plk1chk1chk2在原发性肝癌和肝非肿瘤组织中的表达及相关性研究

1、plk1/chk1/chk2在原发性肝癌和肝非肿瘤组织中的表达及相关性研究专业：普外科；研究生：马瑞波；导师：孙诚谊教授、杨人刚副教授摘要：背景与目的：plk1 (poio-1 ike k i nasel)和 chk1/2 (check po i ntkinase1/2)是细胞周期检测点启动dna损伤修复的主要激酶。本研究主 要探讨3种激酶在肝非肿瘤组织(包括正常肝细胞组织和肝硬化组织)和 原 发性肝癌组织中的表达差异、与原发性肝癌临床病理特征的关系及在 原发性肝癌组织中表达之间的相互关系。方法：应用免疫组化二步 法(即envision法)检测15例肝细胞非肿瘤组织(其中正常肝细胞组 织7例，

2、肝硬化组织8例)和41例原发性肝癌组织plk1/chk1/chk2三种 蛋白的表达情况。结果:plk1/chk1/chk2蛋白在原发性肝癌组织中表达 的阳性率分别56.1%、73.2%、22. 0%,在肝非肿瘤组织中的阳性率分 别为 0、26.7%、60%;plk1和chk1蛋白在原发性肝癌组织中的表达高于肝非肿瘤组织，且 差 异有显著性，(p <0.05), chk2的表达在原发性肝癌组织中的表达则 低于 肝非肿瘤组织中的表达，差异同样具有显著性(p <0. 05) o plk1/chk1/chk2蛋白在不同年龄、组织学类型、肿瘤大小、hbv是否阳 性、afp是否升高等 临床病理

3、特征中表达的差异无显著性(p>005);但 plk1、chk1、chk2蛋白 在不同分化程度的原发性肝癌组织中的表达有 差异性，且差异有显著(p<0. 05) o运用spearma n等级相关分析，在41 例原发性肝癌患者中，plk1与chk1表达呈负相关(相关系数r二- 0.647, p<0. 001) , plk1 与 chk2 表达无 明显相关关系(r=0.250,p>0. 05), chk1 与 chk2 的表达 呈正相关(r二0.494, 0. 001<p<0. 002)。结论：plk1、 chk1在原发性肝癌中的表达为高表达， 而chk2无高表达

4、； plk1/chk1/chk2表达与原发性肝癌 组织的恶性分化程度 相关，可能它们 在肿瘤的发生、发展过程有重要的作用，但三者在原发性 肝癌中起作用 的具体机制，还有待进一步的研究。关键词plk1 : chk1 ； chk2；原发性肝癌vi/a 11、刖吕肿瘤是环境因素和遗传因素共同作用，导致细胞周期紊乱，细胞失控 性生长所致的一类疾病，其主要分子机制是细胞周期紊乱导致细胞增殖过 多和凋亡过少。细胞周期紊乱是基因组不稳定的一个中心环节，其结果 使不稳定细胞进一步癌变的可能性增高，从而参与肿瘤的发牛、发展役 早在2001年，诺贝尔生理或医学奖就授予了三位在细胞周期研究中做出贡 献的科学家，这三

5、名科学家做出的重大贡献在于发现了具有调节所有真核 有机体中细胞周期的关键分子，包括细胞周期蛋白(cyclins)和细胞周期蛋 口依赖性激酶(cyclin-dependent kinases, cdks),并将细胞周期检验点 (check point)的概念引入到细胞周期。细胞周期检验点的主要作用是：当细胞周期不能正常进行时，如： 细胞不能正常复制或者在细胞周期进行过程中一切因素导致的dna损伤 时，就会激活细胞周期检验点关卡，启动修复功能。换句话说就是，激活 细胞周期检验点激酶后，它可使细胞检验关卡激活，进一步使细胞周期停 滞在gl、s、g2或者m期，给细胞修复损伤的时间，如修复成功，细胞 周

6、期还继续进行；如修复失败，细胞就会发生凋亡。细胞周期检测点激酶 1 > 2 ( checkpoint kinase 12, chkl > chk2)是细胞周期检测点(g1 /s、s和g2 /m)发挥作用的主要激酶，可以对各种因素 导致的dna损伤进行修复。polo样激酶1( polo-likekinase 1, plkl )同 样具 有细胞周期检验点激酶的作用，其主要位点在g2 /m转折和m期，可 使受损dna在该期修复，目前这3个检测点激酶同时在同一种肿瘤组 织中的表达研究较少,同时在原发性肝癌中的研究更是未见报道。木实验 的目的是应 用免疫组化方法检测plk1、chk1、chk

7、2蛋白在原发性肝 癌和肝非肿瘤 组织中的表达，研究这3种细胞周期检测点激酶蛋白在肝脏 良恶性病变中的表达差异，探讨其与原发性肝癌临床病理特征的关系以及3 种激酶在原发性肝癌组织中表达之间的相互关系。2.材料与方法2.1研究对象以贵阳医学院病理科保存的手术切除并剔除术前接受放、 化疗，病例资料完整的原发性肝癌石蜡标木41例。其中高和中分化的 原 发性肝癌标本共17例，低分化的原发性肝癌标本24例；年龄为3471岁， 中位年龄为48岁。同吋随机选取经病理确诊的正常肝细胞组织7例，肝 硬化组织标本8例，此15例组织均排除了肿瘤病变。2.2 方法：应用免疫组化二步法（envision法）检测41例原发

8、性肝癌 组织和15例肝非肿瘤组织中plkl/chkl/chk2的蛋口表达情况，免疫组化 染色按二步法免疫组化试剂盒说明书进行，pbs代替一抗作阴性对照。免疫组化二步法实验的具体步骤（所有的步骤均需在室温条件下完 成）:k脱蜡：烤箱烤三次，5分钟/次，烤后二甲苯梯度脱蜡（二甲苯1 ->二甲苯2-二甲苯3） 5分钟/次，酒精梯度脱水（80% ->95%->100%） 5 分钟/次，自来水冲洗3次；2、切片预处理：高压抗原修复，待高压锅岀现 高压蒸汽时开始计时（此时的压力约为lkg/cm2）,高温修复约2分钟，待 高压锅冷却至室温后自来水冲洗23遍，pbs冲洗2分钟x3次；3、用

9、3%h2o2去离子水孵育切片10分钟，用来阻断内源性过氧化物酶，然后用 pbs冲洗，2分钟x3次；4、滴加一抗，37°恒温箱孵育2小吋（也可于4° 冰箱过夜），然后pbs冲洗，2分钟x3次；5、滴加二抗pv-6002；室温孵 育30分钟，pbs重复冲洗3次x5分钟；6、擦拭标本周围液体，滴加显色剂, 显色吋间约为10分钟；7、自来水冲洗标本上显色剂，约12分钟；苏木精 复染，约10秒钟，自来水冲洗3次x2分钟，1%的氨水中迅速脱水，再依 次放回85%、95%、100%酒精梯度脱水，各5分钟；8、烘干、封片、保存; 9、记录数据。2.3 抗体： 小鼠抗人plk1单抗（稀释度1

10、 : 100）为美国millipore公司； 小鼠抗人chk1单抗（稀释度1 : 50）与小鼠抗人chk2单抗（稀释度1 ： 50）为 美国santa cruz公司产品;二步法免疫组化检测试剂盒、显色剂dab购自 北京中杉金桥公司。2.4染色结果判定：plki在原发性肝癌中的阳性表达主要在细胞质；chk1在乳腺癌中阳性表达主要在胞质；chk2在卵巢肿瘤、正常膀胱上 皮细胞及膀胱肿瘤中的阳性表达主要在胞核18'9102.5具体判定方法：采用双盲法阅片，以细胞核和细胞浆含黄色或者(深) 棕黄、褐黄颗粒者为阳性细胞。高倍镜(x400)下计数5个视野内100个细 胞阳性细胞率，其均值为该病例阳

11、性细胞率。表达的强弱主要根据着色程 度分别为：蓝染色记0分、浅黄色记1分、黄色记2分、(棕)褐黄色记 3分。5个视野内100个细胞中，如阳性细胞10%记0分，10%24%记1 分，25%49%记2分，50%74%记3分，75%记4分。综合判定：取 着色强度和阳性细胞百分数分值之积：0分记为(一)，12分记为(+), 3- 4分记为(+), 68分记为(+), 912分记为(+)；( )和(+)定义为表 达阴性即 低表达，(+)(+)定义为阳性表达即高表达。2.6 统计处理：采用spss17.00软件进行/检验以及运用spearman等 级相关分析数据，取a=0.05为显著性校验水平。3结果3.

12、1 plk1/chk1/chk2蛋白在原发性肝癌组织和肝非肿瘤组织中的表达。41例原发性肝癌组织屮,plk1、chk1、chk2的阳性分别为23例、 30例和9例，阳性表达率分别为56.1%、73.2%和22.0%。15例肝非肿瘤 组织中plk1、chk1、chk2的阳性分别为0例、4例和9例，分别占总例 数的0%,26.7%和60.0%o plk1与chk1在原发性肝癌组织中表达的阳性率高于肝非肿瘤组织，表达差异有显著性(p0.05),chk2在原发性肝癌 组织中的表达低 于肝非肿瘤组织的表达，表达差异有显著性(pv0.05)。(如表1、2、3、图1、2、3所示)表1： plk1在肝非肿瘤组

13、织、原发性肝癌组织屮的表达情况组別阳性阴性合计阳性率/%肝非肿瘤组015150原发性肝癌组23184156.1%合计23335641.7%釆用spss17.00软件进行分检验分析数据，/值= 15.55,取«=0.05为显著性校 验水平，pv0.05,差异有显著性。表2： chk1在肝非肿瘤组织、原发性肝癌组织中的表达情况组别阳性阴性合计阳性率/%肝非肿瘤组4111526.7%原发性肝癌组30114173.2%合计34225660.7%采用spss17.00软件进行才检验分析数据，才值=9.96,取a=0.05为显著性校验 水平，pv0.05,差异有显著性。表3： chk2在肝非肿瘤

14、组织、原发性肝癌组织中的表达情况组别阳性阴性合计阳性率/%肝非肿瘤组961560.0%原发性肝癌组9324122.0%合计18385632.1%采用spss17.00软件进行/检验分析数据，/值=6.28,取a=0.05为显著性校验 水平，p<005,差异有显著性。图1： plk1蛋白在原发性肝癌组织中的阴性和阳性表达的对照tab.l control chart about the positive and negative expressionof plk1 in human primary liver cancerplk1在原发性肝癌组织中的阴性表达（envision 法，spx10

15、0）plk1在原发性肝癌组织胞质屮的阴性表达(envision 法，spx400)the negative expression of plkl protein inprimary liver cancer cells(envision, spx100)the negative expression of plkl protein inprimary liver cancer cells(envision, sp x 400)plk1在原发性肝癌组织胞质屮的阳性表达（envision 法，spx 100）plk1在原发性肝癌组织胞质小的阳性表达（envision 法.spx400）the po

16、sitive expression of plkl protein in primary liver cancer cells was cytoplasm staining (envision，spx 100)the positive expression of plkl protein in primary liver cancer cells was cytoplasm staining (envision, sp x 400)图2： chk1蛋白在原发性肝癌组织中的阴性和阳性表达的对照 tab.2 control chart about the positive and negative

17、expression of chk1 in human primary liver cancerchk1在原发性肝癌组织的阴性表达（envision 法，spx100）chk1在原发性肝癌组织的阴性表达 （envision 法,spx400）the negative expression of chkl in primary liver cancer cells ( envision,sp x 100)the negative expression of chkl in primary liver cancer cells ( envision,sp x 400)chk1在原发性肝癌细胞质阳性

18、表达（envision 法，spx100）chk1在原发性肝癌细胞质阳性表达 （envision 法，spx400）the positive expression of chkl in primaryliver cancer cells was cytoplasm staining.(envision,spx100)the positive expression of chkl in primaryliver cancer cells was cytoplasm staining.(envision, spx400)图3： chk2蛋白在原发性肝癌组织中的阴性和阳性表达的对照tab.3 con

19、trol chart about the positive and negative expressionof chk2 in human primary liver cancer(envision 法 sp x 100)(envision 法，sp x 400)the negative expression of chk2 in primary liver cancer cells (envision,spx 100)the negative expression of chk2 in primary liver cancer cells (envision,spx 400)chk2在原发性

20、肝癌细胞核阳性表达(envision 法,spx100 )the positive expression of chkl in primaryliver cancer cells was nuclear staining.(envision, sp x 100 )chk2在原发性肝癌细胞核阳性表达(envision 法，spx400)the positive expression of chkl in primary liver cancer cells was nuclear staining.(envision, positive, spx400)3.2 plk1、chk1和chk2的表达

21、与原发性肝癌患者临床病理特征的关系统计分析示：plk1、chk1、chk2的表达在不同年龄、组织学类型、 肿瘤大小、hbv是否阳性、afp是否阳性（是否高于临床参考范围高值） 等临床病理特征中差异无显著性（p>0.05）o plk1、chk1、chk2的表达在 不同分化程度的原发性肝癌中差异有显著性（pv0.05）。（分析如表4、5、6、 图4、5、6、7所示）表4： plk1蛋白的表达与原发性肝癌临床病理特征的关系临床病理特征例数plkl阳阴p值年龄（岁）>48231310<4818108p>0.05组织学类型肝细胞癌321913混合细胞癌954p>0.05肿瘤

22、大小n5281612(cm)<51376p>0.05hbv阳性301713阴性1165p>0.05afp阳性332013阴性835p>0.05分化程度高、中分化17215低分化24213p<0.05表5： chk1蛋白的表达与原发性肝癌临床病理特征的关系chkl临床病理特征例数阳阴p值年龄（岁）24823167<4818135p>0.05组织学类型肝细胞癌322012混合细胞癌963p>0.05肿瘤大小2528208(cm)<51394p>0.05hbv阳性3()228阴性1183p>0.05afp阳性332310阴性853p&

23、gt;0.05分化程度高、中分化17314低分化24168p<0.05表6： chk2蛋白的表达与原发性肝癌临床病理特征的关系chk2临床病理特征例数阳阴p值年龄（岁）>4823518<4818414p>0.05组织学类型肝细胞癌32725混合细胞癌927p>0.05肿瘤大小$528622(cm)<51331()p>0.05hbv阳性30723阴性1129p>0.05afp升高33726不升高826p>0.()5分化程度高、中分化17116低分化24816p<0.05注:a=0.05图4： he染色的原发性肝癌组织的高分化和低分化对照

24、he staining of primary liver cancer tissue were well differentiated and poorly differentiated原发性肝癌组织，高分化（he染色，spx100）原发性肝癌组织，低分化（he染色，spx100）vv cll-differcntiatcd primary hepatocellularcarcinoma (he, spx100)poorly differentiated hepatocellular carcinomatissues (he. spx 100)图5： plk1蛋白的表达与原发性肝癌病理分级的关系

25、the expressions of plk1 associated with differentiation of primary liver cancerplk1在高分化原发性肝癌中的低表达 (envision 法，弱阳性 spx100)plkl in well differentiated hepatocellular in the lower expression (envision,weak positive,spxloo)plk1在低分化原发性肝癌中的高表达 (envision 法，阳性 spx100)plkl in poorly differentiated hepatocell

26、ular in the high expression (envision, positive, spxloo)贵阳医学院2011届硕上研究生论文图6： chk1蛋白的表达与原发性肝癌病理分级的关系the expressions of chklassociated with differentiation of primary liver cancerchk1在离分化原发性肝癌屮的低表达(envision 法，弱阳性 sp x100)chk1在低分化原发性肝癌屮的高表达（envision 法，阳性 spx100）chklin well differentiated hepatocellular

27、in the lower expression(envision, weak positive,spxloo)chk1 in poorly differentiated hepatocellularin the high expression(envision, positive, spxloo)图7： chk2蛋口的表达与原发性肝癌病理分级的关系the expressions of chk2associated with differentiation of primary liver cancerchk2在高分化原发性肝癌屮的低表达 （envision 法,弱阳性 spx100）chk2在

28、低分化原发性肝癌小的高表达（envision 法，阳性 spx100）chk2 in well differentiated hepatocellularin the lower expression(envision, weak positive,spxloo)chk2 in poorly differentiated hepatocellularin the high expression(envision, positive, spxloo)贵阳医学院2011届硕上研究生论文3.3plk1/chk1/chk2蛋白在原发性肝癌组织中表达之间的相互关系将41例原发性肝癌组织的plk1/chk

29、1/chk2的表达水平做spearman 等级相关分析后发现：plk1与chk1表达呈负相关关系（相关系数r= -0.647,p<0.001） ； plk1与chk2表达之间无明显相关关系（相关系数 r=0.250,p>0. 05） ； chk1与chk2之间的表达呈正相关关系（r二0.494, 0.001<p<0.002） o 说明：plk1 与 chk1, chk1 与 chk2 之间在表达上 存在着密切的联系。（如：表7、89、10所不）表7： plk1 /chk1 /chk2在原发性肝癌中的梯度表达的情况- + + + + + + +合计plk161251174

30、1chk156714941chk2191363041表8： plk1和chk1在原发性肝癌阴、阳性表达情况plk1阳性阴性合计阳性131730chk1阴性10111合计231841结合表7和表8,运用spearman等级相关分析得出：plk1与chk1表达成明显负相关（相关系数r= -0.647,p<0.001）表9： plk1和chk2在原发性肝癌阴、阳性表达情况plk1阳性阴性合计阳性549chk2阴性181432合计231841结合表7和表9,运用spearman等级相关分析得出:plk1与chk2之间无显著相关关系（相关系数r=0.250,p >0.05）表10： chk1

31、和chk2在原发,性肝癌阴、阳性表达情况chk1阳性阴性合计阳性819chk2阴性221032合计301141结合表7和表10,运用spearman等级相关分析得岀：chk1与chk2呈明显正相 关（相关系数 r=0.494, 0.001<p<0.002）4讨论：plk1在细胞增生活跃的组织中，例如：胎盘、脾脏、卵巢和睾丸中有 最高的表达10_111o northern blot杂交实验已经证实：在大多数成人正常组 织屮plk1不表达或表达的程度很低，这些组织包括肝脏、肾脏、脑、胸腺、 小肠、肺、胰腺、心脏、胃和皮肤。还有研究表明，在非小细胞肺癌， 颈部鳞状上皮细胞癌、食管癌及胃癌

32、、乳腺癌、原发性结肠直肠癌、前列 腺癌、胰腺癌等人类肿瘤中存在plk1的过表达，且plk1的过表达与多数肿 瘤患者的肿瘤恶性程度及预后密切相关u2-191o除在大多数肿瘤中高表达之 外，plk1本身还具有细胞周期检验点激酶的作用，主要的作用位点是在 g2/m转折处和m期这两个检验点关卡，有研究证明当dna损伤时，可使 plk1活性受到抑制，使细胞周期停滞于g2/m转折与m期多点，同时伴有 plklmrna水平及活性明显下降a】。chk1、chk2是目前研究较多的细胞周期检验点激酶，是 atm（ataxia-telangiectasia mutated,共济失调毛细血管扩张症突变基因）及 atr

33、 （atm and rad3 relatedatm相关基因）的下游效应基因,atm和atr 的作用主要是：当dna受损后，它们首先被激活，进而通过磷酸化 chk1/2,来启动细胞周期的损伤修复系统。以往的研究证明：当细胞 dna受到损伤 时，被atm和atr活化的chk1、chk2是通过调控其下游 的底物磷酸酶cdc25和14-3-3蛋白，来激活细胞检验点关卡的，激活的细 胞检验点关卡使细胞周期阻滞于g1/s转折处、s期和g2 /m转折处，进行 受损dna的修复21】。plk1同chk1/2样，具有周期检测点激酶的作用，同时与肿瘤的发 生、发展关系紧密，而且这3种蛋白激酶之间述存在着密切的联系

34、。它们 z间的联系主要据文献报道主要有以下几点：1、当dna受损后，导致atm 和atr被激活，激活的atm和atr同样作用于plk1,换句话说就是，plk1、 chk1、chk2这三种蛋白在损伤修复的过程中，在它们三者上游其作用的 蛋白同为atm和atro 2、在前文中提到的chk1和chk2启动损伤修复过 程中能起重要作用的磷酸酶cdc25,同时也是plkl的下游控制蛋口，plk1 也需耍通过它来发挥细胞周期检验点激酶的作用。通过本实验的免疫组化检测后发现：plk1在肝非肿瘤组织中无阳性表 达，在原发性肝癌组织中呈高表达。chk1/chk2在肝非肿瘤组织中均有表 达，chk1在原发性肝癌组

35、织中高表达，chk2原发性肝癌组织中低表达。 plkk chk1激酶在原发性肝癌组织中的表达高于非肝肿瘤组织，且这种 表达差异有显著性；但chk2在原发性肝癌组织中的表达低于肝非肿瘤中 的表达，这种表达的差异也有显著性。由此可以推断，plk1/chk1/chk2 这三种细胞周期检验点激酶与原发性肝癌之间有重要关系，值得我们进一 步研究。将3种激酶蛋口的表达与原发性肝癌患者屮各临床病理参数进行统计 分析后可以得出：plki、chk1、chk2蛋白的表达在不同组织学类型、 肿瘤大小、hbv是否阳性、afp是否升高等临床病理参数中差异无显著性 (p>0.05)； plk1、chk1、chk2的

36、表达在不同分化程度的原发性肝癌中差 异有显著性(p<0.05)o plk1、chk1在原发性肝癌组织分化程度越低，即 恶性程度越高时，表达越高，提示这2个激酶可能在原发性肝肿瘤中的发 生、发展屮发挥了某些重要作用。chk2虽说在分化程度低的原发性肝癌 中有高表达，但它在原发性肝癌组织不存在高表达，所以，它与原发性肝 癌的发生、发展的关系尚需进一步的研究。plk1和chk1在原发性肝癌组织中的表达呈负相关关系，这与先前 的报道a】理论相一致，即chk1能够磷酸化plk1,从而抑制其活性。 plk1和chk2在原发性肝癌组织中的表达无相关关系，究其原因，一方 面可能确实是无明显相关关系，也可

37、能与免疫组化实验方法的灵敏性不 高、实验条件有限及所研究实验例数较少有关，若想明确其相关关系，尚需做进一 步的实验。chk1与chk2在原发性肝癌组织中的表达呈正相关，这与两 者均为atm/atr的下游效应基因，发挥相似作用的事实相符，同时也与 多位学者的报道一致23-241o综上所述，可得岀以下的结论：plk1、chk1在原发性肝癌中的表达为 高表达，而ciik2无高表达；plk1/ciik1/ciik2表达与原发性肝癌组织的恶 性分化程度相关，可能它们在肿瘤的发生、发展发挥了重要的作用，但 三者在原发性肝癌中起作用的具体机制，还有待进一步的研究。参考文献：1. 曹亚，细胞周期与肿瘤.国外医

38、学生理、病理科学与临床分册j.2002,22(2) :103-104.2. zhou bb,elledge sj.the dna damage response: putting checkpoints in perspective j.nature,2000,408(6811 ):433-439.3. hoeijmakers jh genome maintenance machanisms for preventing cancer jj. nature,2001,411(6835):366-374.4. bartek j, lukas j.chkl and chk2 kinases in

39、checkpoint control and cancer j. cancer cell,2003,3(5):421-429.5. glover dm,hagan m, tavares aa. polo-like kinases: a team that plays throughout mitosis j.genes dev, 1998,12(24):37773787.6. 孙威,戴朝六.靶向plkl的sirna对肝癌细胞凋亡的影响j.中国医科大学博士 学位论文,2007,4:4-10.7. lieve verlinden, isabelle vanden bempt, el al. the

40、 e2f-regulated gene chkl is highly expressed in triple-negative estrogen receptor/progesterone receptor /her-2-breast carcinomas.cancer res 2007;67:6574-81.& louise h. williams,david choong , sandra a, et al. genetic and epigenetic analysis of chek2 in sporadic breast,co ion,and ovaria n cancers

41、 clin cancer res 2006;23:6967-72.9 jirina bsrtkova, per guldberg et al.aberrations of the chk2 tumour suppres sor in advanced urinary bladder cancer.oncogene 2004;23,8545-51 10. gosteyn rm, schultz sj, bartek j,et al. cell cycle analysis and chromosomal localization of human plkl,a putative homologu

42、e of the mitotic kinases drosophila polo and saccharomyces cerevisiae cdc.j cell sci. 1994; 107(pt6): 1509-17.1 1. hamanaka r,maloid s, smith mr ,et al. cloning and characterization of human and murine homologues of the drosophila polo serine-threonine kinase.cell growthdiffer. 1994;5(3):24957.12. w

43、olf g, elez r, doermer a, et al. prognostic significance of polo-like kinase (plk) expression in nonsmall cell lung cancer. oncogene.1997;14(5):5439.13. knecht r,elez r, oechler m,et al. prognostic significance of polo-like kinase (plk) expression in squamous cell carcinomas of the head and nack,can

44、cer res.l999;59(12):7793-801.14. tokumitsu y, mori m, tanaka s, et al. prognostic of polo-like kinase expression in esophageal carcinoma. int j oncol. 1999; 15(4)687-92.15. wolf g hildenbrand r, schwar c，et al.polo-like kinase:a novel marker of proliferation: correlation with estrogen-receptor expre

45、ssion in human breast cancer. pathol respract.2000; 196(11):753-9.16. takahashi t, sano.b, nagata t,et al.polo-like kinasel(plkl)is overexpressed in primary color cancers.cancer.2003;94(2): 148-52.17. weichert w、schmidt m, gekeler v,et al. polo-like kinasei is overexpressed in prostate cancer and li

46、nked to higher tumor grades.prostate.2004;60(3):240-5.18. gray pj j, bearss dj, han h,et al. identification of human polo-like kinasei as a potential therapeutic target in pancreatic cancer.mol cancer ther.2004;3(5):641 -6.19. eichert w, schmidt m, jacob j, et al. overexpression of pololike kinasei

47、is a common and early event in pancreatic cancer. pancreatology.2005;5(2-3):259-6520. svetkov l,stern df.phosphorylation of plk 1 at s137 and t210 is inhibited in response to dna damage.cell cycle,2005,4( 1): 166-171.2l wong cf, guminski a, ssunders na, et al. exploiting novel cell cycle targets in

48、the development of anticancer agentfj. currcancer drug targets2005,5(2):85102.22. lee m , daniels mj and venkitaraman ar. phosphorylation of brca2 by the polo-like kinase plkl is regulated by dna damage and mitoticprogression oncogene 2004;23(4):865-872.23. 周剑锋，黄伟，张琼珍等.chkl和chk2在急性白血病骨髓单个核细胞中表达的研 %

49、j.华中科技大学学报(医学版),2004,90 (4) :815-821.24. hirose y, berger ms, pieper ro. abrogation of the chkl-mediated g2 checkpoint pathway potentiates temozolomide-induced toxicity in a p53-independent manner in human glioblastoma cellsj.cancer res,2001,61 (15):2843-49.expression of plk1 /chk1/chk2 in primary l

50、iver cancer and livernon-tumor tissue and correlation of expression姓名 ruibo ma 单位 guiyang medical university 邮编 550004abstractbackground and purpose:plkl(polo-likekinasel) and chk1/2 (checkpoint kinasel/2) played the major role in the regulation of cell cycle when dna was damaged. the aim of this st

51、udy was to expl ore the accociation of normal liver tissue,cirrhosis, primary liver cancer and investigate association of these kinases with clinical pathology parameters between each other.methods: immunohistochemistry was applied to detect the expressions of plkland chk1, chk2 in 15 cases of liver

52、 non-tumor tissue(including normal liver tissue in 7cases;cirrhosis tissue in 8) and 4leases of primary liver cancer.results: the positive percentages of plk1 and chk1 ,chk2were 56.1% ,73.2% and 22.0% respectively in primary liver cancer,and compared with 0,26.7% and 60.0%,respectively in liver non-

53、tumor tissue; there were statistically significant higher expressions of plk1 and chk1 proteins in primary liver cancer than that in liver non-tumor tissue(p<0.05) while statistically significant lower expressions of chk2 proteins in primary liver cancer than that in liver non-tumor tissue(p<0

54、.05).the expressions of plk1 ,chk 1 ,chk2 were not associated with histological typetumor size,hbv-positive, afp-positive of primary liver cancer patients (p>0.05),while plk1 and chk1 expressions associated with differentiation of primary liver cancer (p<0.05). in 41 primary liver cancer cases

55、,plk1 expressions was negatively correlated with chk 1 (r= 0.647,p<0.001);chkl expression was positively correlated with chk2 expression (r=0.494, 0.001 <p<0.002).conclusions:plk1 and chk 1 might be the ideal targets for primary liver cancer therapy.key words plk1; chk1; chk2; primary liver

56、 cancer致谢谨在此论文完成之际，衷心感谢我的导师孙诚谊教授、杨大刚副教授，感谢您们三年來 的悉心培养和诚挚教诲，您们严谨求真的治学态度、精湛的医疗技术、渊聘的学识、一丝不 苟的工作作风和永远进取的敬业精神，忘我的探索精神及高尚的道德情操，令我受益终生, 论文的完稿也倾注了您们的大量心血。值此论文完成z际，特别感谢我的执行导师杨大刚副教授，在您的严格要求下我顺利完 成了三年的学习和工作任务，衷心感谢您三年来的孜孜不倦的教诲和辛勤的培养。衷心感谢贵阳医学院附属医院肝胆外科：胡韵教授、潘耀振主任、李海洋主任、杨能红 副主任、刘兴贵副主任、胡康副主任、左石副主任、韩民副主任等全体老师及陈玲护士长在 我三年的学习和工作中对我无私的指导和帮助。衷心感谢同专业各位同学三年来的风雨与共，感谢你们的相伴，这份情谊我将铭记终生。 衷