梁雅芝开题报告书

1、 本科毕业论文（设计）开题报告书探讨车前子抗炎有效成分及其作用机制二级学院药科学院专 业药物制剂（天然药物制剂方向）班 级2012级（1）班学生姓名梁雅芝学 号1203514155指导教师臧林泉2015年 9 月 15 日拟定的毕业论文（设计）题目探讨车前子抗炎有效成分及其作用机制一、选题依据（包括目的、意义、国内外现状和发展趋势，主要参考文献）：1、目的与意义：痛风病是嘌呤代谢紊乱所致的疾病，以高尿酸血症、急性关节炎反复发作、痛风石形成、慢性关节炎和关节畸形为临床特征，病程后期常出现肾尿酸结石和痛风性肾实质病变。研究发现1,2，车前子多糖(PSP)具有抗炎镇痛效果。通过抑制一氧化氮合酶、环加

2、氧酶的表达，减少一氧化氮和前列腺素 E2产生来发挥抗炎作用的；且能抑制滑膜炎症中肿瘤坏死因子和白细胞介素12等细胞因子的分泌；对急性期和晚期炎性反应均有抑制作用，表现为减轻炎性因子渗出，抑制白细胞趋化。痛风病治疗上以别嘌呤醇、立加利仙为代表药，但副作用较多，故研究中药车前子的抗炎镇痛的作用机制为临床用药提供理论依据。2、 国内外现状和发展趋势车前子是车前科植物车前 Plantago asiatica L.或平车前 Plantago depressa wild.成熟的干燥种子，性味甘、寒，入肾、膀胱经，具有利水、清热、明目，祛痰的功效。车前子种皮细胞壁含有 10%30%黏液质，是一种亲水性的胶体

3、，属多糖类物质，是车前子有效成分，被称为车前子多糖(PSP)。车前子多糖具有润肠通便、降血糖、降血脂、抗氧化、抑制抑制平滑肌细胞增殖、保护内皮细胞等功效。近年来有关车前子的化学成分、药理作用等基础研究报道增多，这不仅为阐明其临床效果提供了依据，也为开发此药拓宽了思路。2.1化学成分研究现代研究表明车前子中含大量粘液质，即多糖类化合物及车前子酸、胆碱、腺嘌呤、琥珀酸、蛋白质、微量元素等。其中多糖类化合物最为丰富，由木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖和半乳糖醛酸等组成的杂多糖，该多糖是一种部分发酵性膳食纤维，具有整肠通便、调节血糖、降低血脂、抗氧化及防治动脉粥样硬化的作用。但其抗炎和抗肿瘤作用

4、方面的研究甚少3。2.2 药理作用研究2.2.1缓泻 车前子多糖是一种亲水性黏胶，双向调节作用。付志红4研究表明大粒车前子多糖能促进小鼠小肠的蠕动，促进排便；明显增加小肠水分的含量，使肠道容积变大，从而软化大便，有利于大便的排出，并对老年小鼠肠粘膜组织的退化具有改善作用。在国外临床上作为容积性泻药用于便秘和非特异性腹泻的治疗，已列入美国、英国、法国、印度等国家药典。2.2.2抗氧化作用 车前子中的多糖、黄酮及麦角甾苷等成分均具有抗氧化作用。周超5，张然6等发现，车前子多糖对羟自由基和超氧阴离子有一定的清除作用，可防止体内活性氧类物质对细胞结构和功能的破坏，将有望作为抗衰老剂、抗氧化剂用于临床及

5、食品加工业中，并可对动脉粥样硬化和冠心病起到一定的防治作用。2.2.3抗炎作用 车前子多糖具有一定的抗炎作用，对多种原因造成的炎症反应均有抑制作用。冯娜7研究发现，车前子多糖在炎症反应初期，能增高血管紧张性、减少充血、改善毛细血管通透性增加，同时能够抑制白细胞的浸润及吞噬反应，减少炎性因子释放。在炎症后期，车前子多糖通过毛细血管和炎细胞的增生，抑制肉芽组织增生，防止粘连及瘢痕形成，减少后遗症。因此，车前子多糖有望成为临床上辅助治疗炎症的药物。2.2.4降低血尿酸水平 车前子可降低血尿酸水平对治疗痛风也有良效8。车前子有显著利尿作用，同时能增加尿酸、尿素及氯化物排泄。现代医学研究证实,车前子、金

6、钱草、茵陈等均有促进尿酸排泄,降低血尿酸的作用,从而控制症状,减少复发或延长间竭期。2.3临床应用现代临床应用中，车前子多用于治疗慢性气管炎，急、慢性细菌性痢疾，高血压病，糖尿病等。同时发现车前子多糖具有免疫抑制活性，可用于治疗与免疫炎性损伤相关的各种疾病，包括肾炎、膀胱炎、前列腺炎、尿道炎、水肿，以及眼葡萄膜炎、角膜基质炎、角膜移植排异反应等眼部疾病，但车前子治疗痛风病的报道鲜有。车前子与土茯苓、金钱草、合用有显著利尿作用，同时能增加尿酸、尿素及氯化物排泄。对治疗痛风病有临床指导意义。但对于复方中是哪味中药又或是哪几味中药的共同作用，其机制尚不是很明确。目前，秋水仙碱是治疗急性痛风性关节炎的

7、特效药,该药使用历史悠久,在痛风急性发作的内服用疗效最好。但秋水仙碱的有效剂量与中毒剂量非常接近,有较大的不良反应,服药后的患者在临床症状完全缓解之前可有恶心呕吐、腹痛腹泻、厌食等,且该药还可引起白细胞减少、血小板减少等骨髓抑制表现以及脱发、肝肾功能损害、精神抑郁等。在治疗痛风过程中，抗炎止痛是一个重要的过程。应用中西医结合方法治疗急性痛风性关节炎取得了令人满意的效果。中医药材车前子既有较好的消炎镇痛作用,又有较好的降血尿酸作用,同时大大降低了毒副作用,体现了中医药在治疗急性痛风方面的优势，这是将来的研究发展趋势之一。3、参考文献1 刘强, 牟洪波, 刘元禄. 中药车前子对小鼠气囊滑膜炎细胞因

8、子TNF- 及 IL-12 影响的实验研究J中华中医药学刊，2007，25( 4) : 816-818 2 冯娜,刘芳,郭会彩,等车前子多糖抗炎作用机制的实验研究J. 天津医药: 2012，40(6)：599-601.3 冯娜车前子多糖的抗炎和抗肿瘤作用研究D河北：河北医科大学，20124 付志红车前子营养与活性成分及其保健功能研究D南昌：南昌大学，2005.5 周超车前子多糖的分离纯化及其功能性质研究D南昌：南昌大学，2007.6 张然, 袁从英, 冯娜,等. 车前子多糖对糖尿病小鼠氧化应激的影响J. 天津医药：2011，39(3)：253-255.7 冯娜车前子多糖的抗炎和抗肿瘤作用研究D

9、河北：河北医科大学，20128 鄢妘痛风病的中药治疗及其机制研究进展J. 亚太传统医药: 2010，6(11)：164-166.9 聂少平,殷军艺,施晓丹,等一种提高车前子多糖黏性的制备方法：中国，201410390932.1 P. 2014-12-0310 王东车前子多糖的研究D辽宁：辽宁中医学院，200211 冯娜,刘芳,郭会彩,等车前子多糖抗炎作用机制的实验研究J. 天津医药: 2012，40(6)：599.12 冯娜车前子多糖的抗炎和抗肿瘤作用研究D河北：河北医科大学，2012二、研究内容（具体研究/设计内容，重点解决的问题，预期结果）：（一）研究内容1车前子采用不同提取工艺抗炎有效成

10、分含量差异。2车前子多糖PSP的薄层色谱TLC鉴别。3建立二甲苯致小鼠耳廓肿胀的炎症模型来观察车前子多糖PSP的抗炎作用。4建立冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的炎症模型来观察车前子多糖PSP的抗炎作用。（二）重点解决的问题1车前子多糖提取工艺的优化。2车前子多糖的抗炎作用及其可能机制。（三）预期结果预期可以摸索出一个具有提取率高，操作简便的车前子多糖提取工艺，通过观察动物炎症模型解释抗炎作用及可能机制。三、研究/设计方案（包括研究/设计方法、技术路线，理论分析、计算、实验方法和步骤及其可行性，可能出现的技术问题及解决办法）：（一）实验方案1、车前子粗多糖的提取1.1.水煮法 称取500g车

11、前子，加入10倍量的蒸馏水于100提取1.5小时，离心过滤、收集滤液。滤渣重复提取1次1小时，合并滤液后减压浓缩至一定体积，即得车前子粗多糖样液。1.1.水提醇沉法 称取干燥的车前子500g加8倍量体积分数70%乙醇浸泡1天,过滤,挥干乙醇。于沸水浴下提取 23 小时，车前子与水的质量体积比（kg/L）为 1:101:30，提取液过滤后收集滤液，滤渣重复提取 1 次；合并两次滤液，减压浓缩，浓缩液中加入乙醇于4静置12小时，离心、收集沉淀，沉淀依次用丙酮、无水乙醚、无水乙醇各洗涤两次，经冷冻干燥得车前子多糖9。1.1.破壁粉碎法取车前子药材500g，粉碎破壁成粗粉，过 20 目筛，采用超声波提

12、取，以 10 倍的液固比加入 70乙醇，超声（频率80KHz) 提取 30min，重复提取 3 次，抽滤，合并提取液，回收乙醇并浓缩至 1000ml，冷却至室温，静置24小时，离心甩滤，得澄清滤液。 2、薄层色谱鉴别2. 1 溶液制备 对照品溶液: 精密称定对照品25mg，置于25mL量瓶中,加70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为 1mg/m L的溶液作为对照品溶液。供试品溶液:精密量1制备所得纯车前子多糖溶液5mL，置50mL量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，再精密量取1mL，置100mL量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。2. 2 薄层层析 吸取上述对照品

13、溶液和供试品溶液各5L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酷一甲醇一乙酸一水(13:3:3:3)为展开剂,展开,取出,凉干,喷以苯胺一邻苯二甲酸溶液,110烘烤10分钟至显色清晰10。3、动物造模3.1. 小鼠耳廓肿胀实验 采用小鼠二甲苯致炎法。将雌性小鼠随机分为5组：每组10只。第1组为阴性对照组，给予同等容量的生理盐水；第2 组为阳性对照组，给予阿司匹林200mg/kg；第35 组分别为低、中、高 PSP 剂量组，分别给予400、800及1600mg/kg 的PSP，灌胃给药，1 次/天，连续5天，末次给药 1 h后在小鼠右耳涂 0.03 m L的二甲苯致炎，左耳涂生理盐水作为自身对照，

14、涂耳2h后处死。沿耳廓基线剪下两耳，用直径为 6 mm 的穿孔器将两耳廓同一部位穿孔取下，以肿胀度抑制率作为炎症肿胀程度的指标，肿胀度抑制率（%）=（给药组肿胀度-对照组肿胀度）/对照组肿胀度×100%。3.2 小鼠腹腔毛细血管通透性实验 采用醋酸致炎法。动物分组、给药剂量、给药途径同小鼠耳廓肿胀实验，末次给药1 h后，尾静脉按10 L/g注射0. 5%伊文斯蓝溶液，随即腹腔注射等量的0.6%冰醋酸致炎，20 min后脱臼处死，腹腔注射6 m L 生理盐水洗涤并取出洗涤液，3000 r/min 离心15min，取上清液用紫外分光光度计，在590 nm测定光密度（OD）值，以反映小鼠腹

15、腔透出伊文思蓝的含量11,12。（二）计算肿胀度抑制率（%）=（给药组肿胀度-对照组肿胀度）/对照组肿胀度×100%。（三）可行性分析1.本课题在立题期间通过查阅国内外文献资料，归纳出三种提取工艺及有效的动物炎症模型的建立，且实验步骤较简单，成功率较高。2.实验人员方面，有经验丰富的药理老师进行指导，并有优秀的研究生师姐师兄以供咨询，保证实验顺利进行。3.原料供需方面，本实验所需原料容易获得；所需仪器为实验室常备器材，准备充分。综上所述，本课题具有可行性。（四）可能出现的技术问题及解决办法可能出现的技术问题：最佳提取工艺条件的确定，车前子多糖主要位于车前子种皮层，其提取率受很多因素的

16、影响。解决方法：通过三种提取工艺的变化，进行多次试验，进行调整优化，探索优化提取工艺四、创新之处：五、工作基础及条件：工作基础：充分查阅国内外相关文献，参考前人实验经验以探索车前子抗炎有效成分的提取工艺和解释抗炎机制；经验丰富的老师的指导和建议。所需试剂：70%乙醇、丙酮、无水乙醚、无水乙醇、二甲苯、冰醋酸、NaCl 溶液、0. 5%伊文斯蓝溶液 所需仪器：葡聚糖凝胶柱、硅胶G薄层板、紫外分光光度计、破壁粉碎机器、穿孔器毕业论文（设计）工作计划时 间工 作 内 容预 期 结 果2015.11.24-2015.12.042015.12.05-2016.01.152016.01.16-2016.02.162016.02.17-2016.03.172016.03.17-2016.04.102016.04.10-2016.05.10查阅文献、综合归纳资料、确定试验方案、撰写开题报告。预实验，初步摸索出车前子多糖的提取工艺。通过探索，不断优化提取工艺，并对其有效物质进行薄层色谱鉴定。建立动物炎症模型来观察车前子多糖 PSP 的抗炎作用。