禽流感抗体研究

1、Zxj种鸡禽流感免疫程序和抗体水平的研究esearch on Immune procedure of avian influenza and the level of antibody in hatched chicken学 院：动物科技专 业：动物医学班 级： 姓 名： 学 号：2012年6月7日目录中文摘要1英文摘要1引言21禽流感的基本概念:22 病原23临床症状及病理变化34 禽流感的诊断45 预防和控制46主要疫苗67本次研究的目的6试验内容61 材料61.1疫苗61.2试验鸡群62 方法72.1种鸡选择72.2免疫程序72.3采血跟踪73结果与分析83.1试验结果83.2 结果分析

2、114讨论12参考文献13IContentsChinese abstract1English abstract1Introduction21 Cocept of avian influenza22 Pathogen23 Symptoms and pathological changes34 Diagnosis of avian influenza45 Prevention and control46 Main vaccine67 Goal of the research6Material and method61 meterial61.1 vaccine61.2 test animal62 M

3、ethod72.1 Choice of hatched chicke72.2 Immune procedure72.3 Track of taking blood73 Analysis of results83.1 Results of the test83.2 Analysis of the results114 Discussion12References13种鸡禽流感免疫程序和抗体水平的研究摘要：取种鸡场鸡群作为试验对象进行禽流感免疫，免疫结果表现H5Re-4株疫苗和H5Re-5株疫苗抗体滴度都达到4log2以上，达到了群体免疫的效果。通过对H5免疫抗体滴度的测试，可以发现在种鸡开产前经

4、3次以上免疫，开产时均能达到较高抗体滴度(H5 抗体滴度大于6log2)，为产蛋期种鸡提供较高的抵抗能力。产蛋期2-3次免疫接种抗体可以维持较稳定的高水平，因而在鸡蛋里也保存了较高的母源抗体，为商品代鸡提供了很好的免疫保护。产蛋期的免疫间隔以12-16周为宜。关键词：种鸡；禽流感；免疫；抗体滴度Research on Immune procedure of avian influenza and the level of antibody in hatched chickenAbstract: Taking the breeder farm flocks as the testing obje

5、ct for bird flu immunization, and the immunization results show H5Re-4 strain vaccine and H5Re-5 strain vaccine antibody titers have reached above 4log2, which reached the herd immunity effect.。After testing the H5 antibody titer, we can find out that chicken after opening more than 3 times of prena

6、tal immune。The open production can reach high antibody titers (H5 antibody titers greater than 6log2)，which can provide good protects of the hatched chicken. After laying 2 - 3 immunization antibodies, it can maintain a more stable and hight level.So the eggs also keep hight maternal,which providing

7、 good immune antibodies for the goods generation chicken. 12-16 weeks immunization interval in the laying period is better.Keywords: Hatched chicken；Avian influenza；Immunization；Antibody titer引言1禽流感的基本概念:流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。而禽流感(Avianhinuenza，Al)则是由A型流感病毒引起的一种禽类的感染和/或疾病综合征。鸡、火鸡、鸭、鹅和鹤鹑等家禽及野鸟、水禽、海鸟

8、等均可感染。该病是世界动物卫生组织(OIE)规定的A类传染病。现时在我国鸡群流行的禽流感病毒主要为H5亚型和H9亚型，能引起感染鸡群生产性能的急剧下降，乃至100%的急性死亡,我国也将其列为一类动物疫病。2 病原引起禽流感的病原为禽流感病毒 (AIV)，属于正粘病毒科流感病毒属，系RNA病毒。流感病毒内部的核心由单链核糖核酸及核蛋白组成，根据核蛋白(NP)与基质蛋白(MP)的抗原性不同可分为A、B、C三型，造成危害的禽流感病毒主要是A型。其病毒粒子核心外有一层脂质囊膜，从脂质中伸出许多微粒，即血凝素(HA)与神经氨酸酶(NA)，后两者是流感病毒的表面抗原，根据H与N的不同可区分为不同亚型。血凝

9、素可和红细胞表面的糖蛋白受体结合而发生红细胞凝集现象，具有亚座禽流感疫苗免疫种鸡后其雏鸡母源抗体变化的研究型和株的特异性。流感病毒有变异的特点，主要是H和N的变异。H有HI-H16，而N仅有N1-Nl0，有时只有一种发生变异，有时两种同时变异。小的变异是抗原的量变，称抗原漂移，形成新的毒株称为变种。当抗原发生较大的变异时，是抗原的质变，称为抗原株变，此时产生新的亚型。流感病毒还可以根据致病性分为高致病性禽流感病毒、低致病性禽流感病毒与无致病性禽流感病毒。3临床症状及病理变化高致病性禽流感表现:发病率和死亡率很高，一般表现为急性死亡，如特急性死亡时病理变化不明显;病程稍长时表现为体温升高、精神高

10、度抑郁、食欲废绝、羽毛松乱;气管哆音、鸣叫;鸡冠、肉髯、眼睑水肿;肉髯发组或坏死;眼结膜发炎，眼鼻腔有较多的浆液性或脓性分泌物，病鸡腿部鳞片有红色或黑色出血;下痢、排出黄绿色稀便;产蛋鸡产蛋量下降，甚至停产;产蛋下降的同时可见软皮蛋，薄皮蛋、畸形蛋增多;有些鸡只出现神经症状。病理变化主要表现在:呼吸系统炎性分泌物、粘膜充血、出血、肺淤血.、气囊内纤维素性渗出、内脏普遍性出血。低致病性禽流感是由HgNZ等血清亚型引起的禽流感。该型的特点是潜伏期长，发病比较缓和，病程稍长，发病率和死亡率较低，差异大，疫情范围逐渐扩大，主要引起产蛋鸡发病，青年鸡和雏鸡发病较少，一旦发病，疫情难控制，疫区难根除。病鸡

11、表现为采食量明显减少，饮水增加，精神沉郁，从鼻腔中流出分泌物，眼结膜发红，流泪，眼角有小气泡，鸡冠尖发给，小数肉髯淤血。呼吸道症状较轻，严重程度不一，有的病鸡表现为咳嗽，有些有呼吸啰音，有的呼吸困难，伸颈张嘴，发出呼吸尖叫声:病鸡水样稀便或黄绿色稀便，产蛋下降的幅度与持续时间各个鸡群完全不同，下降幅度20-80%，一般710天后下降到最低点，在此水平停留2周左右才缓慢回升，恢复期软壳蛋、白壳蛋、沙皮蛋、畸形蛋比例增多。产蛋下降幅度与回升快慢与当地鸡群感染毒株的毒力、有否用过疫苗、饲养管理好坏、是否进行对症治疗等等密切相关。总的情况是鸡群感染的毒株为低毒力的，曾经用过禽流感疫苗，饲养管理条件较好

12、，及时进行了对症治疗等，其产蛋下降幅度较小，产蛋恢复也较快，有的鸡群甚至可恢复到发病时产蛋水平。青年鸡发病时呼吸道症状较明显，发病率高，死亡率与并发感染密切相关，可达5-60%。低致病力禽流感发生时如有其它并发或继发疾病时，症状会更加严重，病情更为复杂、死亡率、产蛋率等会升高。低致病性禽流感的病理变化主要表现为:呼吸炎性渗出、气管充血、出血、肺淤血、气囊纤维素性渗出，消化道轻度出血，生殖道病变为卵泡充血、变形、变性、破裂及卵黄性腹膜炎。4 禽流感的诊断根据流行病学和临床症状可进行初步诊断，其它方法有病理学诊断、病毒分离、测血凝价。血清学诊断方法包括:血凝和血凝抑制试验、琼脂扩散试验，酶联免疫吸

13、附试验，中和试验、免疫荧光技术。其它检测技术有:补体结合反应(CF)，单克隆抗体免疫过氧化物酶染色法、放射免疫测定(RIA)、核酸检测技术，荧光RT-PCR快速检测禽流感病毒等。5 预防和控制禽流感流行比较迅速，预防和控制的根本思路是要坚持以预防为主的防治策略。适用于传染病的生物安全措施，在禽流感的防卫体系中应放在首位，而对禽流感疫情，隔离、封锁、淘汰、扑杀等措施在流行初期对局限性疫情是必要和有效的。唐秀英等报道目前我国Hg、HS、H7亚型禽流感灭活疫苗已经研制成功，并取得了良好的免疫保护效果，经实验表明:仔鸡免疫Al灭活苗后7天产生免疫力保护率为80%、10大保护率95%、14天保护率100

14、%，21天Hl体达到高峰，仔鸡接种疫苗后最高Hl抗体几何平均滴度(GMT)为7.3-8.0109，蛋鸡为8.0-10.5109，免疫后180天抗体效价不低于6.5109，以同型AIV攻击保护率仍可达100%。针对Hg亚型禽流感的免疫防制取得了很大进展。禽流感疫苗在实际应用中取得了良好的效果。国家确立预防禽流感应急预案事关重要，主要是把好进出口检疫关和做好国内禽及禽产品流通的检疫、产地检疫、养殖场血清监测。发现疫情迅速上报，并立即采取封锁、捕杀、消毒措施。对养禽业主来说，严格执行和完善禽场的生物安全措施至关重要，工作的核心是杜绝饲养禽与带毒禽类、包括其它人、哺乳动物和可能带有禽流感病毒的物质接触

15、。具体措施有:养禽场设立消毒设施，对进出车辆和人员消毒;杜绝其它养禽场的人员参观;定期对场区环境进行消毒;病死禽类必须焚烧或深埋;全进全出的饲养方式;防止野鸟进入鸡舍;人员进禽舍要洗澡、换衣、帽、鞋;搞好饲养管理，提高禽只的抵抗力，尽量减少应激发生，注意秋冬、冬春之交季一节气候变化，做好保暖防寒。发生高致病性禽流感时应实行紧急扑杀为主的疫情控制措施。同时注意各环节的消毒、封锁，受威胁区可进行紧急免疫接种。发生低致病力禽流感时主要做好封锁、加强消毒，改善禽的饲养管理。治疗方面以预防继发感染和提高抵抗力为主。做好病禽及病死禽的处理，严禁病死禽流向市场，这一点是防止病情扩散的关键环节。6主要疫苗表达

16、H5亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒(rFPV-HA)、H5亚型禽流感油乳剂全病毒灭活疫苗。H5亚型禽流感灭活疫苗的制备方法为将水相缓慢加入盛有油相的乳化反应釜中,同时开启高速乳化剪切机进行乳化制备疫苗。7本次研究的目的疫苗免疫是预防和控制高致病性禽流感最有效方法,针对我市家禽需要预防的疫病较多,使用的疫苗种类也很多,因此在制定禽流感免疫程序时要兼顾其它疫病的免疫,确保免疫程序科学合理、便于操作。同时定期开展免疫抗体监测,及时掌握免疫抗体水平,通过免疫抗体指导养殖户开展科学防疫。提高防疫防范认识。试验内容1 材料1.1疫苗 AI油苗H5(Re-5+Re-4) ， H5油苗（Re-

17、5+Re-4) ， H5油苗（Re-5+Re-4)新1.2试验鸡群1.2.1取益生种鸡23-11场父母代种鸡（ROSS和AA+）作为试验鸡群。1.2.2分三段式饲养:1-6周龄为育雏期、7-24周龄育成期、25-67周龄为产蛋期。1.2.3育雏、育成期主要是体重控制、性成熟控制、死淘率控制、均匀度控制;产蛋期主要是饲料的控制，疾病防治，体重控制和保证产蛋性能的正常发挥。鸡舍条件:夏季纵，横两向通风，冬季纵向通风，鸡舍环境包括供暖、排风、光照、舍内压力均为自动控制系统控制;还有体重、温度、湿度和采食量与饮水量自动记录功能。育雏前期人工加料，3周龄以后使用链条式自动喂料系统和乳头饮水设备。2 方法

18、2.1种鸡选择 选取益生种鸡23-11场101028批AA+种鸡和101031批ROSS种鸡为试验对象，编号为一批和二批。2.2免疫程序 一批和二批均接种H5（Re-4株和Re-5株），H5疫苗在3周龄、9周龄、21周龄、35周龄、52周龄、62周龄接种，前三次是肌注，后三次是颈部皮下注射。H9在11周龄、21周龄、35周龄、52周龄、62周龄接种，均为肌肉注射。每次接种均为0.5ml。2.3采血跟踪 H5和H9疫苗均在59周龄、61周龄、63周龄、65周龄、67周龄、72周龄、74周龄、75周龄采血。均从翅静脉采血，每份血样采集量为0.5-1.0ml。3结果与分析3.1试验结果表1 1010

19、28批AA+种鸡免疫程序周龄日龄疫苗方法接种时间厂家318AI油苗H5(Re-5+Re-4)肌注左2010.11.18960AI油苗H5(Re-5+Re-4)肌注左2010.12.30英特威1172AI油苗H9肌注左2011.1.11梅里亚21145H5油苗（Re-5+Re-4)肌注左2011.3.25大华农21145H9 油苗肌注右2011.3.25大华农35252H5油苗（Re-5+Re-4)新颈部皮下注射2011.7.10大华农35252H9油苗 新胸肌右2011.7.10大华农52358H5油苗（Re-5+Re-4)颈部皮下注射2011.10.31肇庆大华农52358AI油苗(H9)肌

20、注右2011.10.32广东大华农62428H5油苗（Re-5+Re-4)新颈部皮下注射2012.1.262428AI油苗(H9)肌注右2012.1.3 图1 101028批AA+种鸡H5 Re-4株抗体检测结果101028批次H5Re-4株抗体滴度图0123456789100100200300400500600日龄/d抗体滴度/log2表2 101028批AA+种鸡H5 Re-5株抗体检测结果日龄/d样品数/份平均效价/log2合格率/%419357.69100433407.73100447357.09100475326.69100508246.92100523397.64100538248

21、.00100图2 101028批AA+种鸡H9株抗体检测结果101028批次H9抗体滴度图0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00586894120137152196211233251263279301311331347362377391405419433447475508523538日龄/d抗体滴度/log2表3 101030批ROSS种鸡免疫程序周龄日龄疫苗方法接种时间厂家318AI油苗H5(Re-5+Re-4)肌注左2010.11.17肇庆大华农960AI油苗H5(Re-5+Re-4)肌注左2010.12.29肇庆大华农1172AI油苗H9肌注左2011.1

22、.10广东大华农21145H5油苗（Re-5+Re-4)肌注左2011.3.25大华农21145H9 油苗肌注右2011.3.25大华农35252H5油苗（Re-5+Re-4)新颈部皮下注射2011.7.9大华农35252H9油苗 新胸肌右2011.7.9大华农52358H5油苗（Re-5+Re-4)颈部皮下注射2011.10.30广东永顺52358AI油苗(H9)肌注右2011.10.30广东大华农62428H5油苗（Re-5+Re-4)新颈部皮下注射2012.1.262428AI油苗(H9)肌注右2012.1.3表4 101030批ROSS种鸡H5Re-4株抗体检测结果日龄/d样品数/份平

23、均效价/log2合格率/%402629.58100416699.39100430489.29100444698.70100472617.84100505627.95100520808.38100535618.74100表5 101030批ROSS种鸡H5Re-5株抗体检测结果日龄/d样品数/份平均效价/log2合格率/%402628.31100416698.5410043072862100472627.06100505567.36100520807.60100535598.05100图3 101030批ROSS种鸡H5Re-5株抗体检测结果101031批H9抗体滴度图

24、0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00134 150 193 208 230 248 260 276 298 315 329 344 359 374 388 402 416430444472505520535日龄/d抗体滴度/log2 3.2 结果分析 抗体HI效价测定按高致病性禽流感诊断技术(GB/T 18936-2003)血凝抑制试验检测评定HI抗体水平操作方法进行。按照农业部行业标准NY/T7692004进行判定,即HI抗体滴度4log2为免疫抗体合格,抗体合格率70%为群体免疫合格。从图1中可以看出接种H5Re-4株疫苗以后只有前两次的抗体滴度没有达到4log2，以后都在这以上，并维持一个较高的水平，抗体合格率明显高于70%。经试验表明:在开产前经3次以上免疫，开产时均能达到较高抗体滴度(H5 HI)6log2)，也就是说育雏期的免疫可以为父母代种鸡产蛋期提供较高的抗体水平。产蛋期2-3次免疫接种抗体可以维持较稳定的水平，因而在鸡蛋里面也保存了充足的母源抗体，为商品代鸡提供了很好的免疫保护。从表中可以看出产蛋期的免疫间隔以12-16周为宜。4讨论1、 禽流感疫苗的生产