α-羟丁酸脱氢酶(α-HBD)检测试剂盒(速率比色法)

1、北京雷根生物技术有限公司a-羟丁酸脱氢酶（a-HBD）检测试剂盒（速率比色法）简介：a-羟丁酸脱氢酶（a-HBD）不是一个独立的特异酶，而是含有H亚基的乳酸脱氢酶同工酶LDi和LD2的总称，测定a-羟丁酸脱氢酶，其实际反映的是乳酸脱氢酶同工酶LDi和LD 2的活性，对诊断心肌疾病和肝脏疾病有一定意义。a-羟丁酸脱氢酶（a-HBD）检测试剂盒（速率法）其检测原理是a-羟丁酸脱氢酶催化 a-酮 丁酸还原成a-羟丁酸，同时使 NADH氧化成NAD +。其反应公式：a-酮丁酸 +NADH t a-羟丁酸 +NAD +。通过分光光度法（分光光度计和自动分析仪）检测吸光度，监测吸光度下降速率， 进而计 算

2、a-羟丁酸脱氢酶的活性。该试剂盒可用于检测血清、血浆、组织等样品的a-羟丁酸脱氢酶。50T试剂盒采用分光光度计可检测约 25个样本，如果采用自动分析仪检可检测约 142 个样本。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。组成:编号TE028350TStorage试剂(A): HBD assay buffer100ml4 C试剂(B): NADH solution8ml-20 C避光试剂（C）:酮丁酸溶液0.5ml-20 C避光使用说明书1份自备材料：1、蒸馏水2、离心管或小试管3、水浴锅4、比色杯5、分光光度计或自动分析仪操作步骤（仅供参考）:1、准备样品： 血浆、血清样品：血浆、血

3、清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20 C冻存，用于a-HBD的检测。 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20 C冻存，用于a-HBD的检测。 高活性样品：如果样品中含有较高活性的a-HBD，可以使用蒸馏水稀释。 （选做）样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的a-HBD含量。2、 配制 NADH 工作液：取适量的 NADH solution ，按 NADH solution: HBD assay buffer 混合，即为NADH工作液。4 C避光保存3月有效。3、 配制酮丁酸工作液：取适量的酮

4、丁酸溶液，按酮丁酸溶液：HBD assay buffer 的比例混合，即为酮丁酸工作液。4 C避光保存1周有效。4、分光光度计检测：按照下表设置空白管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。加入物（ml）空白管测定管蒸馏水0.04一待测样品（如血清等）一0.04NADH工作液1.61.6混匀，孵育。酮丁酸工作液0.080.08混匀，孵育，1.0cm光径，蒸馏水调零，读取吸光度 （A空白1和A测 定1）,后再读取吸光度（A空白2和A测定2）。5、自动分析仪检测：根据实验室的仪器，设定测定参数，亦可参考下列性能指标:主波

5、长340nm反应方法速率法反应温度37 C辅助波长405nm反应方向向下U/L消光系数6220加入物（讪）空白管测定管蒸馏水7一待测样品（如血清等）一7NADH工作液280280混匀，37 C孵育。酮丁酸工作液1414启动反应，延迟时间60s，检测时间180s，女口 AA/min>0.08，应用HBD assay buffer稀释样品后重新检测。计算：分光光度计计算公式：6a-HBD(U/L)= AA/min X(10 /6220) X1.72/0.04= AA/min X6913式中：AA/min= AA/min=( A 测定 1 A 测定 2)-( A 空白1 A空白 2)/2自动分析仪计算公式：6a-HBD(U/L)= AA/min X(10 /6220) X301/7= AA/min X6913注意事项：1、 红细胞中HBD含量高，样本采集后应在 2h内分离血清，溶血血清不能用。血清置于4 C酶活性可稳定1-2周。2、 枸橼酸盐、氟化物、草酸盐会抑制酶活性，EDTA(1mg/ml)、肝素(0.2mg/ml)不会抑制酶活性。3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。有效期：12个月有效。相关：编号名称CA0005氨卞青霉素溶液(Ampicilli n,50