皂布叶提取物抗痛风作用研究

1、    皂布叶提取物抗痛风作用研究    刘安韬张婷梁红摘要目的研究皂布叶提取物抗痛风作用。方法采用小鼠腹腔注射次黄嘌呤建立高尿酸血症模型，观察造模后皂布叶提取物对高尿酸血症小鼠及正常小鼠血清尿酸水平的影响；给大鼠足跖注射微晶型尿酸钠结晶（msu），复制痛风性炎症模型，观察皂布叶提取物对痛风性炎症的影响；二甲苯耳廓肿胀法观察皂布叶提取物的抗炎作用；热板法、扭体法观察皂布叶提取物的镇痛作用。结果与模型组相比，皂布叶提取物在高剂量和中剂量时（10.0g药材/kg体重、2.5g药材/kg体重），对正常小鼠尿酸水平无明显影响，可以明显降低高尿酸血症模型小鼠的血液

2、尿酸浓度；对大鼠足跖肿胀有明显抑制作用，可显著抑制由二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀；可提高小鼠热板痛阈值及减少由醋酸引起的扭体反应次数。结论皂布叶提取物能降低高尿酸血症小鼠尿酸水平，抗痛风性炎症，以及具有镇痛作用。关键词皂布叶；痛风；尿酸；痛风性炎症；镇痛r285.5 a 2095-0616（2017）17-40-04皂布叶为鼠李科植物尼泊尔鼠李rhamnusnapelensis（wall.）laws.的全株。别名叶青、纤序鼠李，泡角等。本品味涩；微甘；平。具有祛风除湿，利水消胀之功效。主治风湿关节痛，慢性肝炎，肝硬化腹水等病症。皂布叶为少数民族常用中草药，在民间常用来治疗风湿关节炎、湿疹疥疮和癣疾

3、等症，叶子常用来治疗毒蛇咬伤，水火烫伤等症。黄兴以大风药为主要原料制成的中药，经长期临床观察，发现其有提高免疫功能，软化骨刺的作用，对骨质增生、风湿病有效率达95%以上，且无毒副作用。为了-步开发利用皂布叶资源，在对该药材进行显微鉴别的基础上，对皂布叶抗痛风作用进行研究，报道如下。1材料与方法1.1材料醋酸地塞米松，重庆西部制药有限责任公司；秋水仙碱，西双版纳药业有限责任公司；罗通定片，山西云鹏制药有限公司；别嘌醇，重庆科瑞制药有限责任公司；次黄嘌呤和尿酸，sigma公司。msu的制备：取5g尿酸溶解于1000ml沸水中，调ph至7.4，缓慢搅拌，室温冷却，置于4冰箱重结晶24h，过滤得msu

4、。200高温灭菌，临用时配成100mg/ml的生理盐水混悬液备用。皂布叶水提物：皂布叶药材，粉碎，称取500g，加4l水提取3次，每次lh，过滤，滤液回收浓缩成膏，即得；试验药物。动物：昆明种小鼠，体重为1820g；wistar雄性大鼠，体重为200220g。由广西医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：scxk桂2009-0003。选取雄性昆明种小鼠，体重1822g，每组10只，随机分组，即阳性对照组（别嘌醇，20mg/kg体重）、模型组、对照组、皂布叶提取物组（低、中、高剂量组，分别相当于药材2.5、5.0、10.0g/kg体重）。大鼠随机分组，每组10只，即对照组、模型组、别嘌呤醇（20

5、mg/kg）阳性对照组、皂布叶水提物高、低剂量组（分别相当于药材10.0、2.5g/kg体重）。仪器：分光光度计（722型），上海第三分析仪器厂（型号rb-200）；智能热板仪，成都泰盟科技有限公司。1.2方法1.2.1皂布叶提取物对高尿酸血症小鼠尿酸的影响 腹腔注射（ig.）正常对照组和模型对照组注射等容量蒸馏水，1次，d，连续10d。最后一次给药1h后ig.次黄嘌呤600mg/kg，1h后眼球取血，3000r/min离心10min，取上清液，比色法测定尿酸浓度。1.2.2皂布叶提取物对正常小鼠尿酸的影响 腹腔注射（ig.），正常对照组和模型对照组注射等容量蒸馏水，1次，d，连续10d。最后

6、一次给药1h后眼球取血，3000r/min离心10min，取上清液，比色法测定尿酸浓度。1.2.3皂布叶提取物对大鼠足跖肿胀的作用 腹腔注射（ig.），正常对照组和模型对照组注射等容量蒸馏水，1次/d，連续10d。最后一次给药1h后，在大鼠右后足跖皮下注射msu（100mg/ml）0.15ml，观察并测定注射前和注射后大鼠右后足跖肿胀情况及其周径，1次/h，累计6h，计算肿胀率。足跖肿胀率=（造模后足趾周径-造模前足趾周径）/造模前足趾周径×100%。1.2.4皂布叶提取物对小鼠耳廓肿胀的作用 腹腔注射（ig.），正常对照组和模型对照组注射等容量蒸馏水，1次/d，连续10d。最后一次

7、给药后1h，用50l二甲苯在小鼠左耳正反两面涂抹，30min后处死小鼠，剪下双耳，用打孔器在同一部位打下8mm圆耳片，称重，计算肿胀度抑制率和肿胀率。肿胀率=（左耳重-右耳重），右耳重×100%。肿胀度抑制率=（给药组肿胀度-对照组肿胀度），对照组肿胀度×100%。1.2.5皂布叶提取物对小鼠痛阈的影响 腹腔注射（ig.），正常对照组和模型对照组注射等容量蒸馏水，1次/日，测定给药后60min痛阈值。1.2.6皂布叶提取物对小鼠扭体次数的影响 给药1h后，取0.6%醋酸溶液0.2ml腹腔注射，5min后统计小鼠10min内出现的扭体反应次数。1.3统计学处理采用spss 1

8、1.0系统软件处理数据，实验数据用（x±s）表示，采用单因素方差分析进行组间比较，p<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1皂布叶提取物对尿酸浓度的影响2.1.1皂布叶提取物对小鼠尿酸的影响 与对照组比较，模型对照组小鼠尿酸浓度显著升高，差异有统计学意义（p<0.01），说明高尿酸血症小鼠模型造模成功。实验结果表明，皂布叶提取物中、高剂量组和对照组比较，可明显降低高尿酸血症小鼠血清尿酸浓度，差异有统计学意义（p<0.05）。见表1。 2.1.2皂布叶提取物对正常小鼠尿酸的作用 与对照组比较，皂布叶提取物各剂量组对正常小鼠尿酸浓度无明显影响，差异无统计学意义（p&g

9、t;0.05）。见表2。2.2抗炎作用2.2.1皂布叶提取物对大鼠足跖肿胀的影响 实验研究表明，和模型对照组比较，在造模后1h内皂布叶提取物高、中剂量组，都能明显抑制msu引起的大鼠足跖肿胀，差异有统计学意义（p<0.05）。见表3。2.2.2皂布叶提取物对小鼠耳廓肿胀的作用 实验研究显示，和对照组比较，皂布叶提取物高、中剂量组均明显抑制小鼠耳廓肿胀，差异有统计学意义（p<0.05）。见表4。2.3镇痛作用2.3.1皂布叶提取物对小鼠痛阈的作用 皂布叶提取物中、高剂量组和对照组相比，能明显提高小鼠热板痛阈，差异有统计学意义（p<0.05）。见表5。2.3.2皂布叶提取物小鼠扭

10、体次数的作用 皂布叶提取物高、中剂量组和对照组比较，能明显减少由醋酸引起的小鼠扭体次数，差异有统计学意义（p<0.05）。见表6。3讨论痛风表现为血尿酸过高，是体内排泄紊乱或嘌呤代谢所引起的疾病，同时伴有结缔组织、关节和肾脏内尿酸钠结晶沉积，引发肾脏病变、关节炎症和畸形和肾结石等一系列反应，表现为红、肿、热、痛等症状。血清尿酸水平升高是痛风的生化基础。尿酸前体物质次黄嘌呤和腺嘌呤的含量增加或者肾小管尿酸的分泌受到抑制均会导致体内尿酸含量增高。本实验采用小鼠注射次黄嘌呤复制小鼠高尿酸血症模型，并给高尿酸血症小鼠灌胃皂布叶水提取物观察其对尿酸水平的影响。实验结果表明，皂布叶水提取物在高剂量和

11、中剂量时可以显著降低高尿酸血症小鼠的血液尿酸水平，对正常小鼠血清尿酸水平无显著影响。关节部位析出的msu晶体是造成痛风性关节炎的化学物质。因此本实验也使用了炎症介质msu溶液注射到大鼠足趾皮下，制备痛风性关节炎动物模型。实验研究表明，在造模后1 h内皂布叶提取物中、高剂量组，都能明显抑制msu引发的大鼠足跖肿胀。炎症的初期以毛细血管通透性增高、渗出、水肿为主。本实验采用非特异性致炎因子二甲苯涂抹在小鼠的耳廓，会导致耳廓肿胀。结果显示皂布叶提取物高剂量、中剂量组均显著抑制由二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀，表明皂布叶水提取物能缓解急性炎症反应。疼痛是炎症的一种症状，本实验采用了热板法和扭体法两种方法来观察皂布叶对炎症疼痛的缓解作用。实验结果表明皂布叶的高、中剂量均能显著抑制由热板