反应得到中间 (2，3，5- O三苄基-D阿拉伯呋喃糖），接着羟基上对硝基苯甲酸保护反应得到中间体（1对硝基苯甲酰基2，3,5- O-三苄基-D-阿拉伯呋喃糖）,氯代反应得到中间体(1-氯-2，3,5 O

6、-三苄基-D阿拉伯呋喃糖)经缩合反应得到缩合物，氨基脱保护反应得2，6二氨基-9（2，3,5- O-三苄基-D-阿拉伯呋喃糖)9H腺嘌呤，后经2氟取代反应得2-氟9-（2，3，5- O三苄基-D-阿拉伯呋喃糖）-9H-腺嘌呤，最后脱去苄基得氟达拉滨，再与三氯氧磷作用生成磷酸氟达拉滨。氨基保护反应收率为137%142，上对硝基苯甲酸保护反应收率为163%168,氨基保护反应收率为30-35%,2-氟取代反应收率为28%-33，脱苄基保护反应收率为37-42，合成磷酸氟达拉滨收率为73%78%，精制收率为75-80%，总收率在3。5%4.5%.文档为个人收集整理，来源于网络个人收集整理，勿做商业用

7、途生产用原辅料质量规格、批号、来源；名称 规格物料编码 供货单位2，6二氨基嘌呤工业级A000322新乡拓新生化科技有限公司吡啶工业级A010171上海市医药物资供销公司乙酸酐工业级A010347台州永丰化工有限公司冰醋酸工业级A010157浙江欧华化工进出口有限公司乙醇工业级A010341台州市友邦化学有限公司D阿拉伯糖试剂级E002010杭州宏达化工仪器有限公司甲醇工业级A010218台州市友邦化学有限公司试剂级E000017杭州化学试剂有限公司硫酸试剂级E000044杭州化学试剂有限公司碳酸钾试剂级E000598台州中川医疗器化有限公司四氢呋喃工业级A010274浙江省医药工业有限公司6

8、0%氢化钠工业级A000223常州宝康医药化工有限公司N，N二甲基甲酰胺工业级A010181台州市友邦化学有限公司溴苄工业级A010224浙江省仙居医药化工实验厂冰乙酸试剂级E000078杭州化学试剂有限公司盐酸试剂级E000004杭州化学试剂有限公司二氯甲烷工业级A010169宁波市乐嘉化工有限公司对硝基苯甲酰氯工业级A000650金坛市兰陵化工有限公司无水硫酸钠工业级A000297浙江国商实业有限公司氯仿工业级A010118台州市胜利化工有限公司4A分子筛钠A型E001936上海亿日化工科技有限公司氯化氢无色气体A020036无锡新南化学气体有限公司碘化钾试剂级E000049杭州奥尼化学品

9、有限公司四丁基溴化铵工业级A000201金坛市华东化学研究所硫代硫酸钠工业级A000132浙江国商实业股份有限公司二甲基亚砜化学纯E001172临安青山化工试剂厂甲醇钠工业级A010385临海先锋化工有限公司亚硝酸钠工业级A000527浙江国商实业股份有限公司氟硼酸工业级A010200东阳市向阳化工有限公司乙酸乙酯工业级A010065浙江省医药工业有限公司碳酸氢钠工业级A000567浙江国商实业股份有限公司10钯碳试剂级E000615苏州市吴中区胥口试剂厂乙二醇甲醚工业级A010140台州市港口医化有限公司无水乙醇试剂级E000018杭州长征化学试剂有限公司磷酸三乙酯化学纯E000124国药集

10、团化学试剂有限公司三氯氧磷工业级A010262台州市中海医化有限公司氢氧化钠工业级A000563浙江国商实业股份有限公司氯化钠工业级A000300浙江省盐业集团活性炭工业级A000172上海活性炭厂有限公司高纯氢工业级A020000椒江海氧气体公司无水乙醚化学纯E000228杭州化学试剂有限公司氨气试剂级E001320杭州长征化学试剂有限公司氮气工业级A020025椒江海氧气体公司（一)氨基保护反应在200L反应罐中加入2,6二氨基嘌呤8。5KG、吡啶85L、乙酸酐17L,加热至110115，回流反应1小时后每30minTLC检测,反应1。5-2小时左右结束，TLC检测反应达终点后,自然冷却至

11、室温,后降温至510，静置结晶2小时，过滤,滤饼用乙醇50L×3打浆三次.真空抽滤，滤饼于6065下，真空度0.09Mpa下真空干燥12小时,得中间体1（2，6二乙酰氨基嘌呤)约12KG，重量收率为137142。摩尔比=1;0。852,6二乙酰胺基嘌呤 重量收率 = - × 100% 2，6二氨基嘌呤TLC标准对照图如下；抽滤器的清洗；先用15L饮用水浸泡15分钟左右,用丝绸布擦洗内外表面,直至表面及内部洁净为止，洗液排放;再用10L饮用水缓慢淋洗过滤器，将洗液排空，晾干待用。真空干燥箱的清洗；打开烘箱门,用抹布沾取饮用水擦洗烘箱内表面及支架，直至烘箱干净无粉尘，表面光亮，

12、再用少量饮用水全面擦洗一遍,最后用2L无水乙醇全面擦洗一遍，洗液集中处理.关烘箱门，烘干待用。滤袋、烘盘、盘罩的清洗；在不锈钢桶中，用30L的饮用水浸泡以上物品,搓洗至表面无固体残留，拧干，烘盘用丝绸布擦洗至内外表面洁净；如上重复清洗一次，再用5L无水乙醇淋洗上述物品。洗液集中处理，各物件晾干，检查滤袋、盘罩应完整无破损,收藏在干净处备用。清理场地;所有物料堆放整齐，所有器具排放整齐，地面用引用水拖洗干净.（二）糖成环、甲基化反应。在50L反应罐中加入D阿拉伯糖9KG、甲醇30L，搅拌，加入140ml浓硫酸，升温65±5，回流反应23小时，反应2小时后，每隔0.5小时对反应液取样一次

13、，做TLC检测,控制反应液中原料含量5%,TLC检测反应达终点后，降温至室温，搅拌下加入碳酸钾约420g调节PH=7。静置10分钟从底阀放出固体，反应液在5055，真空度-0。08Mpa浓缩至小体积，然后将料液转移至旋转蒸发仪中,继续按上述浓缩条件浓缩至干，得到黄色油状物中间体I（1-O-甲基-D阿拉伯呋喃糖）。TLC标准对照图如下；旋转蒸发仪的清洗；向20L的浓缩泡中倒入5L甲醇，摇动3分钟，倒出,洗液集中处理;旋转轴口用甲醇擦洗；如上操作再用5L甲醇重复清洗一次，直至浓缩泡及轴口内壁洁净无可见物，再用5L饮用水淋洗内壁,淋洗液应澄清无色，洗液倒出，集中处理,浓缩泡放置阴干待用。清理场地；所

14、有物料堆放整齐,所有器具排放整齐,地面用引用水拖洗干净。（三)糖羟基保护反应在300L反应罐中,加入100L四氢呋喃,8KG60氢化钠搅拌,滴加溶于20L N,N-二甲基甲酰胺的中间体I有氢气放出，滴加完毕后继续搅拌0.5-1小时，将料液冷却至010缓慢滴加20L溴苄与45L四氢呋喃的混合液，约30分钟滴完，室温反应约6小时，反应5小时后每隔30分钟对反应液取样,作TLC检测，控制反应液中原料的含量5%为反应终点，反应液由灰色逐渐变白，TLC检测反应达终点后，反应液在4550，真空-0。08Mpa浓缩至干,加入100L乙酸乙酯和100L饮用水（加入水时要小心，缓慢加入,反应放热明显），停止搅拌

15、，静置10分钟，分层，提取有机层，水相再用100L乙酸乙酯提取一次。合并有机相用饱和氯化钠100L×2洗涤二次，下层废水相均排放，集中处理，有机相于45-50,真空度0。08Mpa减压浓缩至干得油状物中间体（1O甲基-2，3，5-O三苄基D-阿拉伯呋喃糖）直接投入下步反应。TLC标准对照图如下；氯化钠溶液配制；在洁净的配制桶中，加入200L的饮用水,然后加入60KG氯化钠，搅拌溶解备用。清理场地；所有物料堆放整齐，所有器具排放整齐，地面用引用水拖洗干净。(四）糖1-去甲基反应在1000L反应罐中，抽入195L乙酸和中间体，搅拌下加入水85L和浓盐酸12L,升温至65±5反应

16、约2小时，反应1小时后每隔30分钟对反应液取样，作TLC检测，控制反应液中原料的含量5%为反应终点,TLC检测反应达终点后，降温至0左右加入已配制号的稀氢氧化钠溶液中和PH=7（22KG氢氧化钠溶于100L水中),然后加入二氯甲烷100L×3提取3次，每次搅拌10分钟，静置10分钟,分层,合并三次所得有几层，有机层用200L水和200L饱和氯化钠各洗涤一次，用20KG无水硫酸钠脱水干燥1小时，过滤，得中间体（2，3,5三苄基D-阿拉伯呋喃糖）直接投入下步反应。TLC标准对照图如下；稀氢氧化钠溶液的配制；在洁净的配制桶中加入100L饮用水，搅拌下加入22KG氢氧化钠，搅拌至全部溶解，室

17、温放置备用。饱和氯化钠溶液的配制；在结晶配制桶中加入200L饮用水，然后加入60KG氯化钠，搅拌溶解备用。清理场地；所有物料堆放整齐,所有器具排放整齐，地面用引用水拖洗干净。（五）糖1羟基上对硝基苯甲酸保护反应在1000L反应罐中加入中间体、二氯甲烷350L、吡啶37L，搅拌至溶解，加入对硝基苯甲酰氯9KG，室温反应约5小时,反应4小时后,每隔20分钟对反应液取样，作TLC检测,控制反应液中原料的含量5%为反应终点，TLC检测反应达终点后，将反应液用2N盐酸200L×4洗涤，有几层再用饱和碳酸氢钠200L洗涤一次，每次洗涤均搅拌10分钟，静置10分钟，分层,然后加入20KG无水硫酸钠

18、脱水2小时,过滤，滤液在4045，真空0.08Mpa下减压浓缩至油状物,真空抽入150L甲醇于5-10下搅拌结晶12小时，过滤,固体于4045,真空度0。08Mpa真空干燥12小时，得中间体(1对硝基苯甲酰基2，3，5三苄基D-A阿拉伯呋喃糖）约15KG，重量收率；163168%（以D阿拉伯糖计算）。 中间体 15KG重量收率 = - = - × 100 D-阿拉伯糖重量 9KG摩尔比=2;1TLC标准对照图如下；2N盐酸的配制;在665L饮用水中加入135L浓盐酸，搅拌均匀后冷却至室温即可。饱和碳酸氢钠溶液的配制；在结晶配制桶中加入200L饮用水，然后加入20KG碳酸氢钠,搅拌溶解

19、备用。抽滤器的清洗;先用15L饮用水浸泡15分钟左右,用丝绸布擦洗内外表面，直至表面及内部洁净为止，洗液排放；再用10L饮用水缓慢淋洗过滤器，将洗液排空,晾干待用。真空干燥箱的清洗；打开烘箱门，用抹布沾取饮用水擦洗烘箱内表面及支架，直至烘箱干净无粉尘，表面光亮，再用少量饮用水全面擦洗一遍,最后用2L无水乙醇全面擦洗一遍，洗液集中处理。关烘箱门，烘干待用。滤袋、烘盘、盘罩的清洗；在不锈钢桶中，用30L的饮用水浸泡以上物品，搓洗至表面无固体残留,拧干，烘盘用丝绸布擦洗至内外表面洁净；如上重复清洗一次，再用5L无水乙醇淋洗上述物品。洗液集中处理，各物件晾干,检查滤袋、盘罩应完整无破损,收藏在干净处备

20、用。清理场地；所有物料堆放整齐，所有器具排放整齐，地面用引用水拖洗干净.(六）糖氯代反应在500L反应罐中加入中间体约15KG，二氯甲烷200L搅拌溶解,降温至0-5，通入干燥的氯化氢气体2-3小时，通气过程控制温度0-5,反应2小时后，每隔20分钟对反应液取样，作TLC检测，控制反应液中原料的含量5%为反应终点，TLC检测反应达终点后，停止通氯化氢气体，通入氮气继续搅拌2小时左右，过滤,滤液用10KG无水硫酸钠脱水,过滤，在低于40下，真空度0.08Mpa下减压浓缩至干得中间体（1-氯2，3，5-三苄基-D-阿拉伯呋喃糖），直接投入下一步缩合。TLC标准对照图如下；抽滤器的清洗；先用15L饮

21、用水浸泡15分钟左右，用丝绸布擦洗内外表面，直至表面及内部洁净为止，洗液排放；再用10L饮用水缓慢淋洗过滤器，将洗液排空，晾干待用。清理场地；所有物料堆放整齐,所有器具排放整齐，地面用引用水拖洗干净.（七）缩合反应在2000L反应罐中加入中间体1（2，6-二乙酰氨基嘌呤）约12KG和二甲基亚砜120L，搅拌加热至35，加入4A分子筛15。5KG和氯仿400L，搅拌30分钟加入碘化钾5.5KG、四丁基溴化铵20KG，再搅拌30分钟后加入溶于180L氯仿的中间体，于3035反应17小时后，反应16小时后，每隔30分钟对反应液取样做TLC检测,控制反应液中原料氯代糖含量5%，TLC检测反应达终点后,

22、过滤，往滤液中加入12KG硫代硫酸钠，400L水搅拌，溶液由红色变黄色，提取有机层，水层用100L氯仿提取一次，合并有机层,用300L×5水洗涤五次,氯仿层用20KG无水硫酸钠干燥1小时，过滤，滤液在4045，真空度-0。08Mpa下减压浓缩至干得中间体2(缩合物).TLC标准对照图如下；硫代硫酸钠溶液的配制；往配制罐中投入12KG硫代硫酸钠和400L饮用水搅拌使其溶解即可.抽滤器的清洗；先用15L饮用水浸泡15分钟左右，用丝绸布擦洗内外表面，直至表面及内部洁净为止，洗液排放;再用10L饮用水缓慢淋洗过滤器，将洗液排空，晾干待用.滤袋清洗；在不锈钢桶中，用10L的饮用水浸泡滤袋，搓洗

23、拧干；如上重复清洗一次，再用少量无水乙醇淋洗。晾干，检查滤袋应完整无破损，收藏在干净处备用。清理场地；所有物料堆放整齐，所有器具排放整齐，地面用引用水拖洗干净。(八）氨基脱保护反应在300L反应罐中，加入无水甲醇100L、上步所得的中间体2（缩合物）全量(用60L无水甲醇溶解），搅拌均匀后加入甲醇钠19L，升温至6065，回流反应1小时，反应40分钟后每隔10分钟对反应液取样做TLC检测，控制反应液中原料含量5为反应终点,TLC检测反应达终点后，降温至室温，用冰乙酸约1L调节PH至78，控制温度在5055，真空度0。08Mpa下减压浓缩至干。往浓缩液中抽入200L的水，水层用二氯甲烷100L&

24、#215;2提取二次，合并有机层，用200L×2水洗涤，用20KG无水硫酸钠干燥,过滤，滤液控制温度在4045，真空度0.08Mpa下减压浓缩至小体积。加入无水甲醇20L加热至65使油状物溶解，待料液自然冷却至室温后再加入40L无水乙醚，降温至0左右析晶20小时,过滤，温度控制在40-45，真空度0.08Mpa下干燥12小时,得到中间体3(2，6-二氨基-9(2，3，5O三苄基-D阿拉伯呋喃糖）9H-腺嘌呤）约5KG，重量收率30-35。HPLC检测,要求主产物90%;最大单个杂质5.摩尔比=3；1 中间体3重量收率 = - × 100 中间体 TLC标准对照图如下；抽滤器

25、的清洗；先用15L饮用水浸泡15分钟左右,用丝绸布擦洗内外表面，直至表面及内部洁净为止,洗液排放；再用10L饮用水缓慢淋洗过滤器，将洗液排空，晾干待用。真空干燥箱的清洗；打开烘箱门,用抹布沾取饮用水擦洗烘箱内表面及支架，直至烘箱干净无粉尘,表面光亮,再用少量饮用水全面擦洗一遍，最后用2L无水乙醇全面擦洗一遍，洗液集中处理。关烘箱门，烘干待用。滤袋、烘盘、盘罩的清洗；在不锈钢桶中,用30L的饮用水浸泡以上物品,搓洗至表面无固体残留,拧干，烘盘用丝绸布擦洗至内外表面洁净;如上重复清洗一次,再用5L无水乙醇淋洗上述物品。洗液集中处理，各物件晾干，检查滤袋、盘罩应完整无破损,收藏在干净处备用.清理场地

26、;所有物料堆放整齐，所有器具排放整齐，地面用引用水拖洗干净。（九）2-氟取代反应在100L反应罐中加入中间体3约5KG、四氢呋喃25L，降温至-15-10，滴加氟硼酸20KG，耗时30分钟；保持-1510，滴加入2KG亚硝酸钠和2.5L纯水的溶液。保持1510,反应1-2小时，反应1小时后，每隔20分钟对反应液取样,做TLC检测，控制反应液中原料含量5%为反应终点，TLC检测反应达终点后，用约20L的50氢氧化钠溶液调节PH至7,加入40L二氯甲烷和40L水,搅拌分层，水相用20L二氯甲烷提取一次，合并二氯甲烷相，用水20L×2洗涤二次,用饱和食盐水20L×2洗涤二次，加入

27、5KG的无水硫酸钠脱水干燥2小时，过滤，滤液在40-45，真空度0。08Mpa下减压浓缩至油状物，加入10L无水乙醇、10L无水乙醚搅拌析出固体，于0-5结晶1-2小时,过滤，固体于40±2，真空度-0.08Mpa下真空干燥12小时，得到中间体4(2-氟9-（2，3，5O-三苄基-D-阿拉伯呋喃糖）9H-6-氨基腺嘌呤)约1.5KG，重量收率28-33%。HPLC检测，要求主产物90;单个杂质5%。 中间体4重量收率 = - × 100 中间体3摩尔比=3;1TLC标准对照图如下；亚硝酸钠水溶液的配制；将2KG亚硝酸钠加入2。5L水中，搅拌使其溶解即可.50氢氧化钠溶液的配

28、制；在洁净的配制桶中加入10KG冰水，然后再加入10KG氢氧化钠，搅拌溶解即可。饱和氯化钠溶液的配制;在洁净的配制桶中加入40L的饮用水，然后加入15KG氯化钠，搅拌溶解，备用。抽滤器的清洗；先用15L饮用水浸泡15分钟左右，用丝绸布擦洗内外表面，直至表面及内部洁净为止，洗液排放;再用10L饮用水缓慢淋洗过滤器,将洗液排空，晾干待用。真空干燥箱的清洗;打开烘箱门，用抹布沾取饮用水擦洗烘箱内表面及支架，直至烘箱干净无粉尘，表面光亮,再用少量饮用水全面擦洗一遍,最后用2L无水乙醇全面擦洗一遍,洗液集中处理.关烘箱门，烘干待用.滤袋、烘盘、盘罩的清洗；在不锈钢桶中,用30L的饮用水浸泡以上物品，搓洗

29、至表面无固体残留,拧干，烘盘用丝绸布擦洗至内外表面洁净;如上重复清洗一次，再用5L无水乙醇淋洗上述物品。洗液集中处理，各物件晾干,检查滤袋、盘罩应完整无破损，收藏在干净处备用。清理场地;所有物料堆放整齐，所有器具排放整齐，地面用引用水拖洗干净。（十)脱苄基保护反应在50L的高压釜中加入中间体4约1.5KG、10钯碳1KG、乙二醇单甲醚30L、浓盐酸0。8L，室温下通入氮气，保持内压为0.350.5Mpa反应4-6小时，TLC检测反应达终点后，过滤，滤液用约700ML氨水调节PH为7，在55-60,真空度0.08Mpa下减压浓缩至干，加入5L水,于2-8静置12小时，过滤，所得固体加入到30L乙

30、醇；水=1;1溶液中，升温至70-80，搅拌溶解，加入60g活性炭脱色30分钟，趁热过滤，滤液在5560，真空度0.08Mpa下减压浓缩至有晶体析出，于28结晶12小时，过滤,滤饼于60±2，真空度-0。09Mpa下真空干燥48小时,约得氟达拉滨600g，重量收率37-42.HPLC检测，主产物99.0%，单个杂质1.0 氟达拉滨重量重量收率 = - × 100 中间体4摩尔比=3；2TLC标准对照图如下;抽滤器的清洗；先用15L饮用水浸泡15分钟左右，用丝绸布擦洗内外表面，直至表面及内部洁净为止,洗液排放；再用10L饮用水缓慢淋洗过滤器，将洗液排空,晾干待用。真空干燥箱的

31、清洗；打开烘箱门，用抹布沾取饮用水擦洗烘箱内表面及支架，直至烘箱干净无粉尘,表面光亮，再用少量饮用水全面擦洗一遍，最后用2L无水乙醇全面擦洗一遍，洗液集中处理。关烘箱门，烘干待用。滤袋、烘盘、盘罩的清洗；在不锈钢桶中，用30L的饮用水浸泡以上物品，搓洗至表面无固体残留，拧干，烘盘用丝绸布擦洗至内外表面洁净；如上重复清洗一次，再用5L无水乙醇淋洗上述物品。洗液集中处理，各物件晾干，检查滤袋、盘罩应完整无破损,收藏在干净处备用.清理场地;所有物料堆放整齐，所有器具排放整齐，地面用引用水拖洗干净。（十一)合成磷酸氟达拉滨反应在10L的三口瓶中加入氟达拉滨约600g、磷酸三乙酯5。5L、降温至-50，

32、滴加三氯氧磷640ML，滴完于50搅拌反应4小时，将反应液在搅拌下加入到6KG的冰中，用3L的冰水洗涤瓶壁，用50氢氧化钠溶液调节反应液PH为2，维持PH=2搅拌15分钟，加入4。5L二氯甲烷萃取,分去二氯甲烷层，水层于28静置结晶20小时,过滤，滤饼于40±2，真空度0.08Mpa下真空干燥24小时，得到磷酸氟达拉滨约450g，重量收率73-78。 磷酸氟达拉滨重量重量收率 = - × 100 氟达拉滨重量摩尔比=2 ；1.210L反应瓶的清洗;向10L反应瓶中倒入2L丙酮，然后进行摇动3分钟，洗液集中处理。如上操作重复一次，直至瓶内壁洁净无可见物，再用2L水进行淋洗内壁

33、,淋洗液应澄清无色，洗液集中处理。反应瓶放置烘干待用。20L容器的清洗;先用水将容器内外壁冲洗至无可见物，再用5L丙酮进行淋洗内壁，淋洗液应澄清无色,最后用水淋洗一遍，洗液集中处理。反应瓶放置烘干待用.真空干燥箱的清洗;打开烘箱门,用抹布沾取饮用水擦洗烘箱内表面及支架，直至烘箱干净无粉尘，表面光亮，再用少量饮用水全面擦洗一遍，最后用2L无水乙醇全面擦洗一遍，洗液集中处理。关烘箱门，烘干待用。清理场地；所有物料堆放整齐，所有器具排放整齐,地面用引用水拖洗干净.（十二）磷酸氟达拉滨精制将磷酸氟达拉滨粗品约450g用2.5L7080的纯水打浆1小时，快速冷却，冷藏结晶20小时，冷藏温度控制在28，过

34、滤，得固体.将精品置于真空干燥箱中，40±2，真空度0。09Mpa下真空干燥24小时,得到磷酸氟达拉滨成品约400g.QC取样检测，成品质量营满足标准。合格后包装入库。结晶收率85-90。10L反应瓶的清洗;向10L反应瓶中倒入2L丙酮，然后进行摇动3分钟，洗液集中处理.如上操作重复一次，直至瓶内壁洁净无可见物,再用2L水进行淋洗内壁，淋洗液应澄清无色，洗液集中处理。反应瓶放置烘干待用.过滤漏斗、烘盘的清洗；在5L不锈钢桶中，用3L纯水浸泡以上物品30分钟，用丝绸布擦洗内外表面至无可见残留，再用3L纯水淋洗上述物品，洗液集中处理,晾干，收藏在干净处备用。清理场地；所有物料堆放整齐，所

35、有器具排放整齐，地面用引用水拖洗干净。三、磷酸氟达拉滨工艺的研究（一）仪器HPLC系统： 高效液相色谱法，2013色谱工作站.色谱柱为C18(150 mm×4。6 mm,5 m）,流动相A为0.008 mol/L磷酸二氢钾溶液乙腈=95:5，流速为1。0ml/min,柱温为30 ，检测波长为260 nm。流动相B为0.008 mol/L磷酸二氢钾溶液乙腈=40:60,流速为1.0 ml/min,柱温为30 ，检测波长为260 nm。质量标准方法A杂质A(Isoara-guanine-monophosphate）0.8杂质B(Isoguanine)0.2%杂质C(3,5diphosph

36、ate）0。4其它单个杂质0。10%方法B杂质D(2fluoroadenine）0。1%杂质E(2fluoroara-adenine）0。1%杂质F（2-Ethoxyphosphate analog)0.2其它单个杂质0。10方法A+B总的其它杂质0。5总杂质1。5杂质A为异-鸟嘌呤磷酸盐；杂质B为异鸟嘌呤；杂质C为3，5二磷酸盐 ;杂质D为2-氟腺嘌呤杂质；E为2氟腺嘌呤杂质;F为2-乙氧基磷酸；相对保留时间（min)杂质A0。26杂质B0。34杂质C0.42杂质D1。5杂质E1.9杂质F2.5溶液的配制磷酸氟达拉滨对照品贮备液：取磷酸氟达拉滨对照品约25mg精密称定， 置于50 ml量瓶中

37、，加流动相A 使其溶解,并稀释至刻度， 摇匀。(二）方法与结果 在生产磷酸氟达拉滨的过程中会遇到很多工艺的优化及改进的问题，每一步反应都存在或多或少的问题，我们应该怎样去发现，去优化,去改进以提高产品的产量、收率。这里主要研究磷酸氟达拉滨合成这步反应过程中对一些试剂和反应条件的控制对C杂质含量的影响。(A流动相检测磷酸氟达拉滨的保留时间约为8min ，杂质C的保留时间约为3。5min）1。三氯氧磷对杂质C的影响取氟达拉滨10g置于250mL三口反应瓶中 加入磷酸三乙酯92mL、降温至-5-0，缓慢滴加三氯氧磷1.1mL，温度控制在0以下，滴完于50搅拌反应3小时后，每30min左右HPLC检测

38、一次(取反应液水解后进样10µl。B流动相检测磷酸氟达拉滨的保留时间约为2.8min）。取氟达拉滨10g置于250mL三口反应品中 加入磷酸三乙酯92mL、降温至-50，缓慢滴加三氯氧磷1。5ml， 温度控制在0以下,滴完于50搅拌反应3小时后,每30min左右HPLC检测一次.时间(min) 0 1。3% 2。530 1。8% 4。0%60 2.5 7。5%结论；从上述实验来看三氯氧磷的用量对杂质C的影响还是起着至关重要的作用，三氯氧磷的过量会让整个反应体系的酸性变强，从而使得杂质C变大,若要控制杂质C必须控制三氯氧磷的使用量。2反应温度对杂质C的影响取氟达拉滨各10g分别置于25

39、0 mL三口反应瓶中标记为，。同时向两个反应瓶中加入92ML的磷酸三乙酯，降温至10，缓慢的滴加1。1ML三氯氧磷，滴加速度保持一致，同时滴加完毕，将号反应瓶温度继续保持在-10左右反应，而号反应瓶则温度控制在10左右反应，3小时后HPLC跟踪反应每30min左右HPLC检测一次。反应时间（h) 温度10 温度0 温度10 3 1。5% 1。6% 4。33。5 1.7% 1.9% 7.8%4 2.2 2。5 12.0%结论；从上述表格来看反应液在0及以下的温度条件下，会随着时间的延长杂质C会慢慢的变大，但是变化不会很大,也就是说温度在0以下，对杂质也基本没什么影响，而当温度0度以上的时候杂质会

40、随着反应时间的增长而迅速变大.3结晶方法对杂质C影响方法一，准确称取磷酸氟达拉滨粗品100克（杂质C的含量为0.4），倒入2L烧杯中,在搅拌状态下加入纯水1L，然后迅速加入30ML的氨水，使其完全溶解澄清，溶解后一次性倒入20ML的盐酸，整个体系马上凝固成胶状物，继续不断搅拌，30分钟后胶状物逐渐转变成有白色固体析出，温度降至28,过滤.得磷酸氟达拉滨约80克，再将磷酸氟达拉滨用350ML70-80的纯水打浆1小时,快速冷却，冷藏结晶20小时，冷藏温度控制在2-8，过滤,得固体。将精品置于真空干燥箱中，40±2,真空度-0.09Mpa下真空干燥24小时,得到磷酸氟达拉滨成品约72g.

41、HPLC检测杂质C含量为0.2%)。 成品 60质量收率 = - = - = 72。0% 粗品 100方法二，准确称取磷酸氟达拉滨粗品100克(杂质C的含量为0.4%），用500ML70-80的纯水打浆1小时，快速冷却，冷藏结晶20小时，冷藏温度控制在28，过滤，得固体.将精品置于真空干燥箱中，40±2，真空度0。09Mpa下真空干燥24小时，得到磷酸氟达拉滨成品约90g。重复一次上述操作，得成品81g，(HPLC检测杂质C含量为0。2%）。若把杂质C的含量结晶为0。2.则需重复四次结晶才能达到，成品则为65。6g 成品 65.6质量收率 = - = - = 65。6% 粗品 100

42、结论；从以上2组实验可以看出,虽然方法二的结晶方法非常的简单,但是对于杂质C来说除杂质的效果不是特别的明显，经常需要重复好几次才能合格.而方法二相对于一来说稍微繁琐一点，但是除杂质效果好于方法一,若杂质C的含量过高可选择方法一进行结晶，这样即能减少结晶次数，收率也比方法二要高很多，所以在今后若出现杂质C的含量比较打的情况下，可以考虑这种方法来去除杂质。四、生产过程中对质量的控制（一)薄层色谱法TLC 法是一种检测有关物质的经典方法，具有快速、简便、操作简单等特点，尤其适用于检测无紫外吸收的物质。目前，各国药典在采用TLC 检测该类抗生素中某一药物的有关物质时，均采用了系列对照溶液进行梯度点样的

43、方法来“半定量”地评估杂质量，并对杂质数目、最大杂质量和总杂质量均有详尽的评判要求。在用TLC 检测有关物质时，若分离效果达不到要求，则影响测定的准确性，故应有系统适用性试验检测系统的有效性.（二）高效液相色谱法HPLC 法具有分离效率高、选择性好、分析速度快、操作自动化和应用范围广的特点，目前是各类药物有关物质检测的主要方法，如杂质对照品法( 适用于已知杂质)、主成分自身稀释对照法（ 适用于一般杂质检查,杂质成分少且尚不能取得其对照品，简称“自身对照法”，分为加校正因子计算和不加校正因子）、归一化法( 现已不多用) ，第一法为外标法、定量检测,后两法均为限量检测。工序参数次数项目频率氨基保护

44、T；110-115T；1.52hr2-3次TLC反应1 hr每30分钟TLC检测一次糖成环T;65±523次TLC反应2 hr每30分钟TLC检测一次甲基化t;2-3hr/TLC检测一次糖羟基保护T；室温t;约6hr12次TLC反应5 hr后，每30分钟TLC检测一次糖1-去甲基化反应T; 65±5t； 约2hr23次TLC反应1 hr后,每30分钟TLC检测一次糖1羟基上保护T；室温t； 约5hr2-3次TLC反应4 hr后，每20分钟TLC检测一次糖氯代T；0-5t； 23hr23次TLC反应2 hr后，每20分钟TLC检测一次缩合T;3035t;约17hr2-3次TL

45、C反应16 hr后,每30分钟TLC检测一次氨基脱保护T；60-65t; 1hr1-2次TLC反应40分钟后，每10分钟TLC检测一次HPLC检测反应产物（归一化法）2氟取代T；15-10t； 1-2hr23次TLC反应1 hr后，每20分钟TLC检测一次HPLC检测反应产物（归一化法）脱苄基保护反应T；2030t; 46hr多次TLC反应4 hr后,每30分钟TLC检测一次HPLC测氟达拉滨一次结晶物磷酸氟达拉滨合成T； 50T；4hr PH；2/精制T；70-80/全检磷酸氟达拉滨成品一次结论；薄层色谱法、高效液相色谱法的分析及使用是生产磷酸氟达拉滨过程中必不可少的，他能使我们更加准确的控

46、制每一步反应，达到提高收率的目的。五、生产质量的要求对中间体及成品结构的确定中间体结构的确定首先通过其它简单的方法初步鉴定，然后使用质谱法利用电磁学原理，采用高速电子束撞击气态分子，将分解出的阳离子加速导入质量分析器中，然后按质荷比（m/z)的大小顺序进行收集和记录,即得到质谱图,根据质谱图峰的位置，可以进行定性和结构分析；根据峰的强度，可以进行定量分析。 根据质量分析器的工作原理,可将质谱仪分为动态仪器和静态仪器两大类，静态质谱仪的质量分析器为稳定的电磁场，它是按照空间位置将m/z不同的离子分开;动态质谱仪的质量分析器则采用变化的电磁场，按照时间和空间区分不同m/z的离子。如由单聚焦和双聚焦

47、质量分析器组成的质谱仪，属于静态质谱仪，而飞行时间和四极滤质器组成的质谱仪、属于动态质谱仪。在一张质谱图中,可得到许多峰，这些峰的位置与相对强度除与分子结构有关外，还与离子化电位、样品所受压力和仪器结构有关。质谱峰可归纳为以下几种:分子离子峰、碎片离子峰、重排离子峰、同位素离子峰、亚稳离子峰及多电荷离子峰。各种化合物在一定能量的离子源中是按照一定规律进行裂解而形成各种碎片离子的，表现为一定的质谱图，所以可根据裂解后形成的各种离子峰就可鉴定物质的组成和结构。成品结构的确定成品结构的确定除了使用质谱仪还要利用碳谱-氢谱来进行确认，氢谱分析方法。首先区分出杂质峰、溶剂峰、旋转边带,杂质含量较低，其峰

48、面积较样品峰小很多,样品和杂质峰面积之间也无简单的整数比关系.据此可将杂质峰区别出来.然后计算出不饱和度.接着确定谱图中各峰组所对应的氢原子数目，对氢原子进行分配.再对每个峰的、J都进行分析.根据对各峰组化学位移和耦合常数的分析，推出若干结构单元，最后组合为几种可能的结构式。每一可能的结构式不能和图谱有大的矛盾。碳谱分析首先鉴别谱图中的真实谱峰 溶剂峰， 杂质峰 作图时参数的选择会对谱图产生影响。当参数选择不当时，有可能遣漏掉季碳原子的谱峰。再由分子式计算不饱和度.接着对分子对称性的分析。碳原子值的分区，碳谱大致可分为三个区： 羰基或叠烯区150ppm,一般165ppm.200ppm只能属于醛

49、、酮类化合物，靠近160170ppm的信号则属于连杂原子的羰基。 不饱和碳原子区（炔碳除外)90160ppm。由前两类碳原子可计算相应的不饱和度，此不饱和度与分子不饱和度之差表示分子中成环的数目。 脂肪链碳原子区1。最后通过碳谱与氢谱的结合对化合物的结构进行推导.样品通过质谱确定目标产物的分子量、结构。磷酸氟达拉滨的分子量为365.21,然后通过对碳谱和氢谱结合分析确定其含碳原子的个数、氢原子的个数,通过计算得出环加双键数，确定磷酸氟达拉滨及其异构体结构式为C10H13FN5O7P，最后通过比旋度来判断磷酸氟达拉滨，磷酸氟达拉滨的比旋度为+10°+14°。流动相A检测；取样

50、品25mg，稀释到50ml,完全溶解。A杂质相对保留时间为0。26（min)；出峰时间为0。26×7.740=2.012,对应图谱峰号为1。B杂质相对保留时间为0.34(min）;出峰时间为0.34×7.740=2.631对应图谱峰号为2.C杂质相对保留时间为0.42（min）；出峰时间为0。42×7。740=3.251对应图谱峰号为3。流动相B检测；取样品25mg,稀释到50ml，完全溶解.D杂质相对保留时间为1.5（min）;出峰时间为1。5×2。698=4。047，对应图谱峰号为5.E杂质相对保留时间为1。9(min）； 出峰时间为1。9×

51、;2。698=5.1262，对应图谱峰号为7.F杂质相对保留时间为1.5(min）；出峰时间为2.5×2.698=6.745, 无对应图谱峰号说明杂质含量小.质量标准见下表；检测项目美国注册标准欧洲注册标准加拿大注册标准性状白色或类白色结晶性粉末，无可见外来杂质白色或类白色结晶性粉末，无可见外来杂质白色或类白色结晶性粉末,无可见外来杂质鉴别IRIRIR溶解性/微溶于水，易溶于DMF，极微溶于无水乙醇/溶液外光 /澄清颜色不深于BY5/比旋度+10°+14°+10.0°-+14。0°+10°+14°水分3。03。0%3.0氯化物0.2/0.2%游离态磷酸盐0。1%/0。1%钠限度0.2%/0。2%重金属20ppm20ppm20ppm钯/20ppm20ppm含量98。0102。097。0102。098。0-102.0%微生物限度细菌数100CFU/gm霉毒和酵母菌100CFU/gm总菌数100CFU/gm总需氧菌数100CFU/gm细菌数100CFU/gm霉毒和酵母菌100CFU/gm总菌数100CF