根际微生物群落及促生菌多样性及其筛选策略

1、根际微生物群落及促生菌多样性及其筛选策略摘要：根际是地球上最大的生态系统，在生物圈功能中发 挥着非常显著的作用，微生物和植物在根际环境中形成的复 杂网络式关系会直接或间接地影响植物生长，深入了解并利 用这种互作关系对于提高农业产出投入比以及筛选获得更 髙效、广适的促生菌尤为必要。综述了根际微生物群落与促 生菌多样性以及筛选策略，分析了研究中尚存在的一些问 题，并对今后的研究进行了展望。关键词：植物根际促生菌(pgpr)；微生物群落;根际生态；多样性；筛选中图分类号：q 9 3 99 6文献标识码：a文章编号：0439- 8 114 ( 2 0 12) 24 5553-061 9 0 4年，德国

2、农学家h i 1 t n e r发现豆科植物根附近区域的土壤微生物，由于受到根系分泌有机物质对其 产生的“效应”，表现出相对更高活性的现象，并首次提出“根际” (rhizosphere)这一概念1 。现在我们知道，这种“效应”其实是根际微生态系统中的根际效应。单棵植物根际范围虽小，但放眼看，根际却是地球上最大的生态系统，其能量流也极其巨大，因而，根际在生物 圈功能中的作用非常显著。曾有研究人员估算，植物2 0%5 0 %的光合产物是通过根部释放出来的2 , 3 o 根际土壤中存在大量的宏观生物和微生物，如细菌、真 菌、原生动物和藻类生物等，细菌是该群体中数量最多的一 类微生物。微生物和植物在根

3、际环境中形成的复杂网络式关 系会直接和间接地影响植物生长；反过来，植物通过分泌有 机物，构建起一个有选择性的环境条件，以利于对其生长有 益的细菌，导致根际细菌多样性偏低4, 5 o植物根际 促生菌(pl ant g rowt h p romo t i n g r h i z o b a c teria, p g p r)在根际微生物群 体中研究最为热门，也是对农业生产最具有应用价值的一类 微生物。由于p g p r数量众多，且在根际定殖时具有竞争 力，加之其作用机制的多样性，因此能在很大程度上影响植 物生长。然而，人们在使用pgpr或相关制剂时，普遍发 现大田应用效果远不及盆栽或温室条件下的效

4、果理想，主要 原因是pgpr对“陌生”环境的不适应。根际微生物是野 外环境中的主要“陌生”因素，因此，了解与某些基本生态 过程，如复杂性、自然选择、种间关系(共生、寄生、共栖 和竞争)、演替或扰动效应有密切关系的根际微生物群落结 构和多样性，可以帮助人们更好地理解根际生态系统，并为 pgpr的筛选和高效利用提供理论依据。基于此，本文主 要从根际微生物群落多样性、pgpr生态和遗传多样性以 及p g p r的筛选策略等3个方面进行综述。1根际微生物群落多样性微生物多样性包括物种、遗传与变异以及功能多样性 6。在根际系统中，细菌群落的功能多样性是基于其遗 传变异以及和其他原核、真核生物（如植物）的

5、互作关系。 直至现在，根际微生物多样性与根际微生物功能之间的关系 仍不十分清楚。根际微生物多样性信息的缺乏，其原因一是 其种类繁多，二是绝大多数微生物的不可培养性。1 . 1根际微生物群落结构的研究方法研究微生物群落结构，就必须了解各类群微生物群体的 种类及数量。传统技术是通过从根际土壤中提取、分离微生 物，实验室条件下对其进行形态学、生化和遗传学检验。由 于细菌往往和土壤基质以及其他细胞紧密附着，因此在细菌 提取中常用到分散剂，即用物理或化学方法将细胞和基质区 分开，之后才能对分离细菌生物量进行测定。微生物生物量的测定常用方法有：显微镜下直接计数 （如唳橙染料染色）7、微生物呼吸量测定（如基

6、质诱 导呼吸量，subs t rate induced res p i r a t i o n , sir）8、at p 含量测定9 、 最大或然法（most probable n u m b e r , mpn）计数10,使用脂类生物标志物11 以及氯仿土壤熏蒸法12等。但是，土壤中可培养微生 物比例毕竟极低。有研究者曾估算这一比例只有不足1. 0%(02 %08 %) 1 3 。正因为如此，基于平板培 养法研究土壤微生物多样性存在重大缺陷，免培养技术顺应 而生。所涉及的技术包括磷脂脂肪酸(p h o s p h o 1 i p i d fatty acid analysis, pl fa)

7、分析法14 16、dna / rn a 杂交17、 聚合酶链反应(polymerase chain r e action, pcr)、核糖体 rn a 测序1 8 、(g + c )含量1 9、温度梯度凝胶电泳(tempe r a t u r e gradient g e 1 electro p h o r e s i s , tgge)和变性梯度凝胶电泳(d enaturing gradient g e 1 e 1 ectrophoresis, dgge)、限制片段长度 多态性(restrict ion f ragment 1 e n g t h polymorphism, r f l p

8、) 2 0 , 2 1、d n a 微阵列(dna m i c r o a r r a y ) 2 2 技术(又称“dna阵列”或“ dna芯片”)、 克隆文库分析等方法。过去2 0多年间，人们利用这些技术 手段揭示了很多有关土壤微生物群落的信息2 3。这些 方法各有优缺点，正确选择合适的方法进行研究，有助于更 准确地了解根际土壤微生物群落结构特征。12根际微生物活性和功能多样性的研究方法及根际p g p r活性研究根际微生物活性的经典方法，是将细菌进行培养、 分离并作理化试验。另一个方法是利用细菌在不同培养基上 的生长速率来表征该菌在环境中的生理特性、养分利用特点 和自适应策略24。目前，人

9、们广泛采用某一关键酶活性的测定来表征某类 群微生物的多样性和代谢活性。此外，b i o 1 o g体系也 是应用较为广泛的方法之一 16, 2 5 o另外，通过克 隆构建大片段dn a文库（如b a c library）, 有助于更准确地揭示土壤中可培养和不可培养微生物，以及 土壤微生物生态系统的相关信息2 2。未来土壤微生物 群落结构的研究无疑会大量运用d n a微阵列技术22, 因为该技术可以利用其高特异性特点，将不同活性微生物区 分开，并有助于解释同一菌株在不同环境土壤样本中的生态 位的异同。当然，基因转录、蛋白质组学等技术也是未来微 生物学研究中不可或缺的辅助手段 2 2,2 6 。

10、根 际微生物多样性反映了微生物群落的代谢活跃程度。在土壤 中接种p g p r,只要能存活，无论是否改变微生物群落结 构，都会在一定程度上影响群落的代谢活性15。因此, 接种p g p r是否能在土壤中存活并竞争是一个十分关键 的问题，受物理的（质地、温度和湿度等）、化学的（ph、 养分的可利用性、有机质含量等）以及和根际其他微生物之 间的互作关系等因素的影响。其中，pgpr与根际土著微 生物的互作关系是一个十分重要的影响因子，因为接种pg pr需要在根际形成新的生态位，并在根际定殖，且能竞争 足够的养分。总之，接种pgpr后，要能以有限的群体发 挥应有的生物效应。目前，人们可借助多种技术研究

11、根际土壤微生物活性， 比如前面介绍过的同位素(3h、1 4 c )标记dna的胸 腺喀噪核昔或蛋白质的亮氨酸组分，来估算群落代谢活性和 生长状况7 , 2 7 o此外，还可以用s i r技术定量测 定根际微生物活性8 。2 p g p r生态及遗传多样性近些年来，由于人们愈加深刻地认识到根际生态系统的 重要性，加之p g p r作用机制研究的不断深入2 8, 越来越多的pgpr被筛选出来并加以鉴定。从结果看，很 多属都有pgpr的分布。下面以目前pgpr相对集中的 几个属来阐述其生态特征和多样性。2 . 1 固氮 pgpr(di azot rophi c p g p r)自生固氮菌大概是首个被

12、发现具有促生作用的根际微 生物。自2 0世纪7 0年代，固氮螺菌属(a z o s p i r i 1 1 u m s p .)的菌株就已被分离出并应用于实践2 9 o其他还有能起促生作用且能自生固氮的属种主要有固 氮弓菌属(azoarcus, azonexus, azos p i r a ) 3 0 布克氏菌属(burkho 1 d e ri a s p)、重氮营养葡糖酸醋杆菌(gluconac etobacter diazotrophicus)> 草螺菌属(herbaspi r i 1 1 u m sp)、固氮 菌属(az o t o b a c t e r s p.)和多黏类芽砲杆

13、 菌(p a e n i b a c i 1 1 u s p o 1 y m y x a )等 31。上述这些细菌可以从许多种类植物，包括水稻、 甘蔗、玉米、高粱以及其他谷物，甚至菠萝、咖啡豆的根际 分离到。最近，固氮弓菌因其遗传和代谢多样性而逐步引起研究 者的关注。该属细菌能生长在以竣酸类或乙醇为碳源的培养 基上，而且最适生长温度在3 74 2 °co2 2 杆菌(b a c i 1 1 u s )土壤中的g+杆菌有9 5 %属于芽砲杆菌属(b a c i1 1 u s sp)，其余5%属于节杆菌(art h r o b a c t e r )和弗兰克氏菌(f rank i a )

14、 3 2 o许 多杆菌能在逆境下形成芽胞以增强生存能力，一些杆菌如枯 草芽胞杆菌(bacillus subtilis)还具 有固氮能力3 3。杆菌类的p g p r具备多种促生能力 1 4, 3 4 , 3 5 o23假单胞菌(ps eudomona s )在植物根际土壤g细菌中，假单胞菌是数量最多的一 类，该属中的pg p r也因为促生能力广泛而被人们所熟知 1 4, 3 6 , 3 7 o假单胞菌属细菌生态多样性丰富， 国内外已经从许多植物根际土壤中分离出大量该属的细菌。 假单胞菌细菌往往代谢功能多样，可以产生抗生素、嗜铁素 或氧类化合物等多种代谢物3 8。这些代谢物通过抑制 其他有害微生

15、物以及帮助植物吸收土壤养分，从而影响根际 生态环境。2 . 4 根瘤菌(rh i z o b i a )这里提及的根瘤菌是指能在非豆科植物根际进行非特 异性定殖，并释放促生调控因子，如嗜铁素、氧类化合物或 进行溶磷等作用，提高土壤养分的可利用性3 9。已有 报道指出，在作物和一些非豆科植物轮作后，其根际微生物 数量会大幅增加4 0 ,这对随后的作物生长十分有益4 1 o3 p g p r筛选策略由于野外植物根际土壤是pgpr高密度集中地，因此 该区域成为筛选p g p r的最佳来源地。进行筛选工作时， 不同土壤类型、植物种类、季节以及植物生长期都必须考虑, 以保证筛选到最多的菌株。且一般土壤根

16、际有2 %5 %的 细菌属于p g p ro由此可见，野外植物根际是筛选pgp r的最佳来源地4, 4 2。细菌成为p g p r的先决条 件是，当被接种后，能在根际土壤微生物群体中表现出相当 的竞争力。筛选pgpr的第一步工作，是获得足够多的根际土壤 细菌。通常认为根际土壤是指紧密附着在植物根表（13 mm区域）的土壤。试验中，通常将植物根表土壤剧烈抖掉 后，仍紧密附着的土壤作为根际土壤，用于筛选工作。当然, 根据研究需要，除了根际土壤细菌，也可筛选根际内生细菌, 因为这部分细菌也有不少是pgpro也有一些研究者将植 物根用自来水轻柔冲洗，仍附着的土壤被看作根际土壤而进 行p g p r筛选

17、。根际土壤充分悬浮于无菌水、磷酸缓冲液或生理盐水。 一些化合物如焦磷酸盐可作为土壤分散剂，但也可以影响细 胞膜的通透性43。一些化学分散剂，如螯合剂可以用 单价的阳离子（n a +）交换土壤颗粒的多价阳离子（c a 2 +）,从而减弱土壤颗粒对细菌细胞的离子吸附作用。不 少研究者用亚氨基二乙酸制成的离子交换树脂，如d o w e x a 1 44或 chelex-100 45, 46 0 其他的一些分散剂有t r i s缓冲液或六偏磷酸钠4 7。 由于微生物细胞被其胞外聚合物紧密附着于土壤颗粒，有时 也会使用去污剂。macdona ld4 4曾用0. 1% 的脱氧胆酸钠作为去污剂，同时用d o

18、 w e x al作分散 剂处理，土壤微生物的浸出率可提高8 4 %o后来，h e r 011等45将此方法作了改进，用che 1 e x 100替代d o w e x a 1 ,同时用聚乙二醇60 0 0(peg 6000)溶解并分散土壤微生物。还有人在用口丫噪橙染色计数土壤细菌数量时，用0. 2 %的六偏磷酸 钠作为溶剂10。此外，柠檬酸盐缓冲剂作土壤溶剂研 究微生物细胞膜磷脂特性48, w i n o g r a d s k y溶液用于分子生物学手段(ard ra. d gg e或re p-p c r等)研究微生物多样性。化学浸出法一般要结合物理法，可分为3类：摇荡法、混合法(均质或研磨

19、) 和超声波法。摇荡法是这3种方法中效率最低但却适用于一 些敏感型的细菌或噬菌体。均质化处理会破坏一些细胞结 构，特别是g 细菌，导致浸出液具有选择性。轻微均质化 处理结合化学分散剂的使用往往具有更高的效率4 9。 超声波处理是这3种方法中效率最髙的方法，但对一些黏性 土壤，需要对样品进行预处理50。然而，很多如g 的敏感型细菌会在处理过程中遭到不同程度的破坏，当然， 选择较小频率的超声波处理可以避免这一情况的发生。当获得足够多的根际细菌后，有如下两个策略可以筛选到所需的pgpr：根据前文介绍的pgpr-般比较集 中的几个属，通过选择性培养基和培养方法筛选目标pgpr o例如，founoune

20、等5 1 用选择性培养基将荧光假单胞菌(pseudomonas f 1 u o r e s c e n s )从刺槐根际筛选出来；将所得到的根际细菌进 行体外促生能力测定，保留具有促生潜力的菌株。然后对所 得菌株进行遗传学试验，剔除同一属里相似的一些菌株，尽 可能获得多个属里不同功能的有益菌4 2, 5 2 , 5 3 o 上述的体外促生能力试验包括：测定促进植物生长的 一些激素（如茁长素、赤霉素、细胞分裂素和生长素等）； 1一氨基环丙烷一 1 一竣酸脱氨酶（ac c脱氨酶，1一 am inocyc 1 opropanecarboxyl i c acid）活性检测，该酶能降解乙烯前体acc,从

21、 而降低植株体内乙烯的水平，促进根系发育5 4；溶 磷能力测试，细菌的溶磷能力有助于植物吸收磷素5 5； 产嗜铁素能力测定，能帮助植物吸收铁质5 6；固 氮能力测定3 1；测定细菌产生某些能降解病原真菌 细胞壁的酶（如几丁质酶或b 1 , 3葡聚糖酶）5 2 o通过体外促生能力筛选pgpr是一条可行途径，但也 存在一定局限性。一些菌株的生化途径是诱导型的，也就是 说，一些功能在某一环境条件下是表达的，但换个环境或改 变某个培养条件就不表达了。因此，试验中往往会出现一些 pgpr菌株在实验室条件下是有效的，但在根际条件下却 失去这种作用。比如，一些与土壤磷素或铁质等养分相关的 pgpr，往往在土

22、壤磷素或铁质含量丰富的情况下作用不 明显。还有一个问题值得关注，一些具有抗病能力的细菌在传 代过程中，由于该菌产生的特异性转化酶(si t e s p e c i f i c i n v e r t a s e)容易使其发生“相位 变异"(pha s e v a r i a t i on),当发生这种 情况后，细菌的某些表型会发生重大变化。这也是一些细菌 在实验室条件下表现出pgpr特性，但一段时间后，促生 能力却消失的原因之一 57。筛选工作之后，对体外试验获得成功的pgpr菌株还 应该在实际植物生长过程中起到相同的作用。值得注意的 是，pgpr往往对不同的植物所起作用不同58,但

23、 具体原因至今仍不清楚，此外pgpr在根际的竞争机制也 不十分明了。接种pgpr可能会改变根际微生物群落，这 有可能对植物间接促生5 9。当然，接种pgpr也不 一定会改变根际微生物群落，也有可能只建立自身的群落， 但并不改变根际微生物群落59。最近的一些关于pgpr筛选的报道，都遵循上述策 略。kumar等】6 0从生长在贫瘠土壤的番茄根际分 离出细菌，再通过解磷、产iaa、产hcn、产嗜铁素、 几丁质酶和b 1 , 3 葡聚糖酶活性测定，确定多株细菌 具有促生潜力，并在随后的芝麻种植中进一步试验，确立1 株细菌(pseudomonas aeruginosa l e s 4)具有明显促生能力

24、；j h a等6 1 采集低氮 土壤的水稻根际土壤，用不同碳源和不同ph的无氮介质进 行富集培养，从中筛选出多株固氮细菌；a h m a d等6 2 则采用3种选择性培养基(jensen' s med i u m, king's b med i u m, n u t r i e n t agar)分别将不同植物根际土壤的固氮菌、 假单胞菌和芽胞杆菌分离出来，再通过上述常用的促生指标 逐一进行鉴定，从而分离出目标pgpro4展望研究者对微生物生态学的研究逐渐趋热，反映了微生物 在生态系统中的重要性。土壤微生物是生物圈中物质能量循 环的重要组成成分，在植物根际，这一功能尤为显著。植

25、物 通过根际分泌有机物质，高选择性地选择适合其健康生长的 细菌，导致根际细菌多样性减少，但却为筛选植物根际促生 菌提供了可靠来源。接种pgpr可能会对根际微生物群落产生影响，由于 这种影响关系到pgpr的作用效果，因而需要对此详加研 究。另外值得关注的是，由于关系到pgpr和植物的互作 关系，pgpr和其他微生物的''对话机制”(如群体感应 等)值得进一步研究。今后需要进一步加强根际微生物生态学研究，这有助于 获得一些不同功能的微生物，并帮助人们解决不同的环境问 题。未来pgpr生态学研究会越来越多地应用一些先进技 术，如dna/rna微阵列技术，更好地揭示pgpr结构及功能多

26、样性。此外，为提髙pgpr的应用效果，细菌 群体感应等机制还有待进一步研究。参考文献:1 hi l t n e r l b e r n e u e rerf ahrungen u n d prob 1 e m eu f dem g e b i e t e d e r b o d e n bkteriologie u n t e r b e s o n dr e r berliksichtigung d e r gti n dti n g u n g u n d b r a c h ej aten d e r deut s c h e nt s c h a f t gesel 1 scha9 0

27、 4,9 8: 5 9 - 7 8 b 0 t tne r p, p an s um,zmodel 1 i n gthei c mattj.plant and1 9 9 9,1 6 ( 1 - 2 )： 15-25 3n a u e r h. biological c o n t r o1 o f soi 1 borne diseasesb y rhizobacteria j z e i t sc h r i f t fur pf 1 anzenkrankhi t e n u n d pflanzenaschutz,998， 1 0 5 ( 4 )： 3 2 9 - 3 4 8 4 garci

28、a j a l,p r 0 b an1cv ar ia b11i tcter iafr0mw0ns0ff0urlesba sed0na a, ramos b,journaly0frh1z0b11dp0pu1atup1nusspeca 1 genepcr-rapd s0 rh e a d d l,e t al. functidiversityo f m i c r o b io f plant n u t rtion and soil sc i e n c e , 200 ,16 4 ( 1 )： 1 7 5 m a r i l l e y l , a r a g n 0 phylogeneti

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30、 6 ( 9 )： 110 1-110 8 7 b?約？約th a e, arnebran t a k growth rate and r e s p o n s e o f bacterial c o m m u n i ties t o p h i n limed and a s h treated forest soils j soil biology and b i o c h e m i s t r y , 1 9 9 4, 2 6 ( 8 )： 995 10 0 18 anderson j pe, d oms c h k h. a physiological m e t h o d

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32、eichardt w,a, d e jesus r,r ob ia 1p o p u 1ne xp er i m e n tm sja p p 1 i eat10nsh1ftsa1r1c esystds011ec010e t a 1 m iy ,2 0 0 1, 1 7 ( 2 )： 15 1-16 3 11 hopkins d w, ma c nauh t o n a s j ,o'donnell aa dispersion andn t i a 1 n i q u e ycentforr i f u g a t irepresens a m p 1 i n gfrom y andm

33、 isoil j .b i o c h e m id1ffer0ntectat1vegan1smb1010199192c r o o rsoils t r y ,(3 )： 2 1 7 - 2 2 5 12 v an c e e d,brookesac,j enk i n s 0 n d sa n extact ion methodfor m e a s u rn g soil microbials cj soil biology and b iochemistry, 1 9 8 7,1 9 ( 6 )： 703-7 0 7 13 bakken l r, olsen r a. d n a c

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36、wth when inoculated with p g p r st rain b a c i 1 1 u s 1 i c h e n i f o r mis j environmental and e xperimental bo t any, 2 0 0 3, 4 9 (1 ): 6 1-68 16 grayston sj, griffith g s, mawdsleyl,a c c o u nting f oabilitytempuplande m s j .soiliochemistry,2 0 0 1,3 3(4-5 )：17 griffs , ritzk, e b b l e w

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45、： 4 8 7 - 5 0 6 30 re inhol d-hu r e k b, h u r e k t reassessment o f t h e t axonomi c s t r u c ture o f the diazotrophic genus a z o a r c u s s e n s u 1 a t oand desc r i p t i o n o fthreenew genera and new species, a z o v i brio r e s t r i c tus gen nov, sp. nov., a z o s p i r a o r y z a

46、 e g en. nov.， sp. nov. and azo nexus fungiphi lus gen nov j international journal o f sys tema tic and e v o 1 u t i o n a r y microbiology, 2 0 0 0, 5 0(2 )： 6 4 9 - 6 5 9 31 v e s s e y j k plant g r o w t h promoting rhizobact e r i a a s bioferti 1 izers j plant and soil, 2 0 0 3, 2 5 5 ( 2 )：

47、5 7 1 - 5 8 6 32 garb eva p, van veen j a, van elsas j d p r e d o m i n a n t b a c i 1 1 u s s p p in a g r i c u 1 t u r a 1 soil under d i f f ere nt manageme nt regimes detected v i a pcr dgge j m i c r o b i a 1 ecology, 2 0 0 3, 4 5 (3 )： 3 0 2 - 3 1 6 33 t i mmu s k s , n i c an d e r b, gra

48、nhall u, et al cyto kinin production b y p a e n i b a c i 1 1 u s polymyxa j soil biology and biochemistry, 1 999, 3 1 ( 1 3 )： 1 8 4 7 - 1 8 5 2 34 kokalis-burelle n, k l o e p p e r j w, reddy m s p 1 ant growth promot ing r h i zobacteria a s transplant a mendment s and their e f f e c t s o n i

49、ndigenous r h i z o s p h ere microorganisms j a p p lied soil ecology, 2006, 31(1 2 )： 9 1 100 35 probanza a, garcia j a l, palom i no m r, e t al p1 n u s p i n e a l s e e d 1 i n g g r o wth and b a c terial r h i z o s p here structure after i n o c u 1 a t i o n with p g p r b a c i 1 1 u s (b

50、 licheniformis c e c t 5 1 0 6 and b p u m i 1 u s c e c t 510 5 ) j a p p 1 i e d soil ecology,2 0 0 2, 2 0 ( 2 )： 7 5 - 8 4 36 patten c l, glick b r regulation o f i n d o 1 e a c e t i c acid production i n p s eudomona s put i d a g r 1 2 2 b y t ryptophan and the stationary phasesigma factorr p

51、 o s j canadian journalf microbiology,2 0 0 2,4 8 ( 7 )：3 7mane r 0 fg,r amo sb,f culttedion,growth,andt r o g e n fs e e d 1 i n g s j .o f plant n u t r i t3 , 2 6 ( 5 )： 1 1 0 1 - 1 1 1 5 3 8charest mh,b e au c hamp c j , an t 0 un h effects o f the humic subs tances o f d e i n k i n g paper s 1

52、 u d g e o n the antagoni sm be tween two compost bacteria and pyt h i u m ulti m u m j fems m icrobiology e c o 1 o g y , 2 0 0 5, 5 2 ( 2 )： 2 1 9 - 2 2 7 39 an t 0 un h, b e auchamp cj, goussard n, e t al potento f r h i z o b i u m and b ru m species a s pgrow th prom oting r h io n non 1 egume

53、s： r a d i s h e s ( r a p h al)j plant a n41 9 9 8, 2 0 4 ( 1 )： 5 7 - 6 7 0 y ann i y g, r i z k r y, c 0 rich v, e t al. natural end o p h y t i c association b e t w e e n r h i z o b i u m leguminosaru m bv. t r i f o 1 i i and rice r o o t s and assessme nt of its potent i a 1 t o promote rice growth j plant and soil,1 9 9 7, 1 9 4 ( 1 - 2 )： 99-1 14.l u p w a y i n, claytong,