维生素医学课件

1、维生素医学第九章第九章维生素医学概概 述述维生素：维生素： 是维持人体正常代谢机能所是维持人体正常代谢机能所必需的必需的 微量营养物资。微量营养物资。 人体不能合成维生素。人体不能合成维生素。维生素医学 VitA、D2、D3、 E、K1 等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性 VitB族族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。、叶酸、烟酸、泛酸等。分类分类按溶解度分按溶解度分 本章仅对维生素本章仅对维生素(A、B1、C、E)进行学习讨论进行学习讨论维生素医学CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3-H 维生素维生素A A醇醇-COCH3 维生素维生素A A醋酸酯醋酸酯-COC15

2、H31 维生素维生素A A棕榈酸酯棕榈酸酯R :第一节第一节 维生素维生素A维生素医学为一个具有共轭多烯醇侧链的为一个具有共轭多烯醇侧链的 环己烯环己烯（一）（一）结构与性质结构与性质一、一、v 具有具有UV吸收吸收v 存在多种立体异构化合物存在多种立体异构化合物v 天然维生素天然维生素A主要是反式主要是反式维生素医学v 易发生脱氢生成去氢维生素易发生脱氢生成去氢维生素A2v 易脱水生成去水维生素易脱水生成去水维生素A3v 易聚合反应生成无活性维生素易聚合反应生成无活性维生素A A维生素医学酸醛环氧化物、氧化剂紫外线、VitAVitAVitAO2v 或有金属离子存在时更易氧化或有金属离子存在时

3、更易氧化共轭多烯侧链共轭多烯侧链 易被氧化易被氧化（二）（二）维生素医学环氧化物环氧化物OCH2OHVitA醛醛HOCVitA酸酸COOH维生素医学（三）（三） 、与三氯化锑发生呈色反应、与三氯化锑发生呈色反应（四）（四） 、溶解性、溶解性不溶于水不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等易溶于有机溶剂和植物油等紫紫红红蓝蓝色色 3SbClVitACHCl3维生素医学三氯化锑反应三氯化锑反应（一）（一）条件条件 无水无醇无水无醇紫紫红红蓝蓝色色 3SbClVitACHCl3 鉴别试验鉴别试验二、二、维生素医学-RCOOSbCl5+CH2蓝色蓝色紫红紫红+CH2-RCOOSbCl5维生素医学VitAVit

4、A去水盐酸溶液溶解无水乙醇-300-400nm扫描扫描max为为326nm一个吸收峰一个吸收峰UV法法（二）（二）300-400nm扫描扫描384、367、389nm三个吸收峰三个吸收峰维生素医学去水去水VitA（VitA3）CH2CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3VitA维生素医学维生素医学USP 显色剂显色剂 磷钼酸磷钼酸 规定斑点颜色和规定斑点颜色和Rf值值BP 对照品法对照品法 显色剂显色剂 三氯化锑三氯化锑TLC法法（三）（三）维生素医学三、含量测定三、含量测定 目前各国药典均采用紫外分光光度法替目前各国药典均采用紫外分光光度法替代三氯化锑比色法代三氯化锑比色法（一）、紫外分光

5、光度法（一）、紫外分光光度法 利用维生素利用维生素A A醇和其醋酸酯分子中具醇和其醋酸酯分子中具多烯共轭体系结构，在多烯共轭体系结构，在325325328nm328nm处处有选择性吸收峰，故可进行含量测定。有选择性吸收峰，故可进行含量测定。维生素医学立体异构体立体异构体氧化产物及光照产物氧化产物及光照产物合成中间体合成中间体去氢维生素去氢维生素A A（ VitAVitA2 2）去水维生素去水维生素A A（ VitAVitA3 3）均对测定均对测定有干扰，有干扰，故采用故采用三三点校正法点校正法维生素医学1 1：测定原理，三个波长的吸收度，公：测定原理，三个波长的吸收度，公式计算校正吸收度，再计

6、算含量。故式计算校正吸收度，再计算含量。故得名。该法的依据：得名。该法的依据： 杂质的吸收在杂质的吸收在310340nm310340nm波长范围波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；度减小； 物质对光的吸收具有加和性。物质对光的吸收具有加和性。维生素医学2 2 波长的选择：最大吸收波长，及两侧各波长的选择：最大吸收波长，及两侧各选一波长选一波长 第一法（等波长法）第一法（等波长法） 1 1 =328nm =328nm， 1 =316nm， 1 =340nm， =12nm VitA VitA的的 maxmax（328nm328nm） Ch.PCh.P用于

7、测定维生素用于测定维生素A A醋酸酯醋酸酯维生素医学 第二法（等吸收法）第二法（等吸收法） 分别在分别在 1 1的两侧各选一点的两侧各选一点 A A 2 2 = A A 3 3 =6/7A =6/7A 1 1= 325nm 325nm， 2=310nm， 3 =334nm Ch.P用于测定维生素用于测定维生素A醇醇维生素医学 3. 杂质的吸收杂质的吸收 对对V.A有影响的杂质主要有以下几种：有影响的杂质主要有以下几种： (1) V.A2 和和V.A3 (2)维生素维生素A的氧化产物的氧化产物 (3) 维生素维生素A在光照下产生的无活性的聚合物在光照下产生的无活性的聚合物 (4)维生素维生素A的

8、异构体等。的异构体等。 以上这些杂质在以上这些杂质在310nm-340nm的波长范围内有吸的波长范围内有吸收，干扰维生素收，干扰维生素A的测定。的测定。维生素医学4.测定方法测定方法（1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素维生素A醋酸酯醋酸酯环己烷溶解）环己烷溶解） 1）方法）方法 在在300、316、328、340、 360nm测吸收测吸收度度 2）计算）计算 a.吸光系数吸光系数E1%1cm b.求效价（求效价（IU/g）：效价指每）：效价指每g供试品所含维生素供试品所含维生素的的A的国际单位数。的国际单位数。IU/g= c.求维生素求维生素A醋酸

9、酯占标示量的百分含量醋酸酯占标示量的百分含量l CAE1%1cm1900E1%1cm100%L100WW1900DA%标示量）标示量（维生素医学 3）换算因子：）换算因子： 4）A值的选择：值的选择： a.计算吸收度比值：与中国药典的吸收度比值相比计算吸收度比值：与中国药典的吸收度比值相比较，判断每个差值的绝对值是否超过较，判断每个差值的绝对值是否超过0.02。 b.判断法判断法 最大吸收波长在最大吸收波长在326-329nm之间，且之间，且5个波长下的个波长下的绝对值差值均不超过绝对值差值均不超过0.02时，可直接用时，可直接用328nm波波长处的测得的吸收度值求得吸收系数。长处的测得的吸收

10、度值求得吸收系数。维生素医学 最大吸收波长在最大吸收波长在326-329nm之间，计算之间，计算5个波长下个波长下的绝对差值，如果有一个或几个超过的绝对差值，如果有一个或几个超过0.02，应按，应按以下的方法进行判断：以下的方法进行判断：v若（若（A328校正校正-A328）*100%/A328 所得的数值的绝对所得的数值的绝对 值在值在3.0%，则仍不用校正公式计算吸收度。可直，则仍不用校正公式计算吸收度。可直接用接用A328代入代入E=A/C.Lv若（若（A328校正校正-A328）*100%/A328 所得的数值所得的数值 在在-15.0%到到-3.0%，则应用，则应用A328校正校正代

11、入代入E=A/C.Lv若（若（A328校正校正-A328）*100%/A328 所得的数值在小于所得的数值在小于-15%或大于或大于+3%，则不能用本法测定，应使用第，则不能用本法测定，应使用第二法。二法。维生素医学 如果最大吸收波长不在如果最大吸收波长不在326-329nm之间，也之间，也不能用本法测定。不能用本法测定。第一法的校正公式为：第一法的校正公式为： A328校正校正=3.52（2 A328 A316-A340）维生素医学（2）第二法（皂化法，适用于）第二法（皂化法，适用于维生素维生素A醇醇） 1）方法）方法 精密称取一定量的供试品，加精密称取一定量的供试品，加KOH乙醇溶乙醇溶液

12、后煮沸回流，得到的皂化液再经过提取、液后煮沸回流，得到的皂化液再经过提取、洗涤、滤过、浓缩和干燥等处理，最后用洗涤、滤过、浓缩和干燥等处理，最后用异丙醇溶解残渣并稀释成每异丙醇溶解残渣并稀释成每1ml中含维生素中含维生素A为为9-15个国际单位数的溶液，在个国际单位数的溶液，在300、310、325、334nm波长处测定吸收度，并确定最波长处测定吸收度，并确定最大吸收波长（应为大吸收波长（应为325nm）。）。 2）计算）计算 同第一法。见书同第一法。见书p250-251维生素医学3）A值的选择值的选择如果最大吸收波长在如果最大吸收波长在323-327nm之间，之间， 且且A300 /A325

13、比值比值0.73，按下法判断：，按下法判断：va. 若（若（A325校正校正-A325）*100%/A325 所得的数值的绝所得的数值的绝 对值在对值在3%，可直接用，可直接用A325 代入代入E=A/C.Lvb.若（若（A325校正校正-A325）*100%/A325 所得的数值的绝所得的数值的绝 对值超过对值超过3%，则用应用，则用应用A325校正校正代入代入E=A/C.L如果最大吸收波长不在如果最大吸收波长不在323-327nm之间，之间， 或或A300/A325比值比值0.73，表示供试品中杂质含量太高，表示供试品中杂质含量太高，应采用色谱法将未皂化部分纯化再进行测定。应采用色谱法将未

14、皂化部分纯化再进行测定。维生素医学 第二法的校正公式：第二法的校正公式：A325校正校正=6.815 A325 2.555A310-4.260A3346.讨论讨论 1）.吸收度校正方法：吸收度校正方法： 维生素维生素A醋酸酯：直线方程法（代数法）醋酸酯：直线方程法（代数法） 维生素维生素A醇：相似三角形法（几何法或醇：相似三角形法（几何法或6/7定位法）定位法） 2）.在应用三点校正法时，除其中一点是在最大在应用三点校正法时，除其中一点是在最大维生素医学 吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。如果仪器波长精度不准确时，会两侧进行测定。

15、如果仪器波长精度不准确时，会产生较大误差。因此，在测定之前务必要校正波产生较大误差。因此，在测定之前务必要校正波长，并可用全反式维生素长，并可用全反式维生素A进行测定，比较测定进行测定，比较测定结果和比值是否与对照品相符合，以进一步核对结果和比值是否与对照品相符合，以进一步核对波长是否准确。测定的样品不得少于两份。波长是否准确。测定的样品不得少于两份。7.应用示例应用示例 维生素维生素A胶丸、维生素胶丸、维生素AD胶丸和维生胶丸和维生素素AD滴剂等均可采用本法测定。滴剂等均可采用本法测定。维生素医学第一法第一法 第二法第二法测定对象测定对象 维生素维生素A A醋酸酯醋酸酯 维生素维生素A A醇

16、醇方法方法 直接取样，测定直接取样，测定 皂化提取，测定皂化提取，测定溶剂溶剂 环己烷环己烷 异丙醇异丙醇 maxmax 328 nm 325 nm 328 nm 325 nm测定波长测定波长 5 5个个 4 4个个换算因数换算因数 1900 18301900 1830第一法与第二法的区别第一法与第二法的区别维生素医学三氯化锑比色法三氯化锑比色法（二）（二）优点优点 简便简便 快速快速max 618nm620nm标准曲线法标准曲线法 SbOClSbClOH32缺点缺点呈色不稳定呈色不稳定 （5 10s内）内）水分干扰水分干扰与标准曲线温差与标准曲线温差1专属性差专属性差三氯化锑有腐蚀性三氯化锑

17、有腐蚀性（二）（二）蓝色蓝色+ +3SbClVitA维生素医学（三）高效液相色谱法（三）高效液相色谱法RP-HPLC同时测定人血清中同时测定人血清中VitA和和VitE的含量的含量1、仪器与分析条件：、仪器与分析条件：HPLC-UV、C18 (3003.9 mm）、甲醇水（）、甲醇水（96：4）、流速：）、流速：1.2 ml/min、检测波长：检测波长：08min (330 nm), 8 min后后(292 nm）内标：维生素内标：维生素A醋酸酯醋酸酯维生素医学 维生素维生素B1广泛分布于米糠、麦麸和广泛分布于米糠、麦麸和酵母中，具有维持糖代谢及神经传导与酵母中，具有维持糖代谢及神经传导与消化

18、的正常功能。主要用于治疗维生素消化的正常功能。主要用于治疗维生素B1缺乏症、多发性神经炎及胃肠疾病。缺乏症、多发性神经炎及胃肠疾病。第二节第二节 维生素维生素B1维生素医学NSCH3CH2CH2OHNNH3CNH2CH2+氨基嘧啶环氨基嘧啶环CH2噻唑环噻唑环(季铵碱季铵碱)HClCl-维生素医学 嘧啶环的氨基、噻唑环的季铵嘧啶环的氨基、噻唑环的季铵 为两个碱性集团为两个碱性集团维生素医学（一）（一） 溶解性溶解性1、易溶于水，乙醇微溶，、易溶于水，乙醇微溶， 乙醚不溶乙醚不溶2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性（二）（二）UV共轭双键共轭双键max = 246nm结构与性质结构与性质一、一、维生素

19、医学蓝色荧光硫色素环合开环并与嘧啶换上氨基噻唑环正丁醇铁氰化钾氧化 OH（三）（三） 硫色素反应硫色素反应维生素医学与生物碱沉淀剂与生物碱沉淀剂（碘化汞钾等）（碘化汞钾等）（四）生物碱沉淀反应（四）生物碱沉淀反应嘧啶环嘧啶环 噻唑环噻唑环 （五）氯化物特性（五）氯化物特性 本品为盐酸盐，呈氯化物的反应。本品为盐酸盐，呈氯化物的反应。维生素医学荧荧光光消消失失蓝蓝色色荧荧光光硫硫色色素素正正丁丁醇醇）（环环合合 + + HCNFeKOHNaOHVitB6321O OHChP鉴别试验鉴别试验二、二、（一）（一） 硫色素反应硫色素反应维生素医学CH2NNH3CNH2CH3NNaSC2H4OHONNH

20、3CNH2HClNSCH3C2H4OHCH2NaOHNNH3CNNNaSCH3C2H4OH-H2O维生素医学硫色素硫色素SCH3C2H4OHNNH3CNNH 环环合合NNH3CNNSCH3C2H4OH H22H维生素医学VitB1 4242HgIHBHgIK 淡淡黄黄H+ 2KIIIHIB2 红红色色H+白白色色硅硅钨钨酸酸 H+ OH4WO12OHSiOB23222 白白色色扇扇形形苦苦酮酮酸酸 H+（二）（二）沉淀反应沉淀反应维生素医学三、三、 含量测定含量测定 + + HClOClOBHClOHClClBAcHg）（喹那啶红亚甲蓝（紫红喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）天蓝）（一）（一） 非水溶

21、液滴定法非水溶液滴定法维生素医学 ml/mg.nMcT861622733710 反应摩尔比为反应摩尔比为1：2维生素医学UV法法（二）（二）维生素医学片剂、注射剂片剂、注射剂= 421%11cmE（每片）相当于标示量的（每片）相当于标示量的%=A = ECL规格规格g/片片g/100mlgChPWEA%cmD10011%100标示量标示量平均片重平均片重维生素医学（每（每ml）相当于标示量的）相当于标示量的%=规格规格g/mlml%VEA%cm100110011标示量标示量稀释倍数稀释倍数维生素医学（三）（三）硫色素荧光法硫色素荧光法1、荧光荧光硫色素硫色素异丁醇异丁醇铁氰化钾铁氰化钾1 1V

22、itBNaOH通过与对照品荧光强度的比较即可测得通过与对照品荧光强度的比较即可测得供试品含量供试品含量维生素医学2、实验操作、实验操作 40 ml具塞试管具塞试管3支支对照品溶液对照品溶液5 ml；其中其中2支加入氧化试剂支加入氧化试剂3.0 ml，再迅速加入，再迅速加入异丁醇异丁醇20 ml，振摇。第三支试管中加入，振摇。第三支试管中加入3.5 mol/l的的NaOH，同法操作为空白。，同法操作为空白。 另取三支试管加入对照品同法操作。另取三支试管加入对照品同法操作。 各试管中加入无水乙醇各试管中加入无水乙醇2 ml，分取异丁醇，分取异丁醇，进行荧光测定。进行荧光测定。维生素医学3、结果计算

23、、结果计算52 . 0dSbA含量（微克）维生素医学4、（1）灵敏度高，线性范围宽）灵敏度高，线性范围宽（2）代谢产物不干扰，适用于）代谢产物不干扰，适用于 体液分析体液分析（3）该法适用于）该法适用于VitB1的制剂含量分的制剂含量分析析（4）可用）可用BrCN为氧化剂，反应定量为氧化剂，反应定量完全，适合于生物样本分析完全，适合于生物样本分析维生素医学第三节第三节 维生素维生素C654321OOHHOO C OHHCH2OHL抗坏血酸抗坏血酸具有烯二醇结构；具有烯二醇结构；具有内酯环；具有内酯环；具具2个手性碳原子个手性碳原子具有旋光性具有旋光性维生素医学1、易溶于水、易溶于水2、水溶液呈

24、酸性、水溶液呈酸性结构与性质结构与性质一、一、（一）（一） 溶解性溶解性维生素医学O二烯醇结构二烯醇结构二酮基结构二酮基结构二烯醇结构二烯醇结构（二）（二）还原性还原性OHOHCCOOCC维生素医学CH2OHOOOO C OHHCH2OHCHHOCHOHCOCOCOONa HH+OH-有活性有活性有活性有活性无活性无活性OHOO C OHHCH2OHHOO维生素医学显显色色糠糠醛醛衍衍生生物物糠糠醛醛酚酚类类脱脱水水 + +H糖类的显色反应糖类的显色反应蓝蓝色色糠糠醛醛吡吡咯咯脱脱水水 + +HVitC50结构与糖类相似结构与糖类相似（三）（三） 具糖的性质具糖的性质维生素医学OOHHOO C

25、 OHHCH2OH123456C3OH的的pKa = 4.17C2OH的的pKa = 11.57酸性酸性（四）（四）一元酸一元酸维生素医学OOHHOO C OHHCH2OH123456L(+)抗坏血酸抗坏血酸活性最强活性最强手性手性C（C4、C5）（五）（五） 光学活性光学活性*维生素医学与碱反应与碱反应单钠盐单钠盐32CONa酮酸盐酮酸盐水解水解 NaOH（六）（六）水解性水解性弱碱中生成单钠盐，弱碱中生成单钠盐，强碱中水解强碱中水解维生素医学OHOO C OHHCH2OHHOOHOO C OHHCH2OHNaOCOONaOCOCCHOHHOCHCH2OHNa2CO3NaOH维生素医学七七

26、紫外吸收特性紫外吸收特性560E243nm1%1cm有最大吸收维生素医学与氧化剂的反应与氧化剂的反应（一）（一）鉴别试验鉴别试验二、二、OHOO C OHHCH2OHHOCH2OHOOOO C OHH O去氢抗坏血酸去氢抗坏血酸OVitC维生素医学（银银镜镜）黑黑 AgAgNOVitC1、与、与AgNO3反应反应2、与、与2，6 - 二氯靛酚反应二氯靛酚反应无色无色二氯靛酚二氯靛酚， VitC62氧化型氧化型玫瑰红色玫瑰红色+ +H还原型还原型蓝色蓝色 OHOH维生素医学NClHOClONClHOClOHH（玫瑰色）玫瑰色）（无色）（无色）维生素医学3.3.其他氧化剂的反应其他氧化剂的反应：亚

27、甲蓝或高锰酸钾亚甲蓝或高锰酸钾 试剂褪色试剂褪色碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜 砖红色沉淀砖红色沉淀磷钼酸磷钼酸 钼蓝钼蓝维生素医学糖类的反应糖类的反应（二）（二）蓝色糠醛戊糖脱水三氯醋酸VitC或盐酸或盐酸50吡咯吡咯USP维生素医学OO C OHHCH2OHHOOHCH2OHOO C OHHHHOOCCOHO OCHOH3CH2OHH2O维生素医学-CO2-H2OOCHN（蓝色）（蓝色）OCHO(糠醛糠醛)OCHOH3CH2OHCH戊糖戊糖NNH50(吡咯吡咯)维生素医学UV（三）（三）BP0.01mol/L HClnmmax243 58554511E%cm 维生素医学三、杂质检查三、杂质检查

28、1. 1.溶液的澄清度与颜色：有色杂质溶液的澄清度与颜色：有色杂质 分光光度法分光光度法2.2.铁、铜离子：原子吸收分光光度法铁、铜离子：原子吸收分光光度法维生素医学 + + + + +IIVitCH去氢抗坏血酸去氢抗坏血酸2指示剂指示剂 淀粉指示液淀粉指示液原理原理1、碘量法碘量法（一）（一）含量测定含量测定四、四、维生素医学OO C OHHOOCH2OHHI2+OHOO C OHHCH2OHHOH+ + +I维生素医学 取本品约取本品约0.2g，精密称定，加新，精密称定，加新沸过的冷水沸过的冷水100ml与稀醋酸与稀醋酸10ml使溶使溶解，加淀粉指示液解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴，立

29、即用碘滴定液（定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝）滴定，至溶液显蓝色，在色，在30秒内不褪。每秒内不褪。每1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol/L)相当于相当于8.806mg的的C6H8O6方法方法2、维生素医学（1）酸性环境）酸性环境 d . HCl （2）新沸冷）新沸冷H2O减慢减慢VitC被被O2氧化速度氧化速度讨论讨论3、（3）立即滴定）立即滴定 赶走水中赶走水中O2减少减少O2的干扰的干扰维生素医学（4）附加剂干扰的排除）附加剂干扰的排除片剂片剂 滑石粉滑石粉 过滤过滤注射剂注射剂 抗氧剂抗氧剂 丙酮丙酮甲醛甲醛Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 维生素

30、医学2，6 - 二氯靛酚钠滴定法法二氯靛酚钠滴定法法（二）（二）USPJP原理原理1、酚亚胺酚亚胺二氯靛酚二氯靛酚，- -6 62 2VitCVitC维生素医学空空样样二二氯氯靛靛酚酚液液空空白白样样品品VVHAcHPO 3自身指示终点法自身指示终点法蓝蓝色色玫玫瑰瑰红红 + +OHH无无色色还还原原 方法方法2、维生素医学（2）快速滴定）快速滴定 2min内内 （1）酸性环境）酸性环境 HPO3-HAc 稳定稳定VitC防止其他还原性物质干扰防止其他还原性物质干扰（3）剩余比色测定）剩余比色测定 AVitC测二氯靛酚（定量过量）（定量过量）（测剩余染料）（测剩余染料）讨论讨论3、维生素医学（

31、4）缺点）缺点 需经常标定需经常标定贮存贮存一周一周不稳定不稳定干扰多干扰多 氧化力较强氧化力较强维生素医学三、高效液相色谱法三、高效液相色谱法1、色谱条件、色谱条件2、标准溶液的制备、标准溶液的制备3、血浆样品的处理：酸性溶液沉淀蛋白法、血浆样品的处理：酸性溶液沉淀蛋白法4、方法学考察、方法学考察5、测定、测定维生素医学维生素医学36.3710570. 12XYr=0.9995LOQ=1.0 g/mlg/mlRSDintra8.33%RSDinter4.36%RecoveryL=90.1%RecovereyM=95.4%RecoveryH=97.5%维生素医学一、离子对一、离子对HPLC法测

32、定多种维生素法测定多种维生素 以能溶解于甲醇和水的樟脑磺酸为以能溶解于甲醇和水的樟脑磺酸为离子对试剂，以二巯基丙烷磺酸钠为抗离子对试剂，以二巯基丙烷磺酸钠为抗氧剂，采用氧剂，采用HPLC法同时测定多种法同时测定多种Vit的的含量含量维生素医学1、色谱条件：、色谱条件：色谱柱、流动相、检测波长色谱柱、流动相、检测波长2、样品液的制备：、样品液的制备：水溶性水溶性Vit(配制内标苯酚配制内标苯酚IS、标准液、样品、标准液、样品液）液）脂溶性脂溶性Vit（配制标准液和样品液）（配制标准液和样品液）3、测定：、测定：水溶性测定波长水溶性测定波长272 nm，脂溶，脂溶性测定波长性测定波长 280 nm

33、4、计算、计算 外标法和内标法外标法和内标法维生素医学1、Apparatus and Reagents 二元泵二元泵HPLCUV N2000Workstation Standards:2、Methods and Results维生素医学Chromatographic conditions:C18 column (2504.6, i.d., 5m)m)Mobile phase: 0.05 mol/l KHMobile phase: 0.05 mol/l KH2PO4-CH3CN (97:3)-A and B (methanol) in Gradient elution mode as follo

34、wing:Detection wavelength: 210 nmFlow rate: 1.0 ml/minColumn temperature :Room temperature)10:90(:min10)40:60(:min20)10:90(:BABABA维生素医学维生素医学非水非水HPLC法同时测定法同时测定4种脂溶种脂溶性维生素性维生素VitA、VitD2、VitE、VitK11、仪器与试剂：、仪器与试剂：HPLC、UV、N2000工作站、工作站、对照品购自中检所对照品购自中检所2、分析方法：色谱条件（流动相乙腈甲醇、分析方法：色谱条件（流动相乙腈甲醇80：20），），ODS，溶液的制

35、备，方法学考察，溶液的制备，方法学考察3、结果与讨论：如何优选合适的流动相、结果与讨论：如何优选合适的流动相维生素医学 苯并二氢吡喃醇苯并二氢吡喃醇VitE为二氢吡喃醇衍生物为二氢吡喃醇衍生物第五节第五节 维生素维生素EOHO 维生素医学OR1HOR2CH3名名 称称R1R2相对活性相对活性-生育酚生育酚-生育酚生育酚 -生育酚生育酚 -生育酚生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*维生素医学CH3COOCH3CH3CH3CH3CH3CH3H3CH3COdl生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯维生素医学结构与性质结构与性质一、一、苯环苯环 + 二氢吡喃环二氢吡喃环 + 饱和烃链饱和

36、烃链1、溶解性、溶解性 易溶于乙醇、丙酮、易溶于乙醇、丙酮、 乙醚等，水中不溶乙醚等，水中不溶2、氧化性、氧化性 对氧十分敏感与光、对氧十分敏感与光、 空气可被氧化为生育醌和生育空气可被氧化为生育醌和生育 酚二聚体酚二聚体维生素医学3、UV284 nm4、乙酰化的酚羟基、乙酰化的酚羟基 易水解易水解O醌型化合物醌型化合物生育酚生育酚 + +or OHHVitE杂质，需检查杂质，需检查维生素医学O生育红生育红（一）（一）硝酸反应硝酸反应橙红色橙红色鉴别鉴别二、二、75水解水解HNO3VitE生育酚生育酚维生素医学OOCH3C16H33H3CCH3O（橙红色）（橙红色）生育红生育红CH3HOOCH

37、3C16H33CH3H3C生育酚生育酚HNO3强氧化剂强氧化剂维生素医学三氯化铁三氯化铁-联吡啶反应联吡啶反应（二）（二）OCH3CH3CH3CH3CH3-COOC16H33KOHHOOCH3CH3CH3CH3C16H33维生素医学OOH3CCH3OHCH3C16H33CH3CH3HOOCH3C16H33CH3H3C生育酚生育酚对对-生育醌生育醌+3FeO弱氧化弱氧化剂剂维生素医学血红色血红色+23Fe3+2FeNNNN维生素医学 = 41.045.5%cmE11max = 284nmmin = 254nm0.01%无水乙醇中无水乙醇中UV法法（三）（三）维生素医学薄层板薄层板 硅胶硅胶G展开

38、剂展开剂 环己烷环己烷 -乙醚（乙醚（4 ：1）显色剂显色剂 硫酸（硫酸（105 5） VitE Rf = 0.7 -生育酚生育酚 Rf = 0.5 -生育醌生育醌 Rf = 0.9TLC法法（四）（四）维生素医学2. 游离生育酚游离生育酚 生生育育醌醌对对生生育育酚酚 + + + + +3422CeCe 杂质检查杂质检查 三、三、原理原理:利用游离生育酚的还原性，可被硫酸铈定量氧化利用游离生育酚的还原性，可被硫酸铈定量氧化 根据消耗硫酸铈滴定液的体积来控制游离生育酚的限量根据消耗硫酸铈滴定液的体积来控制游离生育酚的限量。 酸度酸度 以以NaOHNaOH滴定液（滴定液（0.1mol/L0.5m

39、l0.1mol/L0.5ml）体）体积控制。积控制。维生素医学nCMT （M生育酚生育酚= 430.8）（ml/mg154. 228 .43001. 0T 例例 取本品取本品0.10g，加无水乙醇，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸滴，用硫酸铈液（铈液（0.01mol/L0.01mol/L）滴定，消耗硫酸）滴定，消耗硫酸铈液（铈液（0.01mol/L0.01mol/L）不得过）不得过 1.0ml 1.0ml。维生素医学%100WTV% 限量限量2.15%15. 2%1001 . 0002154. 00 . 1% 限限量量限量限量维生素医学四、四、含量测定含量测

40、定GC法（法定方法）法（法定方法）（一）（一）1、选择性好选择性好灵敏度高灵敏度高速度快速度快分离效能好分离效能好挥发性低、不挥发性低、不稳定、极性强稳定、极性强衍生化易受衍生化易受样品蒸气压限样品蒸气压限制制维生素医学载气载气N2固定液固定液硅酮（硅酮（OV-17）担体担体硅藻土或高分子多孔小球硅藻土或高分子多孔小球柱温柱温265检测器检测器氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标内标正三十二烷正三十二烷 n 500 R2VitE测定的色谱条件测定的色谱条件2、内标法加校正因子内标法加校正因子维生素医学内标法内标法供试液（样品供试液（样品+内标）内标）内标物内标物对照液（对照对照液

41、（对照+内标）内标）是样品中不存在的物质是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近与被测组分峰靠近能与各组分完全分离能与各组分完全分离与被测组分的量接近与被测组分的量接近维生素医学1KAA 内内对对2KAA 内内样样WWKK%VitE%10012 稀释倍数稀释倍数稀释倍数稀释倍数样样对对实际工作中的计算方法实际工作中的计算方法维生素医学（二）（二）HPLC法法 RP-HPLC法、甲醇水（法、甲醇水（49：1）、）、 UV= 292 nm、外标法定量、外标法定量 rxrHHmmg维生素医学三、荧光分光光度法三、荧光分光光度法1、药物本身具有荧光、药物本身具有荧光2、溶剂产生的拉曼光谱影响测定方法的、溶

42、剂产生的拉曼光谱影响测定方法的灵敏度和准确度灵敏度和准确度3、采用同步荧光扫描法测定，消除干扰、采用同步荧光扫描法测定，消除干扰同步荧光扫描法测定血清中同步荧光扫描法测定血清中VitE的含量的含量维生素医学1、仪器、仪器2、样品液的制备、样品液的制备:样品测定管样品测定管U、标、标准管准管S、空白管、空白管B3、测定方法：测定、测定方法：测定Fu、Fs、Fb4、计算：、计算：)/(0 . 4LmgFFFFVbsbuE维生素医学 公元前公元前35003500年年- -古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来 的维的维A A。 16001600年年- -

43、医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。 17471747年年- -苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C C。18311831年年- -胡萝卜素被发现。胡萝卜素被发现。 19051905年年- -甲状腺肿大被碘治愈。甲状腺肿大被碘治愈。 19111911年年- -波兰化学家丰克为维生素命名。波兰化学家丰克为维生素命名。 19151915年年- -科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的19161916年年- -维生素维生素B B被分离出来。被分离出来。 19

44、171917年年- -英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是 缺乏维缺乏维D D引起的。引起的。 维生素发展史维生素发展史维生素医学19201920年年- -发现人体可将胡萝卜转化为维生素发现人体可将胡萝卜转化为维生素A A。 19221922年年- -维维E E被发现。被发现。 19281928年年- -科学家发现维科学家发现维B B至少有两种类型。至少有两种类型。 19331933年年- -维维E E首次用于治疗。首次用于治疗。 19481948年年- -大剂量维大剂量维C C用于治疗炎症。用于治疗炎症。 19491949年年- -

45、维维B3B3与维与维C C用于治疗精神分裂症。用于治疗精神分裂症。 19541954年年- -自由基与人体老化的关系被揭开。自由基与人体老化的关系被揭开。 19571957年年-Q10-Q10多酶被发现。多酶被发现。 19691969年年- -体内超级抗氧化酶被发现。体内超级抗氧化酶被发现。 19701970年年- -维维C C被用于治疗感冒。被用于治疗感冒。 19931993年年- -哈佛大学发表维生素哈佛大学发表维生素E E与心脏病关系的研究结果。与心脏病关系的研究结果。维生素医学练习与思考练习与思考AA型题型题 1. 1. 维生素维生素B B1 1的鉴别方法是的鉴别方法是A.A.三氯化铁

46、反应三氯化铁反应 B. B. 硫色素反应硫色素反应 C. C. 柯柏反应柯柏反应 D.D.与碱性酒石酸铜试液反应与碱性酒石酸铜试液反应 E. E. 双缩脲反应双缩脲反应维生素医学2. 2. 维生素维生素E E中国药典中国药典规定的含量规定的含量 测定方法为测定方法为A.A.非水溶液滴定法非水溶液滴定法 B.B.旋光法旋光法 C.HPLCC.HPLC法法 D.D.紫外分光法紫外分光法 E.GCE.GC法法维生素医学BB型题型题 A A。亚硝基铁氰化钠反应。亚硝基铁氰化钠反应 B. B. 硫色素反应硫色素反应 C.C.硝酸反应硝酸反应 D. D. 三氯化锑反应三氯化锑反应 E. E. 硝酸银试液的

47、反应硝酸银试液的反应 1. 1. 维生素维生素C C 2. 2. 维生素维生素E E 3. 3. 维生素维生素B B1 1 4. 4. 维生素维生素A AECBD维生素医学XX型题型题 1. 1. 用碘量法测定的药物有用碘量法测定的药物有A. A. 醋酸地塞米松醋酸地塞米松 B. B. 丙酸睾酮丙酸睾酮 C. C. 维生素维生素C C D. D. 硫酸阿托品硫酸阿托品 E. E. 维生素维生素C C注射液注射液维生素医学2. 2. 可用紫外分光光度法测定含量的可用紫外分光光度法测定含量的 药物有药物有A. A. 维生素维生素A A丸剂丸剂 B. B. 丙酸睾酮丙酸睾酮 C. C. 维生素维生素

48、A A D. D. 硫酸阿托品硫酸阿托品 E. E. 维生素维生素B B1 1片片维生素医学计算题计算题 维生素维生素A的紫外法含量测定，掌握教材的紫外法含量测定，掌握教材上的例题和练习题上的例题和练习题简答题简答题 简述碘量法测维生素简述碘量法测维生素C含量的原理及实含量的原理及实验注意事项。验注意事项。维生素医学第四节第四节 维生素维生素DHOHHCH2CH3HHHCH3CH3CH3CH3维生素维生素D2骨化醇骨化醇一、结构与性质一、结构与性质维生素医学HOHHCH2CH3HHCH3CH3CH3维生素维生素D3胆骨化醇胆骨化醇维生素医学开环的甾体开环的甾体：具有甾类化合物的显色反：具有甾类

49、化合物的显色反应，可用于鉴别。应，可用于鉴别。手性碳原子手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别。：具有旋光性，可用于鉴别。多烯多烯：可进行紫外检测。：可进行紫外检测。维生素医学性质：性质：1、脂溶性、脂溶性2、不稳定性、不稳定性3、旋光性、旋光性4、显色反应、显色反应5、紫外吸收特性、紫外吸收特性维生素医学二、鉴别试验二、鉴别试验1. 显色反应显色反应醋酐醋酐-硫酸反应硫酸反应 D2 黄黄 红红 紫紫 绿绿 D3 黄黄 红红 紫、蓝绿紫、蓝绿 绿绿 三氯化锑反应三氯化锑反应 橙红色渐变粉红橙红色渐变粉红三氯化铁反应三氯化铁反应 橙黄色橙黄色二氯丙醇和乙酰氯反应二氯丙醇和乙酰氯反应 绿色绿色维生素医学2. 比旋度鉴别比旋度鉴别维生素维生素D D2 2维生素维生素D D3 3溶溶 剂剂 浓浓 度度 比旋度值比旋度值无水乙醇无水乙醇无水乙醇无水乙醇40mg/ml40mg/ml5mg/ml5mg/ml+102.5+102.5+107.5+107.5 +105+105+112+112注意事项注意事项：应于容器开启：应于容器开启3030分钟内取样，分钟