尿囊素铝中尿囊素含量分析方法(滴定)确认

1、 题 目：尿囊素铝中尿囊素含量分析方法（滴定）确认 目录1、确认依据及范围32、方法确认的接受标准33、仪器44、试剂45、确认样品46、方法描述46.1测试原理46. 2操作方法47、确认程序67.1精密度67.1.1 重复性67.1.2 中间精密度 57.2线性77.3准确度（回收率）88、范围99、偏差的批准910、讨论910、综述8尿囊素铝中尿囊素含量分析方法（滴定）确认 摘要：目的：对日本药典（JP 17）中尿囊素铝的尿囊素含量分析方法进行确认，为该药典滴定方法适用于本实验室尿囊素铝中尿囊素含量的测定提供文件化证据。方法：由实验员按照日本药典JP17<1.08>氮测定法对

2、尿囊素铝进行试验，并对该分析方法的精密度、线性、准确度等进行确认，对其范围进行评估。结果：实验结果显示各项方法的确认指标均符合方案预定的接受标准。结论：日本药典JP17<1.08>氮测定法可以用于本实验室尿囊素铝中尿囊素含量的测定。 关键词：尿囊素铝；尿囊素；方法认证 abstract : objective: to the Japanese pharmacopoeia (JP 17) allantoin allantoin aluminum in content analysis method to confirm, for the pharmacopoeia titration

3、 method is suitable for the laboratory allantoin allantoin content in aluminium determination provide documented evidence. Methods: by the experimenter under Japanese pharmacopoeia JP17 < 1.08 > nitrogen determination method to test of allantoin aluminum, and the analysis method of precision,

4、linear, accuracy and so on carries on the confirmation, to evaluate its scope. Results: the experimental results show that the method of confirming indexes meet predetermined acceptance criteria. Conclusion: the Japanese pharmacopoeia JP17 < 1.08 > nitrogen determination method can be used in

5、our laboratory allantoin allantoin content in aluminium determination. Key words: allantoin aluminum; Allantoin. Methods the certification尿囊素铝为咪唑类抗胃溃疡药，是尿囊素和氢氧化铝组成的复方制剂。尿囊素铝具有中和胃酸，增加溃疡处粘多糖及碱性磷酸酶的含量，抑制胃酸的分泌，降低胃蛋白酶的活性，提高胃黏膜的前列腺素（PG）水平，并可在酸性条件下结合胆酸形成胃肠粘膜的保护因子从而使胃黏膜避免遭受酸的侵袭，起到隔离并保护受损组织的作用。除此之外尿囊素铝还能促进溃疡

6、区周围的小血管新生及粘膜上皮组织的再生，增加了粘液的合成及分泌，改善粘膜的血流量，增强粘膜的防御作用，很大程度的促进了溃疡的愈合。根据调查显示尿囊素铝具有显著性提高消化性胃溃疡的愈合率和降低胃溃疡的复发率的特点，使其成为近几年来日本及欧美国家常用的胃黏膜保护剂1-5。尿囊素铝中尿囊素（C4H6O3N4）的含量的多少是影响药品疗效的主要因素，为保证产品质量所以有必要对尿囊素铝中尿囊素的含量进行控制，因此对尿囊素含量的测定是质量检查标准规定项下的检测项目。本药的尿囊素含量的测定方法是采用日本药典JP17<1.08>氮测定法来对其进行检测。针对药品生产质量管理规范中质量控制的基本要求项下

7、有提到所采用的新的检验的方法都应当经过验证或确认，（这是物料和产品放行的前提之一），以及实验员应当根据确认对象制定确认方案，给出预先制定的接受标准，并经审核、批准之后才能对该方法进行确认。本实验就测定方法的问题，对日本药典（JP 17）中尿囊素铝的尿囊素含量分析方法进行确认。1、确认依据及范围依据ICH Q2A（药品注册的国际技术要求分析方法论证的文本）的要求对该方法的精密度、线性、准确度等进行确认，并对其范围进行评估。2、方法确认的接受标准验证 项目可接受标准精密度平行配制6份供试品溶液，重复性RSD日间2.0%，中间精密度含量RSD日内、RSD日间2.0%。准确度回收率在95%105%范围

8、内。线性相关系数0.998范围50%150%仪器名称及型号仪器编号校验时间有效期至BS210S电子天平 （千分之一） HG051003 2016.10.082017.10.07MSU125P-100-DU电子天平（万分之一）HG0516092016.10.082017.10.07SQP电子天平 （千分之一）HG0517072016.08.192017.08.18电热恒温鼓燥箱DHG-9203AHG0511022016.10.082017.10.073、仪器4、试剂试剂名称供应商规格有效期硫酸钾广州化学试剂厂500g/瓶2019.11.21无水硫酸铜广州化学试剂厂500g/瓶2019.07.17

9、硫酸广州化学试剂厂500ml/瓶2017.11.01 过氧化氢（30）广州化学试剂厂500ml/瓶2017.10.025、确认样品样品名称批号来源有效期尿囊素铝A02-160801先声药业有限公司2018.08.206、方法描述6.1测试原理 氮测定法是一种用来测定有机物质中氮的方法，有机物质中的氮通过硫酸的热分解转化成氨氮，然后加碱释放，通过蒸汽蒸馏捕集，用滴定法测定。6. 2操作方法分别准确的称取0.1g尿囊素铝（折干）样品，置于100ml烧杯中，加入50ml稀硫酸，加热使溶解，放置冷却，转移至100ml容量瓶中，用稀硫酸洗涤烧杯（少量多次），将洗涤液并入容量瓶中，再加稀硫酸至刻度，摇匀。

10、精密量取10ml，按照日本药典JP17<1.08>氮测定法执行检测。氮测定法（JP）：除另有规定外，按下列方法进行检验。准确称量或移取样品适量，相当于含氮2mg至3mg(N:14.01),至凯氏烧瓶中，加入分解促进剂，用少量水冲下附着在烧瓶颈部的样品。加入7ml硫酸，使其沿烧瓶的内壁流下。然后，在同时振摇烧瓶的条件下，小心的沿烧瓶内壁滴加1ml过氧化氢。逐渐加热烧瓶，然后将硫酸蒸汽在烧瓶颈部回流的强度加热，直至溶液由蓝色澄清溶液变成嫩绿澄清溶液，且烧瓶内壁没有含碳物质。必要时，冷却后加入少量过氧化氢，然后再次加热。冷却后，小心加入20ml水，冷却，然后连接烧瓶与预先通蒸汽方式清洁的

11、冷凝装置。往吸收烧瓶中加入15ml硼酸溶液（1ml硼酸25ml水），3滴溴甲酚绿-甲基红试液及足量的水以浸没冷凝器管的下端。通过漏斗加入30ml氢氧化钠溶液（25），用10ml水小心冲洗漏斗，关闭胶管上的夹钳，然后开始蒸汽蒸馏，持续蒸馏至馏分达到80ml至100ml,移除冷凝管底端的吸收烧瓶，用少量水冲洗冷凝管末端，然后用0.005mol/L硫酸滴定直至溶液颜色由绿色经由浅灰蓝色变为浅灰紫色。以同样的方法执行空白检测，必要时修正。每ml0.005Mol/L的硫酸相当于0.1401mg氮。计算公式：×100% RSD(%)=标准偏差SD/平均值*100% 其中标准偏差7、确认程序7.1

12、精密度7.1.1 重复性 按6.2项下要求，平行配制100%样品测试浓度样品6份，并在方法描述的条件下进行测定，要求含量RSD日内2.0%，试验结果记录于表7-1-1。表7-1-1 精密度检测结果样品编号称样量（g）消耗滴定液体积(ml)计算尿囊素含量结果(%)10.102417.5070.2220.103617.9071.0030.103817.5069.2840.103917.4068.8150.102917.5269.9660.102417.5070.22空白消耗滴定液体积0.02N/A平均值69.9RSD日内1.27.1.2 中间精密度 由另一分析员于不同日期重复一次重复性试验，要求含

13、量RSD日内2.0%且两位分析员间含量RSD日间2.0%，试验结果记录于表7-1-2。 表7-1-2 精密度检测结果样品编号称样量消耗滴定液体积(mL)计算尿囊素含量结果(%)10.103817.3068.9120.103217.4269.7930.103117.4670.0240.103017.5470.4150.103217.8071.3160.104117.5669.74空白消耗滴定液体积0.02N/A平均值70.0RSD日内1.2RSD日间1.17.2线性在其他条件不变的情况下，改变样品的称样量，使样品的称样量分别为0.05g、0.08g、0.10g、0.12g、0.15g（相当于样品

14、测试浓度的50%、80%、100%、120%、150%），每个浓度配制1个样品。按方法描述的条件进行测定，记录0.005mol/L硫酸滴定液的消耗量V。以样品浓度为横坐标、V体积为纵坐标做线性曲线图，计算回归方程，要求相关系数r不小于0.998。试验结果记录于表7-2-1。 表7-2-1 线性试验结果线性浓度%称样量g消耗滴定液体积(mL)50%0.051498.6280%0.0823514.30100%0.1032017.92120%0.1238821.00150%0.1546026.34回归方程y=0.1757x+0.091相关系数r0.9997.3准确度（回收率）准确称取0.05g、0.

15、10g、0.15g（相当于样品测试浓度的50%、100%、150%），每个浓度平行配制3个样品。按方法描述的条件进行测定，记录0.005mol/L硫酸滴定液的消耗量V，计算含量值，与精密度试验项下平均含量值相比较，要求回收率应在95%105%范围内，试验结果记录于表7-3-1。回收率=各测试浓度下实测样品含量 ×100%对照样品含量 表7-3-1 准确度试验结果测试浓度样品瓶号实测含量(%)回收率(%)50%168.669850%269.439950%369.61100100%471.59102100%571.69103100%671.54102150%769.90100150%87

16、0.25101150%970.071008、范围 样品中分析物的上限和下限的浓度50%150% 即0.0346mg/L0.1038mg/L9、偏差的批准整个验证过程中无偏差。10、讨论尿囊素铝中的尿囊素（C4H6O3N4）是尿酸的衍生物。目前，尿囊素已经被广泛用于医药化妆品行业及农业种植，可用于治疗皮肤的干燥症，治疗鳞屑性皮肤病及清洁伤口的创面及对消化性溃疡的治疗，它具有麻醉镇痛、抗刺激物、促进上皮细胞生长、消炎抑菌、保护胃黏膜使其避免遭受胃酸的侵袭、以及促进粘液合成等作用6-9。在药物质量保证体系中 ,分析方法的效能和分析结果的质量 ,已经成为越来越多的人们所关注的焦点10。为了得到真实可靠

17、地实验结果，在进行一项检验前应对其分析方法进行确认，只有的出确认结果的稳定性和可靠性才可使用该方法进行检测。显然 ,药物分析实验室所提供的实验数据必须满足可靠性的要求 ,所采用的检测方法要适于日常的随班分析 ,并且要求样品满足适用性范围宽、耗费成本低等特点。由于生产环境及分析环境的不同有可能会照成一些相关试验参数的误差，所以对于出口产品（日本）尿囊素铝中尿囊素的含量分析（根据日本药典进行检测）进行确认是必要的。 尿囊素铝的尿囊素含量分析方法（滴定）确认已完成，实验结果显示各项方法确认指标均符合方案预定的接受标准，实验结果表明该分析方法可以用于尿囊素铝中尿囊素含量的测定，方法确认结果汇总见下表：

18、验证项目接受标准实验结果重复性平行配制6份供试品溶液，含量检测结果RSD2.0%RSD%为1.2%，符合方案接受标准中间精密度含量检测结果RSD日内2.0%，RSD日间2.0%RSD日内 为1.2%，RSD日间 为1.1%，符合方案接受标准准确度回收率在95%105%范围内回收率在98%103%之间，符合方案接受标准线性相关系数r不小于0.998标准曲程：y=0.1757x+0.091；相关系数r为0.999；符合方案接受标准范围50%150%50%150即0.05mg/L0.15mg/L1、确认依据及范围32、方法确认的接受标准33、仪器44、试剂45、确认样品46、方法描述46.1测试原理

19、4氮测定法是一种用来测定有机物质中氮的方法，有机物质中的氮通过硫酸的热分解转化成氨氮，然后加碱释放，通过蒸汽蒸馏捕集，用滴定法测定。46. 2操作方法47、确认程序67.1精密度67.1.1 重复性6按6.2项下要求，平行配制100%样品测试浓度样品6份，并在方法描述的条件下进行测定，要求含量RSD日内2.0%，试验结果记录于表7-1-1。6表7-1-1 精密度检测结果67.2线性77.3准确度（回收率）88、范围99、偏差的批准910、讨论9参考文献1 邱云伟，叶晓青，何家卫.奥美拉唑联合尿囊素铝治疗胃溃疡的疗效观察J.现代实用医学，2012,24(1)：74-752 徐瑛.莫沙必利联合尿囊

20、素铝颗粒治疗胆汁反流性胃炎疗效观察J.河北医药，2011,33(9)：1372-13733 刘冬冬.尿囊素铝颗粒治疗胃炎及消化性溃疡的疗效及安全性J.大家健康，2016,10（17）：744 汤强，黎红光，吴东明等.尿囊素铝联合雷贝拉唑治疗活动期胃溃疡的疗效观察J.药物流行病学杂志，2015,24(2):72-745 王明军，崔众芹.尿囊素铝与替普瑞酮治疗胃炎与消化性溃疡的临床比较J.中国实用医药，2016,11(8):192-1936 明鹤，杨太新，杜艳华.HPLC分析不同施肥山药中尿囊素及薯蓣皂苷元含量J.中药材，2014,37(4)：558-5607 乔宇，廖李，汪兰等.不同山药品种尿囊

21、素含量的测定J.湖北农业科学，2014,53(22)：5529-55308 李明静，宋爱新，史会齐等.高效液相色谱法测定山药样品中尿囊素的含量J.化学研究，2003,14(1)：67-689 黄久遂，蔡素芬，莉丽欣.尿囊素乳膏中尿囊素的含量测定J.今日药学，2016,26(5):340-34110 林乐明，张军.药物分析中薄层色谱的方法认证J.色谱，1997,15(4):311-31314论文综述 尿囊素含量分析方法（滴定）认证概述 摘要：目的：对尿囊素及其分析方法的认证进行分析。方法：查阅一些相关文献，对于尿囊素含量分析方法的认证内容，即对分析方法中的精密度、准确度、线性和范围等作了一定的阐

22、述。结果：总结得出应对分析方法进行验证。结论：有必要对尿囊素含量的分析方法进行认证。关键词：尿囊素；分析方法认证 Abstract: objective: to allantoin and analysis method of authentication is analyzed. Methods: the related literature, the content of allantoin certification content analysis method, the precision and accuracy of analysis methods, and made a ce

23、rtain linear and scope of this paper. Results: concluded response analysis method for validation. Conclusion: it is necessary for the way of analyzing the content of allantoin authentication.Key words: allantoin; Analysis method of authentication尿囊素，又名 5 -脲基乙内酰尿,化学名称为2 , 5 -二氧代 -4 -咪唑烷基脲或者为 1 -脲基间二氮

24、杂环戊烷 -2 ,4 -二酮，分子式 C4H6O3N4 ,分子量为158 .12 。尿囊素存在于天然尿囊素及烟草种子、甜菜、小麦芽植物、山药以及部分动物的排泄物等中1， 是一种无臭无味的白色结晶体,熔点 228 235 ,其不溶于乙醚、乙醇和氯仿等有机溶剂，能溶于热醇、热水和稀氢氧化钠水溶液，在冷水中微溶。尿囊素作为一种重要的精细的化工产品, 被广泛应用于医药,农业和轻工业领域。在医药领域, 因具有抗刺激物、消炎抑菌、镇静、局麻等作用，可以用于医治各种皮肤病，外用能促进皮肤溃疡面和伤口愈合，并可促进黏膜上皮细胞的再生功能，促进健康组的织生长和对伤口愈合速度提高等作用；内服可用于治疗消化性溃疡，

25、缓解消化性溃疡的症状。在轻化工方面 , 可作为化妆品的添加剂以及其他日用化工品(如牙膏、香波、肥皂)的添加剂,具有保护组织、润滑、吸水、亲水和防止水分丢失等作用。在农业方面 ,可作为植物生长激素同时又是长效肥或缓效肥及稀土肥料必不可少的原料2-6。尿囊素的含量测定方法有薄层扫描法，液相色谱法7和滴定法（氮测定法是一种测定有机物质中氮的方法，有机物质中的氮通过硫酸热分解转化成氨氮，然后加碱释放，通过蒸汽蒸馏捕集，用滴定法测定。）在药物质量保证体系中，可靠的分析方法对于药品的质量控制起着至关重要的作用。分析方法的效能和分析结果的质量 ,正越来越多地受到人们的关注，为了保证检测结果的准确性和可靠性，

26、建议对任一个新的或经过修改的分析方法进行认证参数的测定，这些参数指标是建立分析方法的实验依据，而整个实验过程称为分析方法的认证，不同分析方法的效能指标会存在一些细小的差异，但基本大致相同8-9。尿囊素含量分析方法（滴定）认证的效能的指标包括：精密度、线性、准确度和范围，其中精密度中含有重复性和中间精密度。1 认证实验的设计 任何一个分析测试实验的目的 ,都是为了获取待测样品各组分的定量定性信息。 一个定量分析的程序包含从采样到得出结果报告的整个过程 。试验测试过程中的每一个步骤都有可能对结果照成一定的影响。 因此 , 尿囊素含量的认证必须包含对所涉及的所有实验步骤的适合性、准确性等进行方法认证

27、和评价,确保试验的任何一个步骤都不会对最终试验结果的真实可靠性产生较大的影响。 尿囊素含量的认证实验的设计需考虑到以下的问题：样品的处理、待测尿囊素含量的稳定性（考虑环境中温度和湿度的影响）和平行样的取样量应尽量相差不要太大，避免测试结果差异过大。2 需认证的效能指标2.1精密度 精密度是指对同一均匀样品进行多次取样 ，每份样品应按照分析的方法从样品制备开始直至得到分析的结果均独立完成(其样本取样数应能保证满足统计分析的基本要求 ) ,用该法测定每个样品所得测试结果之间的符合程度，通常以标准差 ( s )或相对标准差 ( RSD)表示。精密度可以两种不同的方式来表达:（1）: 重复性（2）:

28、中间精密度 。重复性指在同一实验室短期内由同一分析者用同一仪器进行测定结果的变异程度，尿囊素含量分析（滴定）中的实验设计为平行配制100%样品测试浓度样品6份，在方法描述的条件下进行测定，要求含量RSD日内2.0%。中间精密度是表示实验室内部的差异 , 如不同的实验时间 (日子 ) ,或在同一实验室中由不同的分析者或用不同的仪器进行测定的结果变异程度，尿囊素含量分析（滴定）认证中的中间精密度是由另一分析员于不同日期重复一次重复性试验，要求含量RSD日内2.0%且两位分析员间含量RSD日间2.0%2.2准确度 准确度反映采用给定分析方法的程序对待测组分多次重复测定的结果的平均值与真值之间的接近程

29、度 ,是测量的系统误差和随机误差的综合，是方法误差的指示。对于化学测量 ,通常用的标准物质或者用经实践证明的可靠的公认的标准方法来确认分析方法的准确程度。一般情况下,仅简明地以均值与“真值”的百分之差来标示一种方法的准确性。一般的要求,样品测出的百分率与理论值相比较不应该超过方法精密度的相对标准差的四倍。由于药物的分析经常需要一系列的样品处理过程,而每一处理步骤都有可能给被测物质造成一定损失 ,这直接影响到分析结果的准确度。因此,非常的有必要测定分析方法的回收率。经过回收率的测定 ,一是可以找出照成样品损失的关键的步骤,给改进样品的处理技术提供重要的依据 ,二则可以判断该分析方法的可靠性。对于

30、尿囊素含量分析（滴定）中的准确度测定来说取样方法为分别称取3个不同浓度的样品量相当于样品的50%，100%，150%。每个浓度平行配制3个样品按方法进行检测并要求准确度应在95%-105%范围内。2.3 线性与范围线性是在一定的范围内 ,直接或间接地经数学统计转换后测定的结果和样品中的分析物浓度的比例关系。将测定的结果进行数学统计，回归线的方差与斜率给线性数学提供了尺度与偏差的范围。线性方程也可作为测量的样品中某药物含量的定量的尺度，待测组分的浓度在这些范围内可以得到准确的测量结果。所以该回归线被称为校正曲线与标准曲线。校正曲线的浓度范围都应至少包括在研究样品中需要测定的那些浓度点。分析物质的浓度范围一般包括三个以上的浓度级别。尿囊素含量测定方法认证中取5个不同浓度的浓度点，每个浓度点配制一个样品，按照方法进行线性的测定。假设整个范围不能够用单一校正曲线来描述 ,可以认证两个校正曲线范围。如果取样得到的研究样品的量低于分析方法中要求的量, 则可以用空白