蔬菜农药残留的快速检测技术ppt课件

1、蔬菜农药残留的快速检测方法概述蔬菜农药残留的快速检测方法概述目前农药在蔬菜中的残留问题目前农药在蔬菜中的残留问题l农药是把“双刃剑，对促进农业增产有极其重要的作用。但由于农药本身固有的化学属性和对其运用不当，导致农产品农药残留严重超标，严重危害到宽广人民群众的身体安康。l在我国农药中，70为有机磷农药，而在我国消费运用的有机磷农药中，70为剧毒、高毒类，而且较多是制止在蔬菜作物上运用的。农药中毒事件常有报道农药中毒事件常有报道 ，究其缘由，究其缘由 l1.农产品不按规定的用药量、次数、方法或平安间隔期施药，或施用不允许在蔬菜上运用的剧毒、高毒农药；l2.如今规范施行的农药残留测定需求经过有机溶

2、剂提取、净化和用大型分析仪器进展，无法对廉价的蔬菜进展随时随地或快速的检测而构成的监管不到位。 目前所运用的农药按其化学构造大致可分目前所运用的农药按其化学构造大致可分为以下几类：为以下几类： l有机氯类；l有机磷类；l氨基甲酸酯类；l拟除虫菊酯类等。 l根据以上情况，制定出有机磷和氨基甲酸酯类农药的快速检测方法，加强对农药残留的快速检测已成为非常必要的监管措施。农药残留主要的检测方法有两种：农药残留主要的检测方法有两种：色谱检测法 色谱检测法用作农残定量分析，可为农药残留执法提供根据。 速测仪法 速测仪法只能作农残定性分析，对于检测人员技术程度要求低，易于在基层推行等特点，是目前我国控制高毒

3、农药残留的一种有效方法，也是目前国内和我省运用最为广泛的农药残留快速检测方法。速测仪法的主要优点：速测仪法的主要优点：l1. 该方法具有快速方便、前处置简单、本钱较低等优点，适用于现场定性测定，特别适宜在蔬菜消费基地、零售市场及农产品检测部门开展快速检测任务。l2. 该方法可对有农药残留的蔬菜进展粗筛，将一部分农药残留含量较高的蔬菜控制在市场之外，防止因农药残留发生中毒事件。速测仪法的主要缺陷速测仪法的主要缺陷:l1. 酶试剂易失活，导致反响不稳定，检测结果误差较大，反复性不好， 实践运用中确实认率大约为 60%70%左右；l2. 存在检测盲区，只能检测有机磷和氨基甲酸酯两类农药，不能检测有机

4、氯类、菊酯和其它类别的剧毒农药； l3. 不适宜检测葱蒜类、香菜、韭菜、番茄、胡萝卜、茭白、蘑菇、花椒等 14 种容易出现假阳性的农产品；速测仪的检测方法有两种速测仪的检测方法有两种:(GB/T5009.199-2003)速测卡法纸片法酶抑制率法分光光度法 两种快速检测方法的技术原理l根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中的乙酰胆碱酯酶的活性呵斥神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，导致昆虫中毒致死的原理而设计。l假设蔬菜中不含有机磷和氨基甲酸酯类农药，乙酰胆碱酯酶水解后，水解产物可与显色剂反响产生颜色。两种快速检测方法的技术原理l假设蔬菜中含可以抑制乙酰胆碱酯酶的活性

5、的有机磷和氨基甲酸酯类农药，这种酶就不能被水解，从而无显色反响。l在溶液中参与乙酰胆碱酯酶和显色剂，用此判别有机磷和氨基甲酸酯类农药残留能否存在。速测卡法纸片法速测卡法纸片法l1.试剂试剂 l1.1 固化有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的纸片固化有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的纸片(速测速测卡卡)。l1.2 pH7.5缓冲溶液：分别取缓冲溶液：分别取15.0g磷酸氢二钠磷酸氢二钠(Na2HP0412H2O)与与1.59g无水磷酸二氢钾无水磷酸二氢钾KH2P04，用，用500mL蒸馏水溶解。蒸馏水溶解。l2仪器仪器l2.1常量天平常量天平 有条件时配备有条件时配备372恒温安装恒温安装速测卡法纸片法速测卡

6、法纸片法l3.分析步骤分析步骤l3.1整体测定法整体测定法l3.1.1选取有代表性的蔬菜样品，擦去外表泥土，剪成选取有代表性的蔬菜样品，擦去外表泥土，剪成1cm左右见方碎片，取左右见方碎片，取5g放入带盖瓶中，参与放入带盖瓶中，参与10mL缓冲溶液，震摇缓冲溶液，震摇50次，静置次，静置2min以上。以上。l3.1.2取一片速测卡，用白色药片沾取提取液，放置取一片速测卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进展预反响，有条件时在以上进展预反响，有条件时在37恒温安装中恒温安装中放置放置10min。预反响后的药片外表必需坚持潮湿。预反响后的药片外表必需坚持潮湿。 速测卡法纸片法速测卡法纸片法

7、l3.1.3将速测卡对折，用手捏3min或用恒温安装恒温3min，使红色药片与白色药片叠合反响。l3.1.4每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。 速测卡法纸片法速测卡法纸片法 l3.2外表测定法粗筛法l3.2.1擦去蔬菜外表泥土，滴23滴缓冲溶液在蔬菜外表，用另一片蔬菜在滴液处悄然摩擦。l3.2.2取一片速测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。速测卡法纸片法速测卡法纸片法l3.2.3放置10min以上进展预反响，有条件时在37 恒温安装中放置10min。预反响后的药片外表必需坚持潮湿。l3.2.4将速测卡对折，用手捏3min或用恒温安装恒温3min，使红色药片与白色药片叠合反响。l3.2.5每批

8、测定应设一个缓冲液的空白对照卡。结果断定结果断定l 阳性结果阴性结果白色 蓝色 结果断定结果断定l结果以酶被有机磷或氨基甲酸酯类农药抑制(为阳性)、未抑制为阴性表示。l与空白对照卡比较，白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果。白色药片变为天蓝色或与空白对照卡一样，为阴性结果。l对阳性结果的样品，可用其它分析方法进一步确定详细农药种类和含量。速测卡法纸片法本卷须知速测卡法纸片法本卷须知l1.有些蔬菜如生姜、葱、蒜、辣椒和番茄等的汁液中含有破坏酶 活性或者使蓝色产物褪色的物质， 处置这类蔬菜时，不要让其汁液太多释放出来，不要剪得太碎，浸提时间不宜过长，必要时可采用整枝蔬菜浸提或采用外表测定法进展测

9、定。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株(体)蔬菜浸提的方法，减少色素的干扰。速测卡法纸片法本卷须知速测卡法纸片法本卷须知l2.试纸上的提取液不可太多而溢出试纸，亦不可太少而使反响不完全。 l3.最好将每一批样品处置好后一同加样，以免时间过长蒸干。 速测卡法纸片法本卷须知速测卡法纸片法本卷须知l4.当温度条件低于37，酶反响的速度随之放慢，药片加液后放置反响的时间应相对延伸，延伸时间确实定，应以空白对照卡用体温手指捏3分钟时可以变蓝，即可往下操作。留意样品放置的时间应与空白对照卡放置的时间一致才有可比性。l5.空白对照卡不变色的缘由：一是药片外表缓冲溶液加的少，预反响后的药片外表不够潮湿，二

10、是温度太低。速测卡法纸片法本卷须知速测卡法纸片法本卷须知l6.如有条件，将农药速测卡放在 10以下保管效果会更好，每小包产品开封后最好在 三天内用完，如用不完，可放入将有变色硅胶吸潮剂的瓶中密封保管，如发现农药速测卡的红色 药片由鲜红橙色变为暗淡的褐红色，阐明纸片已吸潮失效。 PR-3 便携式农药残毒快速检测仪便携式农药残毒快速检测仪 l操作步骤 l1.接通电源，右侧开关拨至“开，翻开上盖按“START键预热；l2.当预热到达设置反响温度TEMP时，听到“哗一声，屏幕显示“TEMP1，预热终了，等待倒计时；l3.去试纸外膜，插入试纸白片在下端，在白片上分别加1-2滴提取液；PR-3 便携式农药

11、残毒快速检测仪便携式农药残毒快速检测仪 l4.再次按“START键，单片电脑开场“TEMP1倒计时；l5.当听到延续“哗、哗、哗声，屏幕显示“CLOS，提示合上前盖，进入“TEMP2倒计时；l6.当听到六声“哗、哗、哗音，本次操作终了，翻开上盖察看试纸颜色变化；l7.试纸显示蓝色为阴性，浅蓝色为弱阳性，白色为阳性；l8.测试终了，向上取下试纸进展下一次的检测。l 酶抑制率法分光光度法酶抑制率法分光光度法l1.试剂试剂l1.1 pH8.0缓冲溶液：分别取缓冲溶液：分别取11.9g无水磷酸无水磷酸氢二钾与氢二钾与3.2g磷酸二氢钾，用磷酸二氢钾，用1000ml蒸馏水蒸馏水溶解。溶解。l1.2 显色

12、剂：分别取显色剂：分别取160mg二硫代二硝基苯二硫代二硝基苯甲酸甲酸DTNB和和15.6mg碳酸氢钠，用碳酸氢钠，用20ml缓冲溶液溶解，缓冲溶液溶解，4冰箱中保管。冰箱中保管。酶抑制率法分光光度法酶抑制率法分光光度法 l1.3 底物：取25.0mg硫代乙酰胆碱，加3.0ml蒸馏水溶解，摇匀后置4 冰箱中保管备用。保管期不超越两周。l1.4 乙酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解，3min的吸光度变化Ao值应控制在0.3以上。摇匀后置4冰箱中保管备用，保管期不超越四天。酶抑制率法分光光度法酶抑制率法分光光度法l1.5 可选用由以上试剂制备的试剂盒。乙酰胆碱酯酶的Ao值应控制在0.3以

13、上。l2.仪器l2.1 分光光度计或相应测定仪及常量天平。酶抑制率法分光光度法酶抑制率法分光光度法l3.分析步骤分析步骤l3.1 样品处置：选取有代表性的蔬菜样品，冲样品处置：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉外表泥土，剪成洗掉外表泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样左右见方碎片，取样品品1g，放入烧杯或提取瓶中，参与，放入烧杯或提取瓶中，参与5mL缓冲缓冲溶液，振荡溶液，振荡12min，倒出提取液，静置，倒出提取液，静置35min，待用。，待用。酶抑制率法分光光度法酶抑制率法分光光度法l3.2 对照溶液测试：先于试管中参与2.5mL缓冲溶液，再参与0.1mL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37放置

14、15min以上(每批样品的控制时间应一致)。参与0.1mL底物摇匀，此时检液开场显色反响，应立刻放入仪器比色池中，记录反响3min的吸光度变化值Ao。酶抑制率法分光光度法酶抑制率法分光光度法l3.3 样品溶液测试：先于试管中参与2.5mL样品提取液，其它操作与对照溶液测试一样，记录反响3min的吸光度变化值At。结果的表述计算结果的表述计算l检测结果按公式计算：l抑制率()=(Ao-At)Ao100l式中：Ao-对照溶液反响3min吸光度的变化值；lAt-样品溶液反响3min吸光度的变化值；结果断定结果断定l结果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。当蔬菜样品提取液对酶的抑制率50时，表示蔬菜中有高

15、剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。阳性结果的样品需求反复检验2次以上。对阳性结果的样品，可用其它方法进一步确定详细农药种类和含量。酶抑制率法本卷须知酶抑制率法本卷须知l1. 葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处置这类样品时，可采取整株(体)蔬菜浸提。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株(体)蔬菜浸提的方法，减少色素的干扰。酶抑制率法本卷须知酶抑制率法本卷须知l2.当温度条件低于37，酶反响的速度随之放慢，参与酶液和显色剂后放置反响的时间应相对延伸，延伸时间确实定，应以胆碱酯酶空白对照测试3min的吸光度变化A

16、o值在0.3以上，即可往下操作。留意样品放置时间应与空白对照溶液放置时间一致才有可比性。胆碱酯酶空白对照溶液3min的吸光度变化Ao值0.3的缘由：一是酶的活性不够，二是温度太低。酶抑制率法本卷须知酶抑制率法本卷须知l3.当吸光度大到无法读取时，阐明测定液浑浊有干扰。 l4.待测样品放入分光光度计速度的影响。待测样品参与底物后，应马上摇匀，放入测定仪，否那么影响数据准确性。酶抑制率法本卷须知酶抑制率法本卷须知l5.比色杯的透光度影响。坚持比色杯的清洁，使比色杯有好的透光度是减少检测误差的必要条件。比色杯可定期用乙醇进展清洗。l6.微量移液器的影响。微量移液器要公用，贴上标签，防止交叉运用呵斥试

17、剂污染；试剂从试剂瓶吸出后，不能再放回瓶中，坚持只吸不进的原那么，防止试剂污染。酶抑制率法本卷须知酶抑制率法本卷须知l7.药品配制过程中的影响。磷酸盐缓冲液的配置一定要用蒸馏水、纯真水或去离子水，不可运用矿物质水，否那么在丈量过程中干扰较大，影响准确性。信仪科技信仪科技PR-203-6T农药残毒快速检测仪农药残毒快速检测仪 l1.试剂制备l1.1缓冲液：将缓冲液试剂袋中的试剂倒入烧杯，溶于500ml蒸馏水中，溶解，混匀即可。室温保管。l1.2 酶试剂：目前提供的酶试剂已配成溶液可直接运用。0-5环境下保管。信仪科技信仪科技PR-203-6T农药残毒快速检测仪农药残毒快速检测仪l1.3 显色剂：

18、向标有“显色剂的试剂瓶中用可调定量移液器参与25ml缓冲液，溶解、混匀即可。室温保管。l1.4 底物：向标有“底物的试剂瓶中用可调定量移液器参与2.5ml蒸馏水，溶解、混匀即可。0-5环境下保管。信仪科技信仪科技PR-203-6T农药残毒快速检测仪农药残毒快速检测仪l2. 仪器测试操作步骤：l2.1 待测试液的制备：用天平称取2g有代表性的果蔬样品叶菜剪成1厘米左右见方的菜样，块根菜取1厘米见方表皮样品放入三角瓶中，参与10ml缓冲液，用手振荡提取2分钟后用滤纸干滤，取出清液即为待测液。信仪科技信仪科技PR-203-6T农药残毒快速检测仪农药残毒快速检测仪l2.2 对照溶液的测试：在1cm比色

19、皿中，参与酶100l，参与缓冲液2.5mL，用保鲜膜盖住比色皿口，用右手大拇指按住保鲜膜，食指托住比色皿的底部，拿起摇匀，再参与显色剂100l,参与底物20l，同样用保鲜膜盖住比色皿口，拿起摇匀，仪器强迫归“100%后立刻放入仪器第一通道中，按下“对照键进展测试。信仪科技信仪科技PR-203-6T农药残毒快速检测仪农药残毒快速检测仪l2.3 样品溶液的测试：在比色皿中，参与酶100l，参与待测试液2.5mL，摇匀，静置10分钟后，参与显色剂100l，参与底物20l，摇匀，仪器强迫归“100%后立刻放入仪器比色皿池中，按下“样品键进展测试。信仪科技信仪科技PR-203-6T农药残毒快速检测仪农药残毒快速检测仪l2.4 测试结果的判读：样品的抑制率在40%-50%之间为可疑农残超标样品，抑制率大于50%为农残超标样品，抑制率40%的样品需求反复检验2次以上，如有必要时，可用气相色谱等方法作进一步确认。台湾农药残毒快速检测仪台湾农药残毒快速检测仪9