LC-15C岛津液相色谱仪操作规程

1、题 目LC-15C高效液相色谱仪标准操作规程编 号GZYQ103800页码：1/4起 草 人起草日期部门审核审核日期质量审核审核日期批 准 人批准日期生效日期颁发部门质 量 部分发部门质量部、中心检验室 目的：制定LC-15C高效液相色谱仪标准操作规程。 范围：适用于LC-15C高效液相色谱仪操作。 职责：检验人员对本规程的实施负责。 内容：1操作前的准备1.1流动相的配制：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水，可用超级纯水器制得或用重蒸馏水。对规定pH值的流动相，应使用精密pH计进行调节。配制好的流动相应通过0.45m适宜的滤膜滤过

2、，用前脱气。应配制足量的流动相及时待用。1.2供试溶液的配制：供试品用规定溶剂配制成供试溶液。供试溶液在注入色谱仪前，一般应经0.45m或适宜的滤膜滤过。必要时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色谱系统产生污染。1.3检查上次使用记录和仪器状态：检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的pH值与该色谱柱是否相适应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。2仪器组成、电源2.1仪器组成：LC-15C液相色谱泵、SPD-15C紫外-可见检测器、LCsolution 15c色谱工作站。2.2接通电源：将各仪器电源

3、插头插入插座内，打开泵（该仪器除梯度外可用单泵也可同时用双泵，用单泵可仅开一个泵，用双泵需两个泵同时打开）。3操作题 目LC-15C高效液相色谱仪标准操作规程编 号GZYQ103800页码：2/43.1泵系统3.1.1单泵操作：3.1.1.1打开泵和检测器电源，仪器由红灯转换为绿灯，更换所需的流动相，然后将排液阀旋钮逆时针旋转180°以打开排液阀。3.1.1.2 按“purge”键运行，开始冲洗。如果排液阀旋钮旋转的度数超过180°，任何排出的流动相都可能包含气泡。这是正常现象。3.1.1.3 清洗完成后，以顺时针方向尽量旋转排液阀旋钮，关闭排液阀。3.1.1.4按下“pu

4、mp”键，开始泵的运行。3.1.2双泵操作：3.1.2.1打开两个泵和检测器电源，仪器由红灯转换为绿灯，更换双泵所需的流动相，然后将两泵排液阀旋钮逆时针旋转180°以打开排液阀。3.1.2.2 分别按“purge” 键运行，开始冲洗。3.1.2.3 清洗完成后，以顺时针方向尽量旋转排液阀旋钮，关闭排液阀。3.1.2.4 分别按下“pump”键，开始两个泵的运行。3.2工作站的使用3.2.1.双击桌面【Lcsolution 15c】图标，确认已经开启LC系统后，启动【LC实时分析”工作站。启动【LC实时分析】工作站后，确保分析仪器的所有单元（泵、柱温箱和检测器）都已连至系统控制器。确保

5、所有单元上都没有显示任何错误消息。3.2.2设置系统配置，以便该系统与仪器的实际配置相匹配。仅当第一次将LCsolution 15c连接到分析仪器，或仪器的配置发生变化时，才需要下列设置。如果仪器的配置没有任何变化，点击“视图”里的助手栏，点系统配置用单泵或双泵进行运行。 3.2.3设置仪器参数：3.2.3.1点【文件】项下【新建方法文件】，单击“仪器参数视图”下【正常】选项，可以在其中输入分析条件，例如LC停止时间、泵A流速、检测器A波长通道题 目LC-15C高效液相色谱仪标准操作规程编 号GZYQ103800页码：3/4 等。确保为每一检测器设置了【LC停止时间】【结束时间】。3.2.3.

6、2【LC停止时间】是控制仪器的持续时间。如果时间程序或馏分收集时间程序都没有设置，则将其保留为0.01min。3.2.3.3如用单泵运行，泵【模式】钩选“等浓度洗脱”（双泵运行勾选“二元高压 梯度洗脱”），点【高级】选项卡中“泵”选项，设置泵A流速（一般为1.000ml/min）和压力限制最大值、最小值。3.2.3.4如需双泵（如梯度洗脱等），点【LC时间程序】设置梯度洗脱表，单击“下载”将设置传输到仪器，使用新名称保存方法文件。3.2.4设置进样信息：确保显示【就绪】，且【色谱图视图】中的基线稳定后（一般约需1530分钟）。单击【LC实时分析】窗口助手栏上的“单次运行”图标，出现“单次运行”

7、屏幕，设置样品名、样品ID、数据文件、数据描述、进样体积等，然后单击【确定】。3.2.4.检测器调零：点击“检测器A零点”图标，使检测器数值调零。3.2.5进样：吸取不少于60l的样品，放在进样口，向左打开进样阀，将样品全部打入进样口，向右打下进样阀，系统即自动开始采集数据。单次分析开始，并且【LC实时分析】窗口中的状态从【就绪】变为【运行】。当达到【仪器参数视图】中指定的检测器的【结束时间】时，自动终止数据采集。如设定的【结束时间】要修改，可以单击【采集】助手栏中的【停止】图标，也可以在【数据采集】菜单的【更改分析时间】项目中，在数据采集过程更改结束时间。一旦开始数据采集，【仪器参数视图】设

8、置变为只读，并且不能在【仪器参数视图】中更改结束时间。3.2.6数据处理：3.2.6.1单击“Lcsolution 15c”中的“再解析”，“LC再解析”开始。3.2.6.2选择【文件】菜单中的“选择项目文件夹”，然后选择预测定的数据文件，数据文件即打开。3.2.6.3单击助手栏中的【向导】图标，单击“program”点击【下一步】，设置正确的积分参数。3.2.6.4记录要识别的峰的保留时间，单击【下一步】输入所需峰的详细内容，然后单击【完成】。单击化合物表右上角【视图】按钮，查看【结果】。3.2.6.5单击【LC数据】助手栏中的【应用到方法】图标，出现屏幕，提示指定方法文件名。命名方法文件并

9、单击【保存】。3.2.7重复3.2.43.2.6操作进行下一次测定，直到检验结束。3.2.8打印报告：在【LC数据分析】点击左下角的【报告格式】出现“操作人”名，选定“操作人”双击。然后点击左下角【数据】，从【数据】中拖动【数据文件】进行打印报告。3.2.9清洗和关机3.2.9.1分析完毕后，先关色谱工作站和检测器，再用适当经滤过和脱气的溶剂清洗色谱系统，一般用先用2530%甲醇冲洗，然后用纯甲醇冲洗，2530%甲醇一般冲洗1530分钟，纯甲醇冲洗不得少于30分钟，特殊情况应延长冲洗时间。3.2.9.2关断电源，作好使用登记，内容包括日期，检品，仪器完好状态等。4注意事项4.1色谱柱与进样器及

10、其出口端与检测器之间应为无死体积连接，以免试样扩散影响分离。4.2新柱或被污染柱用适当溶剂冲洗时，应将其出口端与检测器脱开，避免污染。4.3压力表无压力显示或压力波动时不能进行分析，应检查泵中气泡是否已排除，各连接处有无漏液，排除故障后方能进行操作。如压力升高，甚至自动停泵，应检查柱端有无污染堵塞。4.4发现记录基线波动，出现毛刺等现象，首先应检查检测器流通池是否有气泡或污染，如不是流通池引起，仪器稳定后方能进行操作。4.5进样时，色谱柱应用流动相充分冲洗平衡，如系统适用性并不符合规定，或填充剂已损坏，则应更换新的同类色谱柱进行分析。如果同类色谱柱依法操作达不题 目LC-15C高效液相色谱仪标准操作规程编 号GZYQ103800页码：4/4 到预定的分离时，可更换另一牌号的同类色谱柱进行试验。4.6以硅胶作载体的化学键合相填充剂，其稳定性受pH值影响很大。所以流动相一般pH应为2.57.5。如果使用高pH值流动相时，可在泵与进样器之间连接一硅胶短柱，以饱和流动相，保护分析柱，并尽可能缩短在高pH值下的使用时间，用后立即冲洗。4.7色谱仪管路系统，从泵、进样器、色谱柱至检测器流通池