CMU1-SOP-HM-MY-201 甲胎蛋白

1、作业指导书文件编号：CMU1-SOP-HM-MY-201版本号：A.0名称： 甲胎蛋白测定作业指导书生效日期：批准： 第 7页共 7页项目名称： 甲胎蛋白 (AFP)目 的：用免疫学方法体外定量测定人血清或血浆中甲胎蛋白(AFP)的含量。适合仪器：MODULAR ANALYTICS E170（Elecsys模块）免疫分析仪方法原理：采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。·第1步孵育：10l标本、生物素化的单克隆AFP特异抗体和钌（Ru）标记的单克隆AFP特异抗体混匀，形成夹心复合物。·第2步孵育：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反

2、应结合到微粒上。·第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极表面上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。样本要求：1. 样品种类：人血清、血浆。2. 使用容器：血清标本用13mm直径的含有分离胶的黄盖负压真空采血管,血浆标本用紫色盖或蓝色盖的负压真空采血管。3. 要求：血清或血浆标本均应不溶血，血浆可用肝素钠、K3EDTA或枸橼酸钠抗凝。接受高剂量生物素（>5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素

3、8小时后才能采血。4. 保存：标本在28可稳定7天，-20可稳定3个月，且只能冻融一次。试剂及配套品：1. 罗氏诊断公司，AFP试剂，未开封28，可稳定至标明的保质期。开封后28，12周；在E170仪器试剂仓中，8周。2. 试剂组成： Elecsys AFP试剂盒，100人份M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml：链霉亲和素包被的微粒，0.72mg/ml，生物素结合能力：470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。R1：生物素化的抗AFP抗体（灰盖），1瓶，10ml：生物素化的抗AFP抗体（鼠）：浓度4.5mg/l，磷酸缓冲液100mmol/l，pH6.0，含防腐剂。R2：Ru(bp

4、y) 32+标记的抗AFP抗体（黑盖），1瓶，10ml：Ru(bpy) 32+标记的抗AFP抗体（鼠）：浓度12.0mg/l，磷酸缓冲液100mmol/l，pH6.0，含防腐剂。试剂使用：1. 此试剂为体外诊断使用，按照储存方法保存，避免冷冻。2. 试剂盒中的试剂是一个整体,打开后可立即使用,不能被分开。3. 装/卸载试剂操作和特殊情况处理，参见仪器操作规程。校准：描述：此方法以1st IRP WHO 参考标准72/225为标准，每批AFP试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用AFP 定标液定标校正母定标曲线。1. 校准品：德国罗氏诊断公司，AFP定标液。2. 定标频率：每批

5、试剂盒必须用新鲜试剂定标一次（如：试剂包在仪器上登记后不超过24小时）。另外，以下情况需要再次定标：· 同一批号试剂一个月后（28天）· 7天（放置仪器上的同一试剂盒）· 根据要求进行定标：如质控结果超出范围时。3. 质量监控：见内部质量控制程序和室间质量评价管理程序主要参数：Assay 电化学发光Time（min）18 Sample Volume（ul）11 Reagent Volume（ul）M 65 R1 100 R2 100Calibration TypeFull操作：试剂定标和质控操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。参考区间： 07.0 ng/ml

6、检测范围：0.5001000IU/ml 或0.605-1210 ng/ml(由master定标曲线的最低检测限与最高检测限决定)。如果测定值低于最低检测限，报告为0.500IU/ml或0.605ng/ml。如果测定值高于检测范围，报告为>1000IU/ml或1210ng/ml(结果达到50,000IU/ml或 60500ng/ml样本应作50倍稀释)。稀释：高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。建议1:50稀释。稀释后的标本AFP含量必须高于20IU/ml (24ng/ml)。软件自动计算结果。干扰物质：该方法不受黄疸（胆红素<65mg/dl）、溶血（血红蛋白<2.2g/dl

7、）、脂血（脂质<1500mg/dl）和生物素<60ng/ml等干扰(标准:最初值的批内回收:±10%)。不受类风湿因子干扰（1500U/ml）。26种常用药物经试验对本测定无干扰。AFP浓度高达1,000,000IU/ml（1,210,000ng/ml）也不出现钩状效应。性 能：1. 灵敏度(最低检测限)：0.50IU/ml (0.61 ng/ml) ，最低检测限代表能够区别于零的最低检测分析水平。2. 特异性：期待测定值的901103. 重复性：用Elecsys试剂、人血清、质控物根据国际临床试验室标准协会(National Committee for Clinical

8、 laboratory Sdandards)的修改草案(EP5-A)来检验它的重复性,批内变异在5%以内。 可报告范围 0.61-1210 ng/ml临床意义：原发性肝癌1）AFP增高为原发性肝癌重要指标之一，特异性强、灵敏度高。AFP常用于原发性肝癌临床检查及普查，大部分患者呈持续性高水平升高，部分患者呈低水平增高。2）AFP阴性并不排除原发性肝癌，据统计18%-20%的原发性肝癌患者血清AFP正常，此时需结合临床及其他检测指标来降低假阴性。3）年龄因素：AFP对原发性肝癌的诊断率随患者年龄的增加而逐渐下降，对老年人AFP正常或轻微升高不能排除肝癌的可能性。4）预后：原发性肝癌血清AFP水平

9、与预后有关，肝癌切除后AFP能否正常或上升是判断预后的关键因素。其他肿瘤部分卵黄囊肿患者血清AFP上升；胃癌、结肠癌等内胚层衍生的组织发生的癌，即使未发生肝转移也合成AFP；而非内胚层衍生组织的癌，即使转移到肝脏也不合成AFP；血清AFP是否上升与癌的原发部位有关，少数消化道肿瘤，如胃癌和胃癌肝转移，血清AFP增高；与绒毛膜促性腺激素联合检测有助于生殖细胞肿瘤的分类与分期。肝脏良性病变肝脏良性病变时，AFP也可增高。病毒性肝炎患者AFP轻度增高，慢性肝炎患者约有20%AFP增高，暴发性肝炎患者AFP明显增高。病理检查时可发现AFP升高与肝细胞再生，同时肝脏受损有关系。血清AFP水平降低孕妇血清AFP浓度降低可作为胎儿染色体异常的指标；原发性肝癌手术彻底切除后，血清中AFP浓度将迅速下降，1周内可降至正常水平。若增高则可能复发，这中增高比肝功能异常出现得更早。持续性低阳性AFP与肝癌连续性低阳性患者1年内肝癌发生率比正常者高，对低阳性患者的随访有助于早期诊断。低阳性性患者同时伴有肝硬变及慢性肝炎时，肝癌的危险性更大。孕妇血清/羊水AFP检