SPE技术在畜禽产品残留的分析应用

1、1会计学SPE技术在畜禽产品残留的分析应用技术在畜禽产品残留的分析应用2021-12-122021-12-132021-12-142021-12-15样品浓缩样品浓缩 提高灵敏度提高灵敏度 样品净化样品净化 提高灵敏度提高灵敏度 延长系统不间断开机时间延长系统不间断开机时间 延长色谱柱寿命延长色谱柱寿命 比液液萃取更快比液液萃取更快, ,节省溶剂节省溶剂 可自动化批量处理可自动化批量处理 重现性好重现性好 2021-12-162021-12-172002 2002 Waters Waters 最新革新SPESPE技术 首次使得洗脱体积低至25 L 25 L 无需挥发与重现配制，洗脱后直接进样即

2、可 是小体积样品的理想提取工具 灵敏度可以提高25x25x 2004 2004 推出用于保留强碱( (如季铵盐) )和强酸( (如磺酸盐) )的WCXWCX和 WAX WAX 吸附剂2021-12-182021-12-192021-12-1102021-12-1112021-12-1122021-12-1132021-12-1142021-12-1152021-12-1162021-12-1172021-12-1182021-12-1192021-12-1202021-12-1212021-12-1222021-12-1232021-12-1242021-12-1252021-12-12620

3、21-12-1272021-12-1282021-12-1292021-12-1302021-12-1312021-12-1322021-12-1332021-12-1342021-12-1352021-12-1362021-12-1372021-12-1382021-12-1392021-12-1402021-12-1412021-12-1422021-12-1432021-12-1442021-12-1452021-12-1462021-12-1472021-12-1482021-12-1492021-12-1502021-12-1512021-12-1522021-12-1532021-

4、12-1542021-12-1552021-12-1562021-12-1572021-12-158国家科技攻关计划课题国家科技攻关计划课题畜禽产品质量安全关键控制技术系列标准研究 ( (课题编号：课题编号： 2002BA906A75 )2002BA906A75 ) 农业部畜禽产品质量监督检验测试中心农业部畜禽产品质量监督检验测试中心 2021-12-159国家科技攻关计划子课题国家科技攻关计划子课题三种兽药使用规范验证三种兽药使用规范验证和四种兽药残留检测方法研究和四种兽药残留检测方法研究 ( (子课题编号：子课题编号： 2002BA906A37-01 )2002BA906A37-01 )

5、农业部畜禽产品质量监督检验测试中心农业部畜禽产品质量监督检验测试中心 20052005年年1111月月1010日日 2021-12-1602020种兽药残留检测方法的技术要点种兽药残留检测方法的技术要点2 22.1 2.1 猪组织中已烯雌酚、已烷雌酚、已二烯雌酚残留检测方法研究（气相色谱猪组织中已烯雌酚、已烷雌酚、已二烯雌酚残留检测方法研究（气相色谱- -质质谱法）谱法） 在碱化的条件下用在碱化的条件下用乙酸乙酯提取乙酸乙酯提取猪组织样品中己烯雌酚、已二烯雌酚和猪组织样品中己烯雌酚、已二烯雌酚和已烷雌酚残留，然后通过已烷雌酚残留，然后通过碳酸钠溶液和硅胶柱对洗脱物质进行净化碳酸钠溶液和硅胶柱对

6、洗脱物质进行净化处理处理。净化后的样品平均分两份进行吹干后。净化后的样品平均分两份进行吹干后衍生，衍生，BSTFABSTFA衍生衍生后进行气相色后进行气相色谱质谱分析。谱质谱分析。 检测限检测限:0.25 :0.25 g/kg -0.5g/kg -0.5 g/kgg/kg；回收率；回收率:60.9%:60.9%85.6%85.6% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 2021-12-161已二烯雌酚标准溶液经衍生化后已二烯雌酚标准溶液经衍生化后选择离子模式下的总离子流图选择离子模式下的总离子流图猪肝添加样品总离子流图猪肝添加样品总离子流图(已二烯已二

7、烯雌酚添加浓度为雌酚添加浓度为4g/kg)2021-12-1622.2 2.2 猪组织中雌二醇残留检测方法研猪组织中雌二醇残留检测方法研究（液相色谱究（液相色谱- -质谱法）质谱法） 试样匀浆后试样匀浆后, ,加入加入氘代雌二醇内标氘代雌二醇内标, ,经经正己烷脱脂正己烷脱脂, ,经经HLBHLB柱、硅胶柱、氨柱、硅胶柱、氨基柱净化后，于液质联用仪基柱净化后，于液质联用仪上进行测定。同位素内标定量。上进行测定。同位素内标定量。 检测限检测限:1 :1 g/kgg/kg；回收率；回收率:97.1%:97.1%106.1%106.1% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系

8、数20% 20% 2021-12-1630.005.0010.0015.0020.0025.00Time33100%24100%13100%40100%1005liver B 401402 10UL4: SIR of 1 Channel ES- TIC6.70e410.239.785.247.5114.8613.501009 5 ppb add E2D 10ul2: SIR of 1 Channel ES- 271.72.51e511.291009 2ppb add E2D 10ul 2: SIR of 1 Channel ES- 271.71.30e511.291009 1ppb add E

9、2D2: SIR of 1 Channel ES- 271.78.95e411.3410.789.17猪肝添加雌二醇色谱图猪肝添加雌二醇色谱图(从上至下添加浓度依次为从上至下添加浓度依次为 0g/kg, 5g/kg, 2g/kg, 1g/kg) 2021-12-1642.3 2.3 猪尿液中丙酸睾酮残留检测方法猪尿液中丙酸睾酮残留检测方法（液相色谱（液相色谱- -质谱法）质谱法） 猪尿样品经猪尿样品经固相萃取小柱净化后，供液相色谱固相萃取小柱净化后，供液相色谱- -质谱仪质谱仪测定。测定。 丙酸睾酮检测限丙酸睾酮检测限: 1.0 : 1.0 g/kgg/kg 丙酸睾酮回收率丙酸睾酮回收率: 6

10、2.2%: 62.2%73.5%73.5% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 260280300320340m/z0100%345.6253.4271.5254.4255.4289.5272.5279.1327.5309.4291.5331.4346.6347.61.002.003.004.005.006.007.00Time21100%6.81丙酸睾酮标准溶液质谱图丙酸睾酮标准溶液质谱图 空白猪尿中添加空白猪尿中添加50g/L50g/L的丙酸睾酮标准的丙酸睾酮标准溶液后的溶液后的SIRSIR色谱图色谱图 2021-12-1652.52.5猪组织及

11、猪尿中克伦特罗、沙丁胺猪组织及猪尿中克伦特罗、沙丁胺醇残留检测方法（气相色谱醇残留检测方法（气相色谱- -质谱法）质谱法） 试样用试样用高氯酸高氯酸溶液匀浆、超声加热提取，用溶液匀浆、超声加热提取，用异丙醇异丙醇+ +乙酸乙酯乙酸乙酯(40+60)(40+60)萃萃取，有机相浓缩，经取，有机相浓缩，经弱阳离子交换柱进行分离弱阳离子交换柱进行分离，用，用乙醇乙醇+ +浓氨水浓氨水(98+2)(98+2)溶液洗溶液洗脱，洗脱液浓缩，经脱，洗脱液浓缩，经N,ON,O双三甲基硅烷三氟乙酰胺双三甲基硅烷三氟乙酰胺( (BSTFA)BSTFA)衍生衍生后于气质联用后于气质联用仪上进行测定。外标法定量。仪上

12、进行测定。外标法定量。 检测限检测限:1 :1 g/kgg/kg；回收率；回收率:60.37%:60.37%93.86%93.86% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 2021-12-1668.509.009.50 10.00 10.50 11.00 11.50 12.00 12.50 13.00 13.501000200030004000500060007000Time-AbundanceTIC: 0831015.DSALCLEN猪肝加标样色谱图猪肝加标样色谱图 (2(2 g/kg)g/kg)2021-12-1672.6 2.6 猪组织及猪尿中莱

13、克多巴胺残猪组织及猪尿中莱克多巴胺残留检测方法（气相色谱留检测方法（气相色谱- -质谱法）质谱法） 样品经过样品经过高氯酸高氯酸水解提取，用水解提取，用乙酸乙酯和异丙醇（乙酸乙酯和异丙醇（4 4：6 6）再次提取后再次提取后过过SCXSCX阳离子小柱阳离子小柱净化，用合适的溶剂选择洗脱后净化，用合适的溶剂选择洗脱后, , 氮气吹干，供高效液相氮气吹干，供高效液相色谱定量（质谱检测器）测定。外标法定量。色谱定量（质谱检测器）测定。外标法定量。 检测限检测限:1 :1 g/kgg/kg；回收率；回收率:66.47%:66.47%86.21%86.21% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变

14、异系数，批间变异系数20%20% 2021-12-168300 300 g/Lg/L标准溶液质谱图标准溶液质谱图 肉添加肉添加1010 g/kgg/kg质谱质谱图图2021-12-1692.7 2.7 猪组织中氯霉素残留检测方法（猪组织中氯霉素残留检测方法（液相色谱液相色谱- -质谱法）质谱法） 样品经过样品经过乙腈乙腈- -水（水（1+11+1）溶液溶液、乙酸乙酯、乙酸乙酯重复提取，用重复提取，用正己烷正己烷除去样除去样品中的脂肪等杂质，品中的脂肪等杂质，C C1818固相萃取柱固相萃取柱进一步净化，进一步净化，N N2 2气吹干后供高效液相色气吹干后供高效液相色谱定量（质谱检测器）测定。外

15、标法定量。谱定量（质谱检测器）测定。外标法定量。 检测限检测限:0.1 :0.1 g/kgg/kg；回收率；回收率:67.4%:67.4%87.0%87.0% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 1 1 g/Lg/L标准溶液图标准溶液图肉添加肉添加1 1 g/kgg/kg图图2021-12-170tp_52.004.006.008.0010.00Time11100%std_1ppb07081: SIR of 4 Channels ES- TIC3.78e58.330.031.16tp_52.505.007.5010.00Time36100%meat_

16、100ppt07111: SIR of 4 Channels ES- TIC3.46e51.820.038.482.432.767.313.934.226.009.9011.6411.902021-12-1712.8 2.8 猪组织中粘杆菌素残留检测方法猪组织中粘杆菌素残留检测方法（液相色谱法）（液相色谱法） 待测动物组织中残留的粘杆菌素经待测动物组织中残留的粘杆菌素经三氯乙酸三氯乙酸- -甲醇甲醇溶液提取，溶液提取，C C1818固相萃取柱固相萃取柱净化后，与净化后，与荧光衍生化荧光衍生化试剂反应，用高效液相色谱（荧光试剂反应，用高效液相色谱（荧光检测器）进行检测，外标法定量。检测器）进行检

17、测，外标法定量。 检测限检测限:75 :75 g/kgg/kg；定量限；定量限:150 :150 g/kg, g/kg, 回收率回收率:80.1%:80.1%108.5%108.5% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% a a：空白样品图：空白样品图 b b：添加：添加0.05g/g0.05g/g粘杆菌素样品图粘杆菌素样品图2021-12-1722.9 2.9 猪组织中磺胺类药物残留检测方法猪组织中磺胺类药物残留检测方法（液相色谱法）（液相色谱法） 组织样品经组织样品经乙腈乙腈提取后，在上清液中加入提取后，在上清液中加入正己烷正己烷进行液液分配，取进

18、行液液分配，取下层溶液加入下层溶液加入正丙醇正丙醇减压干燥，残留物用减压干燥，残留物用乙酸乙酯乙酸乙酯溶解，过溶解，过氨基鍵合氨基鍵合小柱小柱, , 以乙酸乙醇溶液洗脱，氮气吹干后用流动相溶解，定容后用高以乙酸乙醇溶液洗脱，氮气吹干后用流动相溶解，定容后用高效液相色谱仪进行检测。效液相色谱仪进行检测。 检测限检测限:3:35 5 g/kgg/kg；回收率；回收率:65.1%:65.1%92.1%92.1% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 2021-12-173磺胺类药物标准品色谱图磺胺类药物标准品色谱图猪肝添加磺胺类药物色谱图猪肝添加磺胺类药物色

19、谱图2021-12-1742.10 2.10 猪组织中乙酰甲喹残留检测方法（猪组织中乙酰甲喹残留检测方法（液相色谱法）液相色谱法） 动物组织匀浆用动物组织匀浆用双蒸水、三氯乙酸双蒸水、三氯乙酸提取，经提取，经C C1818固相小柱固相小柱净化，净化，80%80%甲醇甲醇洗脱，收集洗脱液，作为试样溶液供高效液相色谱（配紫洗脱，收集洗脱液，作为试样溶液供高效液相色谱（配紫外检测器）分析，外标法定量外检测器）分析，外标法定量 检测限检测限:50 :50 g/kg g/kg 回收率回收率:60.1%:60.1%83.1%83.1% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20%

20、 20% 空白猪肉组织试样色谱图空白猪肉组织试样色谱图 猪肉试样中添加乙酰甲喹色谱图猪肉试样中添加乙酰甲喹色谱图 2021-12-1752.11 2.11 动物组织（猪、鸡）中硝基咪唑类药物动物组织（猪、鸡）中硝基咪唑类药物多残留检测方法（液相色谱多残留检测方法（液相色谱- -质谱法）质谱法） 待测动物组织中残留的硝基咪唑类药物用待测动物组织中残留的硝基咪唑类药物用乙酸乙酯乙酸乙酯提取，液提取，液/ /液萃液萃取分离取分离, ,固相萃取柱净化固相萃取柱净化后，通过高效液相色谱后，通过高效液相色谱/ /质谱联用的质谱联用的大气压化学大气压化学电离正离子电离正离子检测检测（APCI+APCI+）方

21、式方式, ,进行选择离子进行选择离子 (SIR)(SIR)检测，外标法定量检测，外标法定量，实现了三种硝基咪唑类化合物的多残留确证。，实现了三种硝基咪唑类化合物的多残留确证。 检测限检测限:0.5-1.0 :0.5-1.0 g/kgg/kg；回收率；回收率:55.31%:55.31%88.66%88.66% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% MNZ, RNZ, DMZ 82.503.003.504.004.505.005.506.006.507.007.508.008.50Time0100%0100%0100%GAN-SPIKING2-1SIR o

22、f 3 Channels AP+ 2012.47e7Area5.653566772GAN-SPIKING2-1SIR of 3 Channels AP+ 1722.45e7Area5.022377147GAN-SPIKING2-1SIR of 3 Channels AP+ 1421.73e7Area7.373023039猪肝加标样选择离子检测色谱图猪肝加标样选择离子检测色谱图. (a) 洛硝哒唑洛硝哒唑(M/Z= 201, 2.0g/kg); (b) 甲硝唑甲硝唑（M/Z =172, 1.0g/kg）; (c) 地美硝唑（地美硝唑（M/Z= 142, 1.0g/kg） 2021-12-1762

23、.12 2.12 动物（羊、猪）组织中伊维菌素类药动物（羊、猪）组织中伊维菌素类药物多残留检测方法（液相色谱法）物多残留检测方法（液相色谱法） 待测动物组织中残留的伊维菌素类药物经待测动物组织中残留的伊维菌素类药物经乙腈乙腈提取，提取，碱性氧化铝碱性氧化铝固相萃取柱净化后，与固相萃取柱净化后，与荧光衍生化试剂荧光衍生化试剂反应，用高效液相色谱（荧光反应，用高效液相色谱（荧光检测器）检测器）, ,进行检测，外标法定量，实现了三种阿维菌素类药物的多进行检测，外标法定量，实现了三种阿维菌素类药物的多残留分析。残留分析。 检测限检测限:1.0 :1.0 g/kgg/kg；回收率；回收率:63.5%:6

24、3.5%90.3%90.3% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% mV0 .0 02 .0 04 .0 06 .0 08 .0 01 0 .0 0Min u te s2 .0 04 .0 06 .0 08 .0 01 0 .0 01 2 .0 01 4 .0 01 6 .0 01 8 .0 02 0 .0 0鸡肉空白样品色谱图鸡肉空白样品色谱图 mV0.002.004.006.008.0010.00Minutes2.004.006.008.0010.0012.0 014.0016.0018.0020.0 08.14810.83713.625鸡肉加标样

25、色谱图鸡肉加标样色谱图( (依次为阿维菌素依次为阿维菌素、多拉菌素和依维菌素、多拉菌素和依维菌素 5050g/kg)g/kg) 2021-12-1772.13 2.13 动物组织中氟苯尼考残留检测方法（液动物组织中氟苯尼考残留检测方法（液相色谱法）相色谱法） 动物组织匀浆用动物组织匀浆用乙腈乙腈提取，经提取，经C18C18固相小柱固相小柱净化，净化，60%60%甲醇甲醇洗脱，洗脱，N N2 2吹干，残渣用流动相溶解，过膜，作为试样溶液供高效液相色谱（配紫吹干，残渣用流动相溶解，过膜，作为试样溶液供高效液相色谱（配紫外检测器）分析，外标法定量。外检测器）分析，外标法定量。 检测限检测限: 10

26、: 10 g/kgg/kg；定量限为；定量限为20 20 g/kgg/kg 回收率回收率: 60.5%: 60.5%103.0% 103.0% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% min24681012mAU -1-0.500.51空白猪肉组织试样色谱图空白猪肉组织试样色谱图 min2468101214mAU -5-2.502.557.51012.51517.5 flrofenicol 猪肉试样中添加氟苯尼考色谱图猪肉试样中添加氟苯尼考色谱图 2021-12-1782.15 2.15 鸡组织中甲基盐霉素残留检测方法（鸡组织中甲基盐霉素残留检测方法（液

27、相色谱法）液相色谱法） 组织样品经组织样品经异辛烷异辛烷提取后，上清液用提取后，上清液用硅胶柱硅胶柱净化分离，用净化分离，用甲醇甲醇洗洗脱，洗脱液浓缩后用脱，洗脱液浓缩后用甲醇甲醇/ /水水溶解。以甲醇溶解。以甲醇/ /冰乙酸冰乙酸/ /水作为流动相、水作为流动相、香香草醛为衍生剂草醛为衍生剂，用高效液相色谱柱后衍生化法测定。，用高效液相色谱柱后衍生化法测定。 检测限检测限:7 :7 g/kgg/kg；回收率；回收率:76.4%:76.4%93.1%93.1% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 鸡肾空白色谱图鸡肾空白色谱图鸡肾添加甲基盐霉素色谱图鸡

28、肾添加甲基盐霉素色谱图2021-12-1792.16 2.16 鸡组织中地克珠利、尼卡巴嗪多残留鸡组织中地克珠利、尼卡巴嗪多残留检测方法（液相色谱法）检测方法（液相色谱法） 鸡组织匀浆用鸡组织匀浆用乙腈乙腈（脂肪用（脂肪用90%90%乙腈）提取，经乙腈）提取，经碱性氧化铝碱性氧化铝固相小固相小柱净化，回收液减压蒸干，残渣用流动相溶解，高速离心，作为试样柱净化，回收液减压蒸干，残渣用流动相溶解，高速离心，作为试样溶液供高效液相色谱（配紫外检测器）分析，外标法定量。溶液供高效液相色谱（配紫外检测器）分析，外标法定量。地克珠利检测限地克珠利检测限: 250 : 250 g/kg, g/kg, 定量限定量限:500:500 g/kgg/kg；尼卡巴嗪检测限尼卡巴嗪检测限:100 :100 g/kg, g/kg, 定量限定量限:200:200 g/kg;g/kg;回收率回收率:70.0%:70.0%97.6% 97.6% ；批内变异系数；批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 空白鸡肉组织试样色谱图空白鸡肉组织试样色谱图 鸡肌肉试样中添加地克珠利鸡肌肉试样中添加地克珠利(250(250g/kgg/kg） 、尼克巴嗪（、尼克巴嗪（100100g/kgg/kg）色谱图）色谱图 2021-12-180 休药休药0h0h盐霉素残留检测值远低于盐霉素残留检测值远